反相液相色譜柱不是LC-MS/MS分析的主流
對于LC-MS/MS色譜柱人們的慣性思維通常是由反相液相色譜柱開始研發(fā), 產(chǎn)生這種慣性思維是因?yàn)槌Ｒ?guī)高效液相色譜分析中C18等反相高效液相色譜柱占有統(tǒng)治地位,另一方面是色譜公司不懂LC-MS/MS分析誤導(dǎo)用戶的結(jié)果。這慣性思維是不正確的!
LC-MS/MS分析的實(shí)用戰(zhàn)略和HPLC有很大不同! LC-MS/MS分析的方法的選擇性最重要!
色譜公司不能簡單地將現(xiàn)成的反相液相色譜填料裝成5cm x 2.1mm短柱充當(dāng)LC-MS/MS柱使用, 但事實(shí)上幾乎所有色譜公司都是這樣做的。這樣的反相液相色譜LC-MS/MS柱有三個明顯的弱點(diǎn):
(1) 許多極性化合物難以保留，質(zhì)譜靈敏度差。
許多重要的物質(zhì)，如抗癌藥物DTIC, 抗痛藥物河豚毒素，污染物質(zhì)三聚氰胺, 中草藥中糖肽等非常極性, 在反相液相色譜柱上沒有保留。還有許多的化合物比較極性, 使用少量的甲醇或乙腈就從反相液相色譜柱上洗脫。在藥物代謝研究中, 觀察到許多化合物自己疏水, 但代謝產(chǎn)物親水的情況。甲醇或乙腈含量低, 離子化程度低, 質(zhì)譜靈敏度差。所謂水相C18柱在LC-MS/MS分析中沒有價值。
(2) 用常規(guī)反相色譜填料裝成2.1mm內(nèi)徑的色譜柱在LC-MS/MS和LC/MS應(yīng)用中常陷入記憶效應(yīng)（Carryover Effect）的“陷阱”
LC-MS/MS和LC/MS應(yīng)用中另一個重大問題是記憶效應(yīng)（Carryover Effect）。記憶效應(yīng)是指在進(jìn)樣后, 再進(jìn)一針空白在同樣的保留時間仍然觀察到化合物峰。記憶效應(yīng)的副作用是明顯的: 它可能人為地增加下一樣本的MRM信號, 影響定量分析的精密度和準(zhǔn)確度。US FDA Bioanalytical Regulatory Guidances限制最高校準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)(highest calibration standard) 的記憶效應(yīng)不能超過20 ％最低校準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)(lowest calibration standard)MRM信號的20%。
由于大部分色譜公司都使用現(xiàn)成的反相液相色譜填料簡單地裝成5cm x 2.1mm短柱充當(dāng)LC-MS/MS柱, 在許多情況下，使記憶效應(yīng)強(qiáng), 校準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍必須人為縮短, 或不得已在進(jìn)樣后, 再進(jìn)一針甚至兩針空白最小化記憶效應(yīng), 然后進(jìn)下一個樣品。所有這些嚴(yán)重地降低了生產(chǎn)效率。
(3) 峰形拖尾或扭曲
因?yàn)榛钚怨璐蓟鶡o法完全封閉, 許多堿性化合物在幾乎所有色譜公司的反相液相色譜柱上面有明顯的峰形拖尾。這種峰形拖尾是記憶效應(yīng)的一個重要的根源。
另一方面，使用不正確方法過分封閉致使一些酸性和兩性化合物分離效果不佳, 特別是出現(xiàn)峰失真和分裂現(xiàn)象。
Chrom-Matrix公司認(rèn)為LC-MS/MS色譜柱和色譜方法的第一選擇是親水色譜(Hydrophilic Interaction)! 親水色譜使用乙腈作為弱溶劑和水為強(qiáng)溶劑, 徹底解決質(zhì)譜靈敏度差, 記憶效應(yīng)等問題。疏水化合物首先流出, 然后是親水化合物。不僅徹底解決極性化合物難以保留的問題, 而且同時分析了疏水化合物, 也提高了疏水化合物質(zhì)譜靈敏度。峰形拖尾問題也獲得徹底解決。此外，乙腈提取液不需要蒸發(fā)和重新溶解，從而節(jié)省了大量的時間。另一方面, 反相LC-MS/MS色譜柱和色譜方法仍然重要, 不僅是一些重要的中性化合物如抗癌藥物紫杉醇, 抗免疫器官植入藥物FK 506和雷帕霉素(rapamycin), 降脂藥等必須使用反相LC-MS/MS色譜柱和色譜方法, 還因?yàn)榇蠖鄶?shù)客戶習(xí)慣于反相LC-MS/MS色譜柱和色譜方法。即使這樣反相液相色譜填料也必須通過處理才能裝成5cm x 2.1mm短柱充當(dāng)LC-MS/MS柱使用。Chrom-Matrix公司研發(fā)出InnovationTM 反相液相色譜填料通過超臨界流體技術(shù)封端最大程度封閉活性硅醇基, 非常好的解決了堿性化合物峰形拖尾的問題,然后通過特殊處理最大程度消除了記憶效應(yīng)。
Chrom-Matrix公司成功研發(fā)了三種親水LC-MS/MS色譜柱和五種反相LC-MS/MS色譜柱, 而且為客戶成功研發(fā)了數(shù)百個LC-MS/MS應(yīng)用。Chrom-Matrix公司至成立起，就憑著領(lǐng)先一代的觀念、技術(shù)和產(chǎn)品贏得美國FDA、美國能源部、美國農(nóng)業(yè)部、國際禁毒組織、許多歐美制藥集團(tuán)、第三方檢測機(jī)構(gòu)、大學(xué)及研究機(jī)構(gòu)等顧客的由衷歡迎。
Chrom-Matrix公司的目標(biāo)就是幫助客戶開發(fā), 驗(yàn)證和應(yīng)用先進(jìn), 正確, 精確, 真實(shí), 像巖石一般堅(jiān)實(shí), 同時又靈敏, 快速, 便宜的LC-MS/MS定量分析方法。
LC-MS/MS分析的實(shí)用戰(zhàn)略和HPLC有很大不同! LC-MS/MS分析的方法的選擇性最重要!
色譜公司不能簡單地將現(xiàn)成的反相液相色譜填料裝成5cm x 2.1mm短柱充當(dāng)LC-MS/MS柱使用, 但事實(shí)上幾乎所有色譜公司都是這樣做的。這樣的反相液相色譜LC-MS/MS柱有三個明顯的弱點(diǎn):
(1) 許多極性化合物難以保留，質(zhì)譜靈敏度差。
許多重要的物質(zhì)，如抗癌藥物DTIC, 抗痛藥物河豚毒素，污染物質(zhì)三聚氰胺, 中草藥中糖肽等非常極性, 在反相液相色譜柱上沒有保留。還有許多的化合物比較極性, 使用少量的甲醇或乙腈就從反相液相色譜柱上洗脫。在藥物代謝研究中, 觀察到許多化合物自己疏水, 但代謝產(chǎn)物親水的情況。甲醇或乙腈含量低, 離子化程度低, 質(zhì)譜靈敏度差。所謂水相C18柱在LC-MS/MS分析中沒有價值。
(2) 用常規(guī)反相色譜填料裝成2.1mm內(nèi)徑的色譜柱在LC-MS/MS和LC/MS應(yīng)用中常陷入記憶效應(yīng)（Carryover Effect）的“陷阱”
LC-MS/MS和LC/MS應(yīng)用中另一個重大問題是記憶效應(yīng)（Carryover Effect）。記憶效應(yīng)是指在進(jìn)樣后, 再進(jìn)一針空白在同樣的保留時間仍然觀察到化合物峰。記憶效應(yīng)的副作用是明顯的: 它可能人為地增加下一樣本的MRM信號, 影響定量分析的精密度和準(zhǔn)確度。US FDA Bioanalytical Regulatory Guidances限制最高校準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)(highest calibration standard) 的記憶效應(yīng)不能超過20 ％最低校準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)(lowest calibration standard)MRM信號的20%。
由于大部分色譜公司都使用現(xiàn)成的反相液相色譜填料簡單地裝成5cm x 2.1mm短柱充當(dāng)LC-MS/MS柱, 在許多情況下，使記憶效應(yīng)強(qiáng), 校準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍必須人為縮短, 或不得已在進(jìn)樣后, 再進(jìn)一針甚至兩針空白最小化記憶效應(yīng), 然后進(jìn)下一個樣品。所有這些嚴(yán)重地降低了生產(chǎn)效率。
(3) 峰形拖尾或扭曲
因?yàn)榛钚怨璐蓟鶡o法完全封閉, 許多堿性化合物在幾乎所有色譜公司的反相液相色譜柱上面有明顯的峰形拖尾。這種峰形拖尾是記憶效應(yīng)的一個重要的根源。
另一方面，使用不正確方法過分封閉致使一些酸性和兩性化合物分離效果不佳, 特別是出現(xiàn)峰失真和分裂現(xiàn)象。
Chrom-Matrix公司認(rèn)為LC-MS/MS色譜柱和色譜方法的第一選擇是親水色譜(Hydrophilic Interaction)! 親水色譜使用乙腈作為弱溶劑和水為強(qiáng)溶劑, 徹底解決質(zhì)譜靈敏度差, 記憶效應(yīng)等問題。疏水化合物首先流出, 然后是親水化合物。不僅徹底解決極性化合物難以保留的問題, 而且同時分析了疏水化合物, 也提高了疏水化合物質(zhì)譜靈敏度。峰形拖尾問題也獲得徹底解決。此外，乙腈提取液不需要蒸發(fā)和重新溶解，從而節(jié)省了大量的時間。另一方面, 反相LC-MS/MS色譜柱和色譜方法仍然重要, 不僅是一些重要的中性化合物如抗癌藥物紫杉醇, 抗免疫器官植入藥物FK 506和雷帕霉素(rapamycin), 降脂藥等必須使用反相LC-MS/MS色譜柱和色譜方法, 還因?yàn)榇蠖鄶?shù)客戶習(xí)慣于反相LC-MS/MS色譜柱和色譜方法。即使這樣反相液相色譜填料也必須通過處理才能裝成5cm x 2.1mm短柱充當(dāng)LC-MS/MS柱使用。Chrom-Matrix公司研發(fā)出InnovationTM 反相液相色譜填料通過超臨界流體技術(shù)封端最大程度封閉活性硅醇基, 非常好的解決了堿性化合物峰形拖尾的問題,然后通過特殊處理最大程度消除了記憶效應(yīng)。
Chrom-Matrix公司成功研發(fā)了三種親水LC-MS/MS色譜柱和五種反相LC-MS/MS色譜柱, 而且為客戶成功研發(fā)了數(shù)百個LC-MS/MS應(yīng)用。Chrom-Matrix公司至成立起，就憑著領(lǐng)先一代的觀念、技術(shù)和產(chǎn)品贏得美國FDA、美國能源部、美國農(nóng)業(yè)部、國際禁毒組織、許多歐美制藥集團(tuán)、第三方檢測機(jī)構(gòu)、大學(xué)及研究機(jī)構(gòu)等顧客的由衷歡迎。
Chrom-Matrix公司的目標(biāo)就是幫助客戶開發(fā), 驗(yàn)證和應(yīng)用先進(jìn), 正確, 精確, 真實(shí), 像巖石一般堅(jiān)實(shí), 同時又靈敏, 快速, 便宜的LC-MS/MS定量分析方法。
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反相液相色譜柱
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