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細胞的復蘇

瀏覽次數(shù):4384 發(fā)布日期:2009-4-7  來源:本站 僅供參考,謝絕轉(zhuǎn)載,否則責任自負

細胞的復蘇
   
細胞復蘇的原則-快速融化:必須將凍存在-196液氮中的細胞快速融化至37,使細胞外凍存時的冰晶迅速融化,避免冰晶緩慢融化時進入細胞形成再結(jié)晶,對細胞造成損害。
   
. 實驗前準備:
1.
將水浴鍋預熱至37
2.
75%酒精擦拭紫外線照射30min的超凈工作臺臺面。
3.
在超凈工作臺中按次序擺放好消過毒的離心管、吸管、培養(yǎng)瓶等等。
   
二.取出凍存管:
1.
根據(jù)細胞凍存記錄按標簽找到所需細胞的編號。
2.
從液氮罐中取出細胞盒,取出所需的細胞,同時核對管外的編號。 
   
三.迅速解凍:
1.
迅速將凍存管投入到已經(jīng)預熱的水浴鍋中迅速解凍,并要不斷的搖動,使管中的液體迅速融化。
2.
1-2min后凍存管內(nèi)液體完全溶解,取出用酒精棉球擦拭凍存管的外壁,再拿入超凈臺內(nèi)。
   
.平衡離心:用架盤天平平衡后,放入離心機中3000r/min 離心3min  
   
.制備細胞懸液:
1.
吸棄上清液。
2.
向離心管內(nèi)加入10ml培養(yǎng)液,吹打制成細胞懸液。
   
.細胞計數(shù): 細胞濃度以5×105/ml為宜。
   
.培養(yǎng)細胞:

將復合細胞計數(shù)要求的細胞懸液分裝入培養(yǎng)瓶內(nèi),將培養(yǎng)瓶放入375CO2的培養(yǎng)箱內(nèi)2-4小時(或者24-48小時)后換液繼續(xù)培養(yǎng)培養(yǎng),換液的時間由細胞情況而定。
初學者易犯錯誤:
1
水浴鍋未預熱或者未預熱到37。
2.
水浴鍋內(nèi)凍存管太多,導致傳熱不佳,使融化時間延長。
3.
離心前忘記平衡,導致離心機損壞和細胞丟失。
4.
一次復蘇細胞過多,忘記更換吸頭和吸管,導致細胞交叉污染。

來源:中美合資博慧斯生物醫(yī)藥科技有限公司
聯(lián)系電話:0510-85991708
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