GBT14233.2-2005-醫(yī)用輸液、輸血、注射器具檢驗(yàn)方法 第二部分：生物試驗(yàn)方法（內(nèi)毒素部分）
                                                                    GB/T 14233.2-2005
4 細(xì)菌內(nèi)毒素試驗(yàn)
 
4.1 目的
本試驗(yàn)為《中國藥典（二部）》附錄“細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法”中規(guī)定的“凝膠法”，系利用鱟試劑與細(xì)菌內(nèi)毒素產(chǎn)生凝集反應(yīng)的機(jī)理，以判定供試品中內(nèi)毒素的限量是否符合規(guī)定。
   如經(jīng)檢驗(yàn)證實(shí)供試品對細(xì)菌內(nèi)毒素試驗(yàn)有不能排除的干擾作用則不適宜采用本試驗(yàn)。
4.2  試劑
細(xì)菌內(nèi)毒素國家標(biāo)準(zhǔn)品、細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品、鱟試劑、細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水。
注：細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水系指符合《中國藥典（二部）》附錄中“細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法”規(guī)定的滅菌注射用水。
4.3  主要設(shè)備
超凈工作臺、恒溫培養(yǎng)箱、恒溫水浴箱、電熱干燥箱、旋渦混合器。
4.4  試驗(yàn)前準(zhǔn)備
4.4.1   器具處理
   試驗(yàn)所用器皿需經(jīng)處理除去可能存在的外源性內(nèi)毒素。玻璃器皿置電熱干燥箱內(nèi)180℃干烤至少2h，或250℃干烤至少30min，塑料器皿置30％雙氧水中浸泡4h，再用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水充分沖洗后置60℃烘干備用。
4.4.2  鱟試劑靈敏度復(fù)核試驗(yàn)
4.4.2.1  當(dāng)使用新批號的鱟試劑或試驗(yàn)條件發(fā)生了任何可能影響檢驗(yàn)結(jié)果的改變時，應(yīng)進(jìn)行鱟試劑靈敏度復(fù)核試驗(yàn)。
4.4.2.2  試驗(yàn)步驟按《中國藥典（二部）》附錄“細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法”中規(guī)定進(jìn)行。
(見 )
4.4.3  供試品干擾試驗(yàn)
4.4.3.1  對未知或可疑的供試品初次進(jìn)行細(xì)菌內(nèi)毒素試驗(yàn)之前應(yīng)先進(jìn)行干擾試驗(yàn)，以檢驗(yàn)供試品對細(xì)菌內(nèi)毒素試驗(yàn)是否有抑制或增強(qiáng)作用，以及其他影響細(xì)菌內(nèi)毒素試驗(yàn)準(zhǔn)確性和敏感性的干擾作用。當(dāng)鱟試劑、供試品來源、供試品配方或生產(chǎn)工藝有變化或其他任何可能影響細(xì)菌內(nèi)毒素試驗(yàn)結(jié)果的試驗(yàn)條件改變時，應(yīng)重新進(jìn)行干擾試驗(yàn)。
4.4.3.2 每種醫(yī)療器械產(chǎn)品應(yīng)取3批并分別使用不少于兩個制造商生產(chǎn)的鱟試劑進(jìn)行干擾試驗(yàn)。供試液制備按4.5.3規(guī)定進(jìn)行。
4.4.3.3  試驗(yàn)步驟按《中國藥典（二部）》附錄“細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法”中“凝膠法”規(guī)定進(jìn)行。
4.4.3.4  供試品對細(xì)菌內(nèi)毒素試驗(yàn)有干擾作用，可選用下列適宜方法排除干擾：
a)       使用更靈敏的鱟試劑對供試液進(jìn)行更大倍數(shù)稀釋；
b)       采用無熱原氨基甲烷緩沖液稀釋供試液；
c)       采用無熱原氫氧化鈉或鹽酸溶液調(diào)節(jié)供試液PH值在6.0~8.0范圍內(nèi)；
d)       采用陽離子緩沖液（MgSO4或MgCl2）稀釋供試液以調(diào)節(jié)離子濃度。
4.5  試驗(yàn)方法
4.5.1  供試品數(shù)量
   同一批號至少3個單位供試品。
4.5.2  浸提介質(zhì)
  細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水
4.5.3  供試液制備
  根據(jù)產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的細(xì)菌內(nèi)毒素限值確定浸提介質(zhì)體積，選用下列適宜方法制備供試液：
a)       管類和容器類器具用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水浸泡器具內(nèi)腔，在（37±1）℃恒溫箱中浸提不少于1h；
b)       小型配件或?qū)嶓w類器具置無熱原玻璃器皿內(nèi)，加入細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水振搖數(shù)次，在
（37±1）℃恒溫箱中浸泡不少于1h。
供試液貯存應(yīng)不超過2 h。
注1：浸提介質(zhì)體積計算公式：V=L/λ
式中：
V——浸提介質(zhì)體積，單位為毫升（mL）；
L——產(chǎn)品細(xì)菌內(nèi)毒素限值，單位為細(xì)菌內(nèi)毒素單位每件（EU/件）；
λ——所用鱟試劑靈敏度標(biāo)示值，單位為細(xì)菌內(nèi)毒素單位每毫升（EU/mL）。
注2：輸液、輸血、注射器具細(xì)菌內(nèi)毒素限值在產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定，宜盡可能低。推薦輸液、輸血、

注射器具細(xì)菌內(nèi)毒素限量每件不超過20EU，與腦脊液接觸和胸內(nèi)應(yīng)用醫(yī)療器械每件不超過2.15EU。
4．5．4  試驗(yàn)步驟和結(jié)果判定
        按《中國藥典（二部）》附錄“細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法”中“凝膠法”規(guī)定進(jìn)行。
4．5．5           試驗(yàn)報告
        試驗(yàn)報告中宜給出下列信息：
        a)供試品名稱；
        b)生產(chǎn)批號；
        c)供試液制備方法；
        d)細(xì)菌內(nèi)毒素限量；
        e)結(jié)果判定。
 
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