物鏡(objective)是顯微鏡最重要的光學(xué)部件,利用光線使被檢物體第一次成像,因而直接關(guān)系和影響成像的質(zhì)量和各項(xiàng)光學(xué)技術(shù)參數(shù),是衡量一臺(tái)顯微鏡質(zhì)量的首要標(biāo)準(zhǔn)。
物鏡的結(jié)構(gòu)復(fù)雜,制作精密,由于對(duì)象差的校正,金屬的物鏡筒內(nèi)由相隔一定距離并被固定的透鏡組組合而成。物鏡的要求是齊焦合軸。齊焦即在鏡檢時(shí),當(dāng)用某一倍率的物鏡觀察圖像清晰后,在轉(zhuǎn)換另一倍率的物鏡時(shí),其成像亦應(yīng)基本清晰。和軸即上述操作中,像的中心偏離也應(yīng)該在一定的范圍內(nèi)。齊焦性能的優(yōu)劣和合軸程度的高低是顯微鏡質(zhì)量的一個(gè)重要標(biāo)志,它與物鏡本身的質(zhì)量和物鏡轉(zhuǎn)換器的精度有關(guān)。
傳統(tǒng)物鏡的種類很多,可從不同的角度分類。現(xiàn)在分類介紹。
一、 按象差校正程度分類
物鏡的種類及象差校正程度
編號(hào) | 物鏡 | 色差 | 球差 | 場(chǎng)曲 |
1 | 消色差物鏡 | 紅、藍(lán)波區(qū)校正 | 黃、綠波區(qū)校正 | 存在 |
2 | 復(fù)消色差物鏡 | 紅、綠、藍(lán)波區(qū)校正 | 紅、藍(lán)波區(qū)校正 | 存在 |
3 | 半復(fù)消色差物鏡 | 紅、藍(lán)波區(qū)校正 | 紅、藍(lán)波區(qū)校正 | 存在 |
4 | 平場(chǎng)物鏡 | 存在 | 存在 | 已校正 |
5 | 平場(chǎng)消色差物鏡 | 紅、藍(lán)波區(qū)校正 | 黃、綠波區(qū)校正 | 已校正 |
6 | 平場(chǎng)復(fù)消色差物鏡 | 紅、綠、藍(lán)波區(qū)校正 | 紅、藍(lán)波區(qū)校正 | 已校正 |
按功能分類
1. 相差物鏡(Phase Contrast objective):一般帶有“PH”標(biāo)志,字體用綠色。這種物鏡是相差(相襯)鏡檢術(shù)的專用物鏡,其特點(diǎn)是在物鏡的后焦平面處裝有相位板。用來(lái)觀察無(wú)色透明的標(biāo)本或活細(xì)胞,倒置顯微鏡上使用廣泛。
2. DIC物鏡:一般要求半復(fù)消色差或復(fù)消色差物鏡,用于DIC鏡檢觀察無(wú)色樣品或細(xì)胞,圖像呈現(xiàn)立體感。
3. HMC物鏡:標(biāo)有“HMC”標(biāo)志,一種類似于相差物鏡的物鏡。觀察效果有立體感。用于霍夫曼觀察,但不能用于熒光觀察。
4. 偏光物鏡:一般標(biāo)有“POL”字樣,這種物鏡裝配了克服應(yīng)力設(shè)備,是專做偏光觀察的物鏡。
5. 熒光物鏡:這種物鏡的熒光透過(guò)率非常高,物鏡用于對(duì)離子位移進(jìn)行定性和定量的分析以及用于特別關(guān)鍵的熒光技術(shù)(如人類染色體的研究以及細(xì)胞遺傳學(xué))。這類物鏡的突出特點(diǎn)是它們對(duì)340nm起的波長(zhǎng)有特別高的數(shù)值孔徑和高傳輸率(340nm時(shí)約為70%。R晥(chǎng)平直足可以使用CCD照相。
6. TIRF專用物鏡:要求數(shù)值孔徑大,NA一般為1.45~1.65。如尼康公司的APO TIRF 60×/100× 1.49物鏡。 7. 多功能物鏡:有的廠家生產(chǎn)一些多功能物鏡,可以同時(shí)做相差、DIC、熒光等觀察。例如奧林巴斯的UPLANFLN(萬(wàn)能平場(chǎng)半復(fù)消色差)物鏡和蔡司的EC PLAN –NEOFLUAR(高襯度平場(chǎng)新熒光)系列物鏡。
特殊物鏡分類
特殊物鏡主要有以下幾種:
1. 帶校正環(huán)物鏡(Correction Collar objective):在物鏡中部裝有環(huán)狀的調(diào)節(jié)環(huán),當(dāng)轉(zhuǎn)動(dòng)調(diào)節(jié)環(huán)時(shí),可調(diào)節(jié)物鏡內(nèi)透鏡組之間的距離,從而校正由蓋玻片厚度不標(biāo)準(zhǔn)引起的覆蓋差。物鏡外殼的調(diào)節(jié)環(huán)上標(biāo)有數(shù)字“11~23”,表明可校正蓋玻片0.11~0.23mm厚度之間的誤差。
2. 帶虹彩光闌的物鏡(Iris Diaphragm objective):在物鏡鏡筒內(nèi)的上部裝有虹彩光闌,外方也有可旋轉(zhuǎn)的調(diào)節(jié)環(huán),轉(zhuǎn)動(dòng)時(shí)可調(diào)節(jié)光闌孔徑的大小。這種結(jié)構(gòu)的物鏡是高級(jí)的油浸物鏡,常用于暗視野觀察,在暗視野鏡檢時(shí),往往由于某些原因而使照明光線進(jìn)入物鏡,使視場(chǎng)背景不夠黑暗,造成鏡檢質(zhì)量的下降。這時(shí)調(diào)節(jié)光闌的大小,使背景變黑、被檢物體更明亮,增強(qiáng)鏡檢效果。
3. 無(wú)罩物鏡(No Cover objective):有些被檢物體,如涂抹制片等,上面不能加用蓋玻片,在鏡檢時(shí)應(yīng)使用無(wú)罩物鏡。否則圖像質(zhì)量將明顯下降,特別是在高倍鏡檢時(shí)更為明顯。這種物鏡的外殼上常標(biāo)刻“NC”,同時(shí)在標(biāo)記蓋玻片厚度的位置上沒(méi)有“0.17”的字樣,而標(biāo)刻著“0”。
其他分類方法
1. 按工作距離分類
(1)普通物鏡:工作距離小,可以觀察切片,但不能觀察培養(yǎng)皿。
(2)長(zhǎng)工作距離物鏡(Long Working Distance objective):一般有“LD”標(biāo)志,是倒置顯微鏡的專用物鏡,它是為了滿足組織培養(yǎng)、懸浮液等材料的鏡檢而設(shè)計(jì)制造的。由于這類被檢物體都是放置在培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶中,必須要求物鏡的工作距離長(zhǎng)才能達(dá)到鏡檢的要求。工作距離高至10.6mm,并可以進(jìn)行光學(xué)修正,適用于0~2mm厚度的玻璃,通常由修正環(huán)或特殊的玻璃蓋帽完成修正。例如奧林巴斯的LUCPLFLN-PH物鏡和蔡司的LD-A-PLAN PH物鏡。
2. 按物鏡前透鏡與蓋玻片之間的介質(zhì)分類
(1)干燥系物鏡:鏡檢時(shí),物鏡前透鏡與蓋玻片之間以空氣(n=1)為介質(zhì)。這類物鏡最為常用,如40×以下的物鏡,數(shù)值孔徑均小于1。
(2)水浸系物鏡:一般有“W”標(biāo)志,這些水浸系物鏡同正立顯微鏡一起主要應(yīng)用于生理學(xué),如腦片等較厚樣品的觀察。鏡檢時(shí),物鏡前透鏡與蓋玻片之間是以水為介質(zhì)的,宜用蒸餾水或生理鹽水。
(3)油浸系物鏡:即油鏡頭,其放大率為40×~100×。鏡檢時(shí),物鏡前透鏡與蓋玻片之間常以香柏油、無(wú)熒光油(n=1.515左右)為介質(zhì)。有時(shí)也用甘油(n=1.450)、石蠟油(n=1.471)為介質(zhì)。該類物鏡的外殼上常標(biāo)刻有“OIL”或“HI”字樣,國(guó)產(chǎn)物鏡刻以“油”或漢語(yǔ)拼音字頭“Y”。
上述水浸與油浸物鏡所應(yīng)用的介質(zhì)均為液體物質(zhì),所以又稱為“浸液系物鏡”,數(shù)值孔徑大于1。
3. 按放大倍數(shù)分類
(1)極低倍物鏡:這類物鏡的倍率不是放大而是縮小,是為了觀察較大的被檢物體的全貌而設(shè)計(jì)、制造的。目前有些研究用顯微鏡附有這類物鏡,在鏡檢時(shí),應(yīng)與極低倍聚光鏡相配使用。如倍率為0.75×、0.5×的物鏡。
(2)低倍物鏡:1×~6×,NA 0.04~0.15。
(3)中倍物鏡:6×~25×,NA 0.15~0.40。
(4)高倍物鏡:25×~63×,NA 0.35~0.95。
(5)油浸物鏡:40×~100×,NA 1.25~1.40。
4. 按廠家分類
按照生產(chǎn)廠家,物鏡又可以分為奧林巴斯物鏡、尼康物鏡、徠卡物鏡、蔡司物鏡等。
當(dāng)然還有其他一些物鏡,比如反射暗視野物鏡、自動(dòng)識(shí)別物鏡等。