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PCR技術(shù)在性傳播性疾病診斷中的應(yīng)用

瀏覽次數(shù):3992 發(fā)布日期:2008-4-23  來源:本站 僅供參考,謝絕轉(zhuǎn)載,否則責(zé)任自負(fù)
魏 超 博士  
性傳播疾。⊿TD)對人類的健康危害很大,近年輕內(nèi)性傳播性疾病的發(fā)病率成倍增加,因此對STD的防治日益迫切而且重要。1986年國務(wù)院下達(dá)了制止性病蔓延的(15)號文件,1987年中央辦公廳(15)號文件又要求在中學(xué)普遍開展性教育,衛(wèi)生部自85年起建立了性病防治研究中心等機(jī)構(gòu)。40年代所說的性病主要是指“梅毒”、“淋病”、“軟下疳”、“性病淋巴肉芽腫”及“腹股溝肉芽腫”。80的代人們開始意識到性傳播性疾病還不止這幾種。能引起STD的病原體包括:病毒、衣原體、支原體、細(xì)菌、霉菌、寄生蟲等,可以引起形形色色不同的臨床表現(xiàn)。這些病變可以局限于生殖系統(tǒng)出可以呈全身感染。性傳播性疾病的發(fā)病率非常高,僅淋病,國外發(fā)病率為:法國30/10萬、美國360/103萬、瑞典514/10萬、泰國2000/10萬、而烏干達(dá)高達(dá)10000/10萬,我國官方報道淋病病人有84萬例,而實(shí)際病例數(shù)可能要高得多。1981年首次報道的艾滋。ˋDIS)也于1985年6月間出現(xiàn)在北京城,因此對STD的診斷、治療有關(guān)知識的了解就顯得非常重要。目前臨床上使用的STD診斷試劑有的是20年前落后的產(chǎn)品,其質(zhì)量及方法學(xué)的不足之處令人吃驚。而現(xiàn)代性傳播疾病病原體相當(dāng)復(fù)雜,其鑒別診斷非常困難,經(jīng)常導(dǎo)致誤診誤治,很大程度地影響了病人的身體健康,F(xiàn)存檢測方法的不足主要表現(xiàn)為:對細(xì)菌、寄生蟲等病原體主要使用鏡檢的方法,這種分法很容易漏檢;對支原體、衣原體等采用培養(yǎng)法檢測,人所共知培養(yǎng)法不僅費(fèi)時、價格昂貴而且受到采樣、因藥治療情況等多種因素影響,敏感度出不高;對病毒感染性STD,目前仍使用EIA的方興未艾,EIA法主要缺點(diǎn)是非特異性交叉反應(yīng),敏感度受限制,而且檢測的抗體不是病原體存在的直接證據(jù),不利于療效觀察。PCR法的出現(xiàn)為STD檢測提供了一個可靠的檢驗(yàn)方法。PCR法直接檢測病原體基因是最直接的感染證據(jù),并且簡單快速可以在數(shù)小時內(nèi)得到明確的結(jié)果。PCR法的高敏感性,可以把目的基因片段在短短的數(shù)小時內(nèi)擴(kuò)增至數(shù)萬倍以上,因此不易造成漏診,這在病人感染的極早期或潛伏期的診斷有相當(dāng)重要的意義。

一、 PCR與梅毒螺體的檢測。
梅毒是最經(jīng)典的STD之一,其病原是梅毒螺旋體,因其不易染色又稱蒼白螺旋體,在顯微鏡下最典型的特征是圍繞長軸旋轉(zhuǎn)前進(jìn)。梅毒螺旋體在體外不易存活,1%升汞可在數(shù)秒鐘將其殺死。梅毒主要經(jīng)性接觸傳播占總感染人數(shù)95%,其它方式傳播極少。對梅毒的實(shí)驗(yàn)診斷主要靠早期皮疹滲出液鏡要、熒光染色尋找螺旋體,這種方法敏感性低很容易漏檢。中后期用免疫方法檢測,非特異性免疫反應(yīng)有康華氏試驗(yàn),特異性免疫反應(yīng)可以用TPHA實(shí)驗(yàn)。免疫反應(yīng)敏感性較鏡檢提高很多倍,但是由于自然界存在一定的交叉免疫,所以容易誤診。另外,抗體一般必須在感染后2周-1月才會出現(xiàn)所以不利于早期診斷,并且抗體的出現(xiàn)與病情及機(jī)體抵抗不相關(guān)?贵w在梅毒治愈后3月-1年后才消失所心對病程判斷有一定的滯后性。PCR法則能克服這些缺點(diǎn),因?yàn)镻CR法有很高的敏感性及特異性,直接檢測病人樣本中有無梅毒螺旋體。在感染早期可以在硬下疳皮損中檢出病原,二期梅毒可以在皮疹中檢出病原,三期梅毒可以在腦脊液、關(guān)節(jié)液等不同病損中檢出梅毒螺旋體,對無皮疹病人可以在全血中檢出,并且不致與其它螺旋體發(fā)生交叉反應(yīng),誤診率比較低。因此PCR法檢測梅毒螺旋體在早期診斷及病程追蹤,預(yù)告分析等方面有很大優(yōu)越性。

二、 PCR法與淋球菌的檢測。
淋病是目前世界上發(fā)病率最高的STD之一,可以說是一種非常普遍的性傳播性疾病。淋病是由淋病雙球菌(Naisseria Gonorrhoea)引起,主要通過性接觸傳播,也可以通過其它方式間接傳播。淋球菌喜歡潮濕,一般在體外能存活24小時,1%升的汞可以在短時間內(nèi)將淋球菌殺死。人類是淋球菌唯一的天然宿主,主要侵襲粘膜組織并引起炎癥反應(yīng)。對淋球菌實(shí)驗(yàn)室的檢驗(yàn)主要依靠鏡檢,發(fā)現(xiàn)多形核白細(xì)胞內(nèi)雙球菌或培養(yǎng)淋球菌陽性。但鏡檢法敏感性較低且不易與其它雙球菌感染進(jìn)行鑒別。細(xì)菌培養(yǎng)的方法費(fèi)時,代價高而且受污染、用藥狀況、采樣等許多因素的影響所以檢出率低,容易漏診。也有采用分子雜交的方法檢測淋球菌,但其敏感度仍較低。目前,PCR方法的出現(xiàn),在淋球菌檢測中的應(yīng)用,發(fā)現(xiàn)PCR法檢測有許多優(yōu)越性。首先是早期及時,由于PCR法敏感性高,可以在樣本中僅有幾個淋球菌這樣極低的濃度下檢出淋菌,因此是最有效的早期診斷方法,有利于病人的早診早治;其次,PCR法方便簡單,從樣本取材到結(jié)果只需數(shù)小時即可完成,這對于急性淋病的診斷及治療有很大的地處;再次,PCR檢測有利于病性跟蹤,指導(dǎo)臨床治療。

三、 PCR法與非淋球菌尿道炎(NGU)的診斷。
引起性傳播尿道炎的原體除淋球菌外還有很多種,如衣原體、解脲支原體、陰道滴蟲、單純皰診這些疾病以往稱之為非特異性尿道炎,又稱為非淋球菌性尿道炎(Non-Gonococcal Urethritis)。特別是解脲支原體及沙眼衣原體引起的尿道炎是目前較發(fā)達(dá)國家中最常見的性傳播性疾病。在我國隨著經(jīng)濟(jì)改善、衛(wèi)生水平的提高,性傳播性疾病的格局也有所變化。一般而言,淋病最常見,梅毒還算比較少,但這兩種疾病一般與不潔性交史有明顯的關(guān)系,并且這兩種疾病病90%伴發(fā)衣原體或支原體等感染。而解脲支原體有沙眼衣原體性尿道炎不一定有不潔性交史。據(jù)資料統(tǒng)計(jì)我國育齡女性衣原體生殖泌尿系統(tǒng)感染達(dá)6%,而解脲支原體感染率可能還高。這是非常值得注意的現(xiàn)象,因?yàn)檫@些患者一般可以沒有不潔性交史,所以可能是非常重要的傳染源。而對解脲支原體及沙眼衣原體的檢測方法主要依靠熒光顯微鏡檢測或體外培養(yǎng),這兩種方法有一定的缺欠,其中熒蟲光顯微鏡檢測,需要較高的設(shè)備要求及經(jīng)驗(yàn),容易誤診,而培養(yǎng)法費(fèi)時、昂貴且敏感性低,相比之下PCR法更適合于NGU感染源的檢出。一般采患者分泌物樣本,稍加處理,提取模進(jìn)行PCR擴(kuò)增,即可以在很短時間內(nèi)得到明確結(jié)果,特別適應(yīng)于與NG的鑒別診斷,NGU與NG的治療方案有較大的區(qū)別,因此能否正確診斷有很重要的治療意義。以前主要靠鏡檢及培養(yǎng)的方法進(jìn)行鑒別診斷很難得到明確的結(jié)果,只有PCR檢測法出現(xiàn)以后才使之得到解決。

四、 其它STD與PCR檢測。
乙肝也是一種性傳播性疾病,在我國乙肝的發(fā)病極為普遍,是一種非常棘手的問題,關(guān)于乙肝與PCR檢測在另外文章中單獨(dú)討論。艾滋。ˋIDS)是1981年發(fā)現(xiàn),1985年6月進(jìn)入中國的一種最兇險的致死性性傳播性疾病,這種病是由人類免疫缺損病毒(HIV)引起。HIV曾用過各種命名,HTLVⅢ、ARV、AAV等,它是一種雙RNA逆轉(zhuǎn)錄病毒,感染宿主細(xì)胞后即逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生DNA并整合到宿主細(xì)胞DNA中,由于其DNA結(jié)構(gòu)與細(xì)胞基因類似,所以一旦整合發(fā)生細(xì)胞就無法擺脫,其壽命將與宿主細(xì)胞一樣長,并且不能被機(jī)體免疫機(jī)制清除。對于HIV的檢測有酶標(biāo)法、分子雜交法及PCR法。由于HIV是RNA病毒,所以必須先將其RNA逆轉(zhuǎn)錄為CDNA,再用PCR原理對其某一特異性片段進(jìn)行擴(kuò)增檢出病毒核酸。但HIV是一種逆轉(zhuǎn)錄病毒也可心從感染細(xì)胞中直接提取逆轉(zhuǎn)錄后的CDNA再經(jīng)PCR擴(kuò)增進(jìn)行檢測。巨細(xì)胞病毒(HCMV)感染,一般HCMV感染是無癥狀感染,所以實(shí)驗(yàn)室診斷尤其重要。年青女性在性活躍期,HCMV感染顯著上升。一般巨細(xì)胞在宮頸分泌物及精液是最易分離到,滴度出最高。另外,諸如引起生殖器癘的乳頭瘤病毒(HPV),及引起生殖器皰疹的單純皰疹Ⅱ型病毒等均可以用PCR法快速方便地檢測出來。由于PCR技術(shù)的出現(xiàn)及臨床中的廣泛應(yīng)用,使這些在早期很難確診或很難進(jìn)行鑒別的性傳播性疾病得到解決。PCR為STD的早診早治、流行病學(xué)研究及預(yù)防措施的制定提供了一個非常行之有效工具。
 

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