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核糖體的離心分離

瀏覽次數(shù):6466 發(fā)布日期:2004-11-11  來源:本站 僅供參考,謝絕轉(zhuǎn)載,否則責任自負

1)概述

生物體細胞中除極少數(shù)細胞(如精子細胞)外,幾乎所有細胞都含有核糖體(ribosome)。核糖體或成群或單個地分布在胞質(zhì)中或附著在某些膜上(如內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜)。
電鏡觀察到核糖體是沒有包膜的電子致密顆粒,呈圓或橢圓形,平均直徑200A,哺乳動物的真核細胞中核糖體沉降系數(shù)為80S,分子量為500萬。在原核細胞中核糖體沉降系數(shù)為70S,分子量為380萬。
核糖體的主要成分是核糖核酸(RNA)和蛋白質(zhì),構成核糖體的核酸為核糖體核糖核酸(rRNA),分子量很大,約占細胞內(nèi)RNA總量的75%以上。rRNA與蛋白質(zhì)結合成核糖體。核糖體中rRNA與蛋白質(zhì)的含量大致相等,但在蛋白質(zhì)合成中所起的作用不同。rRNA使mRNA與tRNA的相互作用穩(wěn)定,而核蛋白顆粒上的蛋白質(zhì)提供蛋白質(zhì)合成過程中所需要的酶。
目前已經(jīng)知道在真核細胞中rRNA是在核仁內(nèi)合成的,核仁中含有較大的rRNA的前體分子即45S RNA。核仁的原纖維可能就是45S RNA的形態(tài)表現(xiàn)。45SRNA可裂解為28S RNA和18S RNA,分別與蛋白質(zhì)結合成為核糖體的大,小亞基,它們是核仁區(qū)顆粒的形態(tài)基礎,亞單位進入胞質(zhì)后,可暫時儲存在胞質(zhì)中,當需要合成蛋白質(zhì)時,這些亞單位就組合成核糖體。在蛋白質(zhì)合成完畢后,核糖體再分解成為亞單位儲存。

2)核糖體組成模式:

3)核糖體離心分離方法簡介

1.分離原核細胞70S核糖體亞基:
大亞基50S
小亞基30S
轉(zhuǎn)頭:甩平轉(zhuǎn)頭日立P65ST或P56ST
梯度:10%-40%蔗糖線性梯度
方法:速度--區(qū)帶密度梯度離心法
離心參數(shù)50,000rpm,2.5小時,4℃

2.分離真核細胞內(nèi)80S核糖體亞基
大亞基60S
小亞基40S
轉(zhuǎn)頭:P40ST(6*13ml)
梯度:10%~30% 蔗糖線性梯度
方法:速率區(qū)帶密度梯度離心
離心參數(shù):40000rpm,4.5小時,4℃。

3.分離原核細胞內(nèi)70S核糖體亞基
轉(zhuǎn)頭:P56ST
梯度:15%~40%蔗糖線性梯度。
方法:等密度離心法。
離心參數(shù):48,000rpm,6小時,4℃


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