RealTime ready自由定制您的qPCR 檢測方法
RealTime ready自由定制您的 qPCR 檢測方法
讓多重基因定量不再受約束
RealTime ready qPCR 分析方法是羅氏診斷公司應(yīng)用科學(xué)部于2010年最新推出的即用型qPCR定制檢測方法，可快速靈敏地一次性定量6-384個基因的表達情況。您可于免費的RealTime ready 在線配置工具上，自由選擇人類相關(guān)靶基因并進行定制型多孔檢測板的配置。除了通過基因名稱搜索，您還可以直接從信號通路或功能基因組中直觀地選擇靶基因，整個定制過程就像您在網(wǎng)上購物一般，隨心所欲，簡單便捷。
檢測技術(shù)
RealTime ready 檢測基于羅氏獨有的通用水解探針庫Universal ProbeLibrary (UPL) 技術(shù)。UPL 探針是短序列的水解探針，5’ 末端標(biāo)記熒光素(FAM)，3’ 末端標(biāo)記淬滅染料。根據(jù)短片段序列在生物基因組中的高重復(fù)特性，每個探針可與接近 7000 個轉(zhuǎn)錄子結(jié)合，每個轉(zhuǎn)錄子可被約 16 個不同的UPL探針?biāo)鶛z測到。因此，僅需要165條短的水解探針，即可覆蓋約99%的人類、小鼠、大鼠、果蠅、擬南芥等常見模式生物的基因組。為保持qPCR 探針雜交至模板DNA上所需的特異性及熔解溫度，特有的Locked Nucleic Acids (LNA) 結(jié)構(gòu)被整合入每條 UPL 探針序列中 (圖 3)。因此，標(biāo)準(zhǔn) PCR 條件下，高度特異性的 RealTime ready 檢測可用于所有實時熒光 PCR 系統(tǒng)中。
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RealTime ready qPCR 分析方法
每種 RealTime ready qPCR 分析方法均含有對應(yīng)于您的靶基因的特異性引物及UPL水解探針。每種分析方法在設(shè)計后都使用通用生物學(xué)樣品材料，以標(biāo)準(zhǔn)PCR條件在LightCycler® 480上進行過測試。
每種分析方法都能滿足以下嚴(yán)格標(biāo)準(zhǔn)：
n 線性動態(tài)范圍至少為 3 個數(shù)量級。
n PCR 擴增效率為 2.0 ± 0.2。
n 標(biāo)準(zhǔn)曲線 R2 值為 0.99 至 1.00。
n 擴增特異性高，凝膠分析中無副產(chǎn)物生成。
正如所有 UPL 檢測，RealTime ready 檢測可成功用于所有實時熒光 PCR 儀上。由于僅需加入模板和預(yù)混液，RealTime ready可以大量節(jié)省您合成引物和熒光探針?biāo)璧臅r間，并且一次性完成您任意定制的靶基因組合的檢測，可以獲得大量有特別針對性的實驗數(shù)據(jù)，非常適合用于表達譜芯片的下游驗證等中等通量，且具有明確目標(biāo)性的應(yīng)用。
免費的在線設(shè)計工具
可使用在線的免費軟件Probe Finder進行 RealTime ready 分析方法設(shè)計。有以下三種靶基因的導(dǎo)入方式。
“Search by Keyword”支持通過基因名稱、基因標(biāo)志、公共訪問標(biāo)識、生物學(xué)過程、蛋白功能或最多 5 個關(guān)鍵詞進行搜索。通過“Batch Upload”功能，可最多進行384個不同訪問標(biāo)識的搜索。
“Search by Pathway”從細胞信號通路的直觀圖示中進行檢測目標(biāo)的選擇。
“Search by Focus Panel”從大型基因家族如 GPCR、蛋白激酶，或功能相關(guān)群組如轉(zhuǎn)錄因子或離子通道等的預(yù)選擇列表中進行檢測目標(biāo)選擇。 |
凝膠分析中未檢測出副產(chǎn)物
 圖 1：應(yīng)用RealTime ready 檢測48個人類 GPCR 家族的基因。
5個數(shù)量級稀釋檢測擴增線性，顯示PCR效率為99.2 至 100 %。
 圖 2：對12 個人凋亡信號通路檢測，均進行5個數(shù)量級稀釋并作線性圖（Cp vs 對數(shù)濃度）。  圖 3：UPL 探針整合入 LNA 核苷酸. Locked Nucleic Acids 是一類核苷酸類似物，可增強堿基堆積及骨架重組結(jié)構(gòu)，顯著增強核酸分子的熱穩(wěn)定性及雙螺旋結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性。 |
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針對 LightCycler® 480 實時熒光PCR系統(tǒng)的RealTime ready 定制型
多孔檢測板
LightCycler® 480 Multiwell Plates 96 或 384 孔定制型多孔檢測板可根據(jù)您的需要進行 RealTime ready 方法選定。有大量不同的配置板式（圖 4、5）可用。96 孔板預(yù)置及干燥處理后，支持PCR反應(yīng)容積為 20μl，384 孔板為 10ul；檢測時僅需添加 cDNA 與 RealTime ready DNA Probes Master，即可快速獲得檢測結(jié)果，檢測結(jié)果真實可靠。
每塊板最多保留3個孔用于您所選定的內(nèi)參基因檢測。而且，大多數(shù)板式的布局格式均
具有預(yù)置的誤差檢測的設(shè)定。
當(dāng)然，您也可以訂購單個基因的分析方法，由羅氏為您設(shè)計并合成相應(yīng)的 RealTime ready Assay。
您也可以訪問，通過觀看簡短的視頻演示獲取詳細信息。 |
圖 4：RealTime ready Custom Panel 96-16+
 圖 5：RealTime ready Custom Panel 384-64+ |
標(biāo)簽：
RealTime ready qPCR 多重基因定量 羅氏診斷
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