離心分離PCR后樣品
瀏覽次數(shù):2213 發(fā)布日期:2008-12-30
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離心分離PCR后樣品
用Hitachi CR—G離心機,R10H轉(zhuǎn)頭分離PCR后(DNA或其他生物大分子)樣品
A液:20%PEG6000,2.5M NaCl 及Isopropanol (異丙醇)
分離步驟:
1.用384孔板或96孔板,按比例增加容量,在PCR儀中擴增反應(yīng)后
2.每孔內(nèi)含10ul PCR后樣品及10ul A液
3.微板先用搖床充分混勻。
4.對稱加入P10H轉(zhuǎn)頭(二塊或四塊,384孔板)
5.離心10,000rpm(約13,000xg)×10分,4℃,加速“9”,減速“9”
6.取出微孔板
7.用Kimtowels 紙貼在R10轉(zhuǎn)頭放微板架的內(nèi)壁
8.去掉微板蓋并把微板倒過來放入R10H 轉(zhuǎn)頭微板架。
9.預(yù)置轉(zhuǎn)速1000rpm,10分,4℃,加速“9”,減速“9”,在速度顯示到達(dá)300rpm時停車。
10.從微板中取出轉(zhuǎn)頭,沉淀可作出進(jìn)一步實驗。
特點:1. 轉(zhuǎn)速高(一般微板轉(zhuǎn)頭都在5000rpm,4000xg以下)回收率高。
2. 沉淀緊,反向低速離心后上清全部被紙吸干。
3. 用于DNA測序前樣品制備最合適。