高效液相色譜法分析頭孢硫脒
本品為（6R，7R）-3[（乙�；┘谆鵠-7-[α-（N，N’-二異丙基脒硫基）-乙酰胺基]8-氧代-5-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[4.2.0]辛-2-烯-2-甲酸內(nèi)銨鹽。按無水物計(jì)算，含C19H28N4O6S2不得少于94.0%。
【性狀】 本品為白色或類白色結(jié)晶性粉末；幾乎無臭，有引濕性。
本品在水中極易溶解，在乙醇中微溶，在丙酮、氯仿或乙醚中不溶。
比旋度 取本品，精密稱定，加水溶解并制成每1ml中含10mg的溶液，依法測(cè)定（中國藥典2000年版二部附錄Ⅵ E），比旋度為135°～ 145°。
【鑒別】 （1）在含量測(cè)定項(xiàng)下記錄的色譜圖中，供試品主峰的保留時(shí)間應(yīng)與頭孢硫脒對(duì)照品主峰的保留時(shí)間一致。
（2）取本品適量，加水溶解并制成每1ml中約含20mg的溶液，作為供試品溶液；另取頭孢硫脒對(duì)照品適量，加水溶解并制成每1ml中約含20mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；取對(duì)照品溶液和供試品溶液等量混合，作為混合溶液。照薄層色譜法（中國藥典2000年版二部附錄VB）試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各1μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板[取硅膠G2.5g，加含1%羧甲基纖維素鈉的磷酸鹽緩沖液（pH5.8）適量，調(diào)漿制板，經(jīng)105℃活化1小時(shí)，放入干燥器中備用]上，以新鮮配制的甲醇-異丙醇-磷酸鹽緩沖液（pH5.8）（7:2:1）為展開劑，展開后，晾干，于100℃加熱30分鐘，置碘蒸氣中顯色檢視。供試品溶液所顯主斑點(diǎn)的顏色與位置應(yīng)與對(duì)照品溶液的主斑點(diǎn)相同，混合溶液應(yīng)顯一個(gè)斑點(diǎn)。
（3）本品的紅外光吸收?qǐng)D譜應(yīng)與對(duì)照品的圖譜一致 （中國藥典2000年版二部附錄Ⅳ C）。
以上（1）、（2）兩項(xiàng)可選做一項(xiàng)。
【檢查】 結(jié)晶性 取本品少許，依法檢查（中國藥典2000年版二部附錄Ⅸ D），應(yīng)符合規(guī)定。
酸度 取本品，加水制成每1 ml中含0.1g的溶液，依法測(cè)定（中國藥典2000年版二部附錄Ⅵ H），pH值應(yīng)為4.0～6.0。
溶液的澄清度與顏色取本品5份，各0.6g分別加水5ml溶解后，溶液應(yīng)澄清無色；如顯渾濁，與1號(hào)濁度標(biāo)準(zhǔn)液（中國藥典2000年版二部附錄ⅨB）比較，均不得更濃；如顯色，與黃色或黃綠色6號(hào)標(biāo)準(zhǔn)比色液（中國藥典2000年版二部附錄Ⅸ A 第一法）比較，均不得更深。
水分 取本品，照水分測(cè)定法（中國藥典2000年版二部附錄Ⅷ M第一法A）測(cè)定，含水分不得過1.5%。
有關(guān)物質(zhì)取本品適量，加流動(dòng)相制成每1ml中含0.5mg的溶液作為供試品溶液，精密量取適量，加流動(dòng)相稀釋成每1ml中含5μg的溶液作為對(duì)照溶液。照含量測(cè)定項(xiàng)下的色譜條件測(cè)定。量取對(duì)照溶液10μl，注入液相色譜儀，調(diào)節(jié)檢測(cè)器靈敏度，使主成分拖尾峰（tailingpeak）。前者少見。>液相色譜色譜峰的峰高約為滿量程的20%，再準(zhǔn)確量取上述兩種溶液各10ml，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主成分峰保留時(shí)間的2倍。供試品溶液的色譜圖中如顯雜質(zhì)峰，單個(gè)雜質(zhì)峰的基線構(gòu)成之面積稱峰面積。A＝×σ×h＝2.507σh＝1.064Wh/2h>峰面積不得大于對(duì)照溶液主成分峰的峰面積（1.0%），各雜質(zhì)峰峰面積總和（小于對(duì)照溶液主成分峰峰面積1/10的雜質(zhì)峰不計(jì)）不得大于對(duì)照溶液主成分峰峰面積的2.5倍（2.5%）。
二氯甲烷 照氯相色譜法（中國藥典2000年版二部附錄V E） 測(cè)定，
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用6%氰丙基苯-94%二甲基硅氧烷基共聚物為固定相的毛細(xì)管色譜柱（30m×0.53mm,涂層厚3.0μm），柱溫為30℃（每次進(jìn)樣測(cè)定后，柱溫升至100℃維持8分鐘）。稱取二氯甲烷、丙酮和乙醇各適量，加水制成每1ml中各含0.4mg的溶液,作為分離度溶液，量取1μl，注入氣相色譜儀。二氯甲烷峰與乙醇峰、丙醇峰的分離度均應(yīng)符合規(guī)定。
取二氯甲烷適量，精密稱定，加水定量稀釋制成每1ml中含40m g的溶液，作為對(duì)照溶液；另取本品約0.1g，精密稱定，精密加水2ml，振搖使溶解，作為供試品溶液。精密量取上述兩種溶液各1μl，注入氣相色譜儀，記錄色譜圖。供試品溶液的色譜圖中如顯與二氯甲烷對(duì)照溶液相應(yīng)的色譜峰，按內(nèi)標(biāo)法以峰面積計(jì)算，含二氯甲烷的量不得過0.06%。
細(xì)菌內(nèi)毒素 取本品，依法檢查（中國藥典2000年版二部附錄Ⅺ E），每1mg頭孢硫脒中含內(nèi)毒素的量應(yīng)小于0.075EU。
無菌 取本品，分別加入100ml 0.9%無菌氯化鈉溶液中使溶解，用薄膜過濾法處理后，依法檢查（中國藥典2000年版二部附錄ⅪH），應(yīng)符合規(guī)定。
【含量測(cè)定】 照高效液相色譜法（中國藥典2000年版二部附錄Ⅴ D）測(cè)定。
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以磷酸鹽緩沖液（取無水磷酸氫二鈉2.76g,枸櫞酸1.29g，加水溶解并稀釋成1000ml）-乙腈（80：20）為流動(dòng)相；檢測(cè)波
長為254nm。理論板數(shù)按頭孢硫脒峰計(jì)算應(yīng)不低于3000；取頭孢硫脒對(duì)照品適量，加0.1mol/l鹽酸溶液溶解并稀釋成每1ml中含頭孢硫脒2mg的溶液,置80℃水浴中加熱10分鐘，放冷，濾過，取續(xù)濾液10μl注入液相色譜儀，頭孢硫脒峰與其降解產(chǎn)物峰的分離度應(yīng)符合規(guī)定。
測(cè)定法 取本品適量，精密稱定，加水溶解并定量稀釋制成每1ml中含頭孢硫脒0.1mg的溶液，取10μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取頭孢硫脒對(duì)照品適量，同法測(cè)定。按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算供試品中C19H28N4O6S2的含量。
【性狀】 本品為白色或類白色結(jié)晶性粉末；幾乎無臭，有引濕性。
本品在水中極易溶解，在乙醇中微溶，在丙酮、氯仿或乙醚中不溶。
比旋度 取本品，精密稱定，加水溶解并制成每1ml中含10mg的溶液，依法測(cè)定（中國藥典2000年版二部附錄Ⅵ E），比旋度為135°～ 145°。
【鑒別】 （1）在含量測(cè)定項(xiàng)下記錄的色譜圖中，供試品主峰的保留時(shí)間應(yīng)與頭孢硫脒對(duì)照品主峰的保留時(shí)間一致。
（2）取本品適量，加水溶解并制成每1ml中約含20mg的溶液，作為供試品溶液；另取頭孢硫脒對(duì)照品適量，加水溶解并制成每1ml中約含20mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；取對(duì)照品溶液和供試品溶液等量混合，作為混合溶液。照薄層色譜法（中國藥典2000年版二部附錄VB）試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各1μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板[取硅膠G2.5g，加含1%羧甲基纖維素鈉的磷酸鹽緩沖液（pH5.8）適量，調(diào)漿制板，經(jīng)105℃活化1小時(shí)，放入干燥器中備用]上，以新鮮配制的甲醇-異丙醇-磷酸鹽緩沖液（pH5.8）（7:2:1）為展開劑，展開后，晾干，于100℃加熱30分鐘，置碘蒸氣中顯色檢視。供試品溶液所顯主斑點(diǎn)的顏色與位置應(yīng)與對(duì)照品溶液的主斑點(diǎn)相同，混合溶液應(yīng)顯一個(gè)斑點(diǎn)。
（3）本品的紅外光吸收?qǐng)D譜應(yīng)與對(duì)照品的圖譜一致 （中國藥典2000年版二部附錄Ⅳ C）。
以上（1）、（2）兩項(xiàng)可選做一項(xiàng)。
【檢查】 結(jié)晶性 取本品少許，依法檢查（中國藥典2000年版二部附錄Ⅸ D），應(yīng)符合規(guī)定。
酸度 取本品，加水制成每1 ml中含0.1g的溶液，依法測(cè)定（中國藥典2000年版二部附錄Ⅵ H），pH值應(yīng)為4.0～6.0。
溶液的澄清度與顏色取本品5份，各0.6g分別加水5ml溶解后，溶液應(yīng)澄清無色；如顯渾濁，與1號(hào)濁度標(biāo)準(zhǔn)液（中國藥典2000年版二部附錄ⅨB）比較，均不得更濃；如顯色，與黃色或黃綠色6號(hào)標(biāo)準(zhǔn)比色液（中國藥典2000年版二部附錄Ⅸ A 第一法）比較，均不得更深。
水分 取本品，照水分測(cè)定法（中國藥典2000年版二部附錄Ⅷ M第一法A）測(cè)定，含水分不得過1.5%。
有關(guān)物質(zhì)取本品適量，加流動(dòng)相制成每1ml中含0.5mg的溶液作為供試品溶液，精密量取適量，加流動(dòng)相稀釋成每1ml中含5μg的溶液作為對(duì)照溶液。照含量測(cè)定項(xiàng)下的色譜條件測(cè)定。量取對(duì)照溶液10μl，注入液相色譜儀，調(diào)節(jié)檢測(cè)器靈敏度，使主成分拖尾峰（tailingpeak）。前者少見。>液相色譜色譜峰的峰高約為滿量程的20%，再準(zhǔn)確量取上述兩種溶液各10ml，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主成分峰保留時(shí)間的2倍。供試品溶液的色譜圖中如顯雜質(zhì)峰，單個(gè)雜質(zhì)峰的基線構(gòu)成之面積稱峰面積。A＝×σ×h＝2.507σh＝1.064Wh/2h>峰面積不得大于對(duì)照溶液主成分峰的峰面積（1.0%），各雜質(zhì)峰峰面積總和（小于對(duì)照溶液主成分峰峰面積1/10的雜質(zhì)峰不計(jì)）不得大于對(duì)照溶液主成分峰峰面積的2.5倍（2.5%）。
二氯甲烷 照氯相色譜法（中國藥典2000年版二部附錄V E） 測(cè)定，
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用6%氰丙基苯-94%二甲基硅氧烷基共聚物為固定相的毛細(xì)管色譜柱（30m×0.53mm,涂層厚3.0μm），柱溫為30℃（每次進(jìn)樣測(cè)定后，柱溫升至100℃維持8分鐘）。稱取二氯甲烷、丙酮和乙醇各適量，加水制成每1ml中各含0.4mg的溶液,作為分離度溶液，量取1μl，注入氣相色譜儀。二氯甲烷峰與乙醇峰、丙醇峰的分離度均應(yīng)符合規(guī)定。
取二氯甲烷適量，精密稱定，加水定量稀釋制成每1ml中含40m g的溶液，作為對(duì)照溶液；另取本品約0.1g，精密稱定，精密加水2ml，振搖使溶解，作為供試品溶液。精密量取上述兩種溶液各1μl，注入氣相色譜儀，記錄色譜圖。供試品溶液的色譜圖中如顯與二氯甲烷對(duì)照溶液相應(yīng)的色譜峰，按內(nèi)標(biāo)法以峰面積計(jì)算，含二氯甲烷的量不得過0.06%。
細(xì)菌內(nèi)毒素 取本品，依法檢查（中國藥典2000年版二部附錄Ⅺ E），每1mg頭孢硫脒中含內(nèi)毒素的量應(yīng)小于0.075EU。
無菌 取本品，分別加入100ml 0.9%無菌氯化鈉溶液中使溶解，用薄膜過濾法處理后，依法檢查（中國藥典2000年版二部附錄ⅪH），應(yīng)符合規(guī)定。
【含量測(cè)定】 照高效液相色譜法（中國藥典2000年版二部附錄Ⅴ D）測(cè)定。
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以磷酸鹽緩沖液（取無水磷酸氫二鈉2.76g,枸櫞酸1.29g，加水溶解并稀釋成1000ml）-乙腈（80：20）為流動(dòng)相；檢測(cè)波
長為254nm。理論板數(shù)按頭孢硫脒峰計(jì)算應(yīng)不低于3000；取頭孢硫脒對(duì)照品適量，加0.1mol/l鹽酸溶液溶解并稀釋成每1ml中含頭孢硫脒2mg的溶液,置80℃水浴中加熱10分鐘，放冷，濾過，取續(xù)濾液10μl注入液相色譜儀，頭孢硫脒峰與其降解產(chǎn)物峰的分離度應(yīng)符合規(guī)定。
測(cè)定法 取本品適量，精密稱定，加水溶解并定量稀釋制成每1ml中含頭孢硫脒0.1mg的溶液，取10μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取頭孢硫脒對(duì)照品適量，同法測(cè)定。按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算供試品中C19H28N4O6S2的含量。
標(biāo)簽：
液相色譜
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