三聚氰胺HPLC檢測(cè)方法之固相萃取(SPE)法
瀏覽次數(shù):2238 發(fā)布日期:2009-9-7
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1. 依據(jù):GB/T 22388—2008
2. 原理:試樣用三氯乙酸溶液-乙腈提取,經(jīng)陽離子交換固相萃取柱凈化后,用高效液相色譜測(cè)定,外標(biāo)法定量。
3. 試劑與材料:除非另有說明,所有試劑均為分析純,水為GB/T 6682規(guī)定的一級(jí)水。
3.1甲醇:色譜純;
3.2乙腈:色譜純;
3.3氨水:含量為25%~28%;
3.4三氯乙酸;
3.5檸檬酸。
3.6辛烷磺酸鈉:色譜純;
3.7甲醇水溶液:準(zhǔn)確量取50 mL 甲醇和50 mL 水,混勻后備用;
3.8三氯乙酸溶液(1%):準(zhǔn)確稱取10 g 三氯乙酸于1 L 容量瓶中,用水溶解并定容至刻度,混勻后備用;
3.9氨化甲醇溶液(5%):準(zhǔn)確量取5 mL 氨水和95 mL 甲醇,混勻后備用;
3.10離子對(duì)試劑緩沖液:準(zhǔn)確稱取2.10 g 檸檬酸和2.16 g 辛烷磺酸鈉,加入約980 mL 水溶解,調(diào)節(jié)pH 至3.0 后,定容至1L 備用。
3.11三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)品:CAS 108-78-01,純度大于99.0%;
3.12三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液:準(zhǔn)確稱取100 mg(精確到0.1 mg)三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)品于100 mL 容量瓶中,用甲醇水溶液(3.7)溶解并定容至刻度,配制成濃度為1 mg/mL 的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液,于4℃避光保存。
3.13 陽離子交換固相萃取柱:混合型陽離子交換固相萃取柱,基質(zhì)為苯磺酸化的聚苯乙烯-二乙烯基苯高聚物,60 mg,3 mL,或相當(dāng)者。
3.14 定性濾紙。
3.15 微孔濾膜:0.2 μm,有機(jī)相。
3.16 氮?dú)猓杭兌却笥诘扔?/SPAN>99.999%
4. 儀器和設(shè)備
4.1 高效液相色譜(HPLC)儀:配有紫外檢測(cè)器或二極管陣列檢測(cè)器。
4.2 分析天平:感量為0.00001 g和0.01 g。
4.3 離心機(jī):轉(zhuǎn)速不低于10000 r/min。
4.4 天津恒奧超聲波提取器。HS,HU系列
4.5 天津恒奧固相萃取裝置。HSE-12D
4.6 天津恒奧氮吹儀。HGC,HSC系列
4.7 天津恒奧渦旋振蕩器。HMS-350
4.8 天津恒奧真空泵。HPD-25
4.9 天津恒奧精密氣體穩(wěn)流調(diào)節(jié)閥。
4.10 具塞塑料離心管:50 mL。
5. 樣品處理
5.1 提取
稱。ㄒ簯B(tài)奶、奶粉、酸奶、冰淇淋和奶糖等)2 g(精確至0.01 g)試樣于50 mL具塞塑料離心管中,加入15 mL三氯乙酸溶液(3.8)和5 mL乙腈,超聲提取10 min,再振蕩提取10 min后,以不低于10000 r/min離心30 min。上清液經(jīng)三氯乙酸溶液潤(rùn)濕的濾紙過濾后,用三氯乙酸溶液定容至25 mL,移取5 mL濾液,加入5 mL水混勻后做待凈化液。
注:若樣品中脂肪含量較高,可以用三氯乙酸溶液飽和的正己烷液-液分配除脂后再用SPE柱凈化。
5.2 活化
依次用3 mL 甲醇、5 mL 水活化(3.13)陽離子交換固相萃取柱。旋轉(zhuǎn)固相萃取裝置前的精密氣體穩(wěn)流調(diào)節(jié)閥使洗液流速不超過1 mL/min
5.3 上樣
將5.1中的待凈化液轉(zhuǎn)移至固相萃取柱(5.2)中。
5.4 淋洗
依次用3 mL水和3 mL甲醇洗滌,抽至近干后,
5.5 洗脫
用6 mL氨化甲醇溶液(3.9)洗脫,用試管收集洗脫液。整個(gè)固相萃取過程流速不超過1 mL/min。5.6 濃縮
洗脫液于50℃下用氮?dú)獯蹈,殘留物(相?dāng)于0.4 g樣品)用1 mL流動(dòng)相定容,渦旋混合1 min,過微孔濾膜后,供HPLC測(cè)定。
6. 高效液相色譜測(cè)定
HPLC 參考條件
a) 色譜柱:C8柱,250 mm×4.6 mm(i.d.),5 μm,或相當(dāng)者;
C18柱,250 mm×4.6 mm(i.d.),5 μm,或相當(dāng)者。
b) 流動(dòng)相:C8柱,離子對(duì)試劑緩沖液(3.2.10)-乙腈(85+15,體積比),混勻。
C18柱,離子對(duì)試劑緩沖液(3.2.10)-乙腈(90+10,體積比),混勻。
c) 流速:1.0 mL/min。
d) 柱溫:40℃。
e) 波長(zhǎng):240 nm。
f) 進(jìn)樣量:20 μL。
7. 分析
用GB/T 22388—2008標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)方法分析,使用天津恒奧的設(shè)備測(cè)得樣品的回收率結(jié)果如下:
添加水平(mg/Kg) 回收率
空白
2 116%
4 108%
6 92%
8 96%
由上表可以看出:使用天津恒奧設(shè)備處理樣品,不僅可以提高分析樣品的速度而且還可以得到滿意的回收率。