膜蛋白鑒定服務
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服務商: 北京百泰派克生物科技有限公司 | 查看該公司所有服務 >> |
膜蛋白(如受體和離子通道)是細胞功能的關鍵調節(jié)劑。膜蛋白占已知可藥用靶標的三分之二,可見膜蛋白在生物制藥行業(yè)中的重要性。
其中G蛋白偶聯(lián)受體(GPCR)是最大的,用途最廣泛的膜受體類蛋白,也是最重要的藥物受體,占所有人類藥物靶標的50%以上,并作為包括癌癥在內的多種疾病的治療靶標,包括心血管、代謝、中樞神經系統(tǒng)和炎癥性等疾病。
離子通道代表著另一組重要的膜蛋白藥物靶標,占目前上市藥物的10%。盡管如此,制備出數(shù)量足夠的、純正的、折疊形式正確的膜受體用于藥物開發(fā)仍然是一大挑戰(zhàn)。
膜蛋白鑒定
BTP-膜蛋白鑒定服務一般流程:1. 從細胞質、周質或細胞培養(yǎng)上清液中純化膜蛋白。根據(jù)所使用的表達宿主或表達載體,從細胞質、(細菌)周質或細胞培養(yǎng)上清液中純化蛋白質。
2. 緩沖液和去污劑篩選,用于增加溶解度和純化。對于可溶性蛋白和膜蛋白,使用視差掃描熒光法(DSF)確定穩(wěn)定性最佳的緩沖液的條件。如果適用,建立的活性分析法可用以關聯(lián)穩(wěn)定性和活性狀態(tài)。對于膜或膜附著蛋白,在從細菌或真核生物膜中提取蛋白時需要使用去污劑。去污劑的使用,需要在提取和純化步驟中針對蛋白質穩(wěn)定性進行優(yōu)化。如果蛋白質表達為包涵體,完成了再溶解和重折疊,可對最佳去污劑和緩沖液條件進行優(yōu)化。
3. 使用His、Rho1D4、GST或strep標簽進行親和純化。使用我們的高質量親和純化基質可以純化與His,GST或Strep標簽等標簽融合的蛋白質。對于膜蛋白,我們建議使用Rho1D4系統(tǒng),也可根據(jù)需求使用其他標簽進行純化。我司的純化條件進行了優(yōu)化,可根據(jù)目標蛋白的不同,可以放大至毫克量的純化。服務可包括緩沖液和去污劑的優(yōu)化,以提供具有最佳穩(wěn)定性和活性的蛋白質。百泰派克生物會提供所有步驟的詳盡文檔,包括SDS-PAGE和Western Blot等數(shù)據(jù)。
進一步純化步驟可用于準備結晶的均一性蛋白質組分。為了獲得適合于,如蛋白質結晶實驗或功能結合測定的蛋白質,可以使用例如陰離子或陽離子交換色譜或凝膠過濾進行第二或第三純化步驟。