電泳分離的蛋白質(zhì)從凝膠基質(zhì)轉(zhuǎn)移或“印跡”到膜（通常是硝酸纖維素或PVDF）上，然后在膜表面進行基于抗體的后續(xù)檢測，稱為蛋白質(zhì)免疫印跡（Western Blot或immunoblotting）。百泰派克生物科技提供蛋白質(zhì)免疫印跡分析服務，蛋白質(zhì)免疫印跡法通過高選擇性和高敏感的抗體-抗原相互作用，可用于從復雜蛋白質(zhì)混合物中檢測特定的目標蛋白質(zhì)，例如組織勻漿或細胞提取物等。所得數(shù)據(jù)可用于對目標蛋白質(zhì)進行定性和半定量分析。

電轉(zhuǎn)移一般流程圖
 

蛋白免疫印跡是一種廣泛使用的蛋白質(zhì)分析技術，可用于檢測組織勻漿或提取物樣品中的特定蛋白質(zhì)。蛋白免疫印跡法使用凝膠電泳法分別通過3-D結構和多肽鏈的長度對天然蛋白質(zhì)及變性蛋白質(zhì)進行分離，分離后的蛋白質(zhì)被轉(zhuǎn)移到膜（通常是硝酸纖維素膜或PVDF）上，最后在膜上用對目標蛋白質(zhì)具有特異性的抗體進行特異性識別。Western Blot廣泛應用于分子生物學、生物化學、免疫遺傳學和其他分子生物學領域。

在蛋白免疫印跡分析中，首先利用各種方法，如SDS-PAGE和IEF，通過等電點（pI）、分子量、電荷或這些因素的組合，從凝膠電泳中分離出樣品中的蛋白質(zhì)。常用SDS-PAGE進行分離，因為所有蛋白質(zhì)都被溶解在凝膠內(nèi)，沿相同方向遷移，結合SDS的變性作用，抗原表位更容易被識別。

凝膠電泳分析之后，將蛋白質(zhì)從凝膠轉(zhuǎn)移至由硝酸纖維素或聚偏二氟乙烯（PVDF）制成的膜上，以用于抗體檢測。PVDF膜與蛋白質(zhì)的結合能力比硝酸纖維素膜更高，但硝酸纖維素膜與較小蛋白質(zhì)結合的更好。轉(zhuǎn)移蛋白質(zhì)的主要方法是電印跡，電印跡法使用電流將蛋白質(zhì)從凝膠中拉入PVDF或硝酸纖維素膜中。電泳轉(zhuǎn)移方法包括：濕法轉(zhuǎn)印、半干轉(zhuǎn)印和半濕轉(zhuǎn)印。如果使用等電點聚焦進行蛋白質(zhì)分離，那么利用壓力轉(zhuǎn)印擴散來轉(zhuǎn)移蛋白質(zhì)更為有效。

轉(zhuǎn)印過程從一個小時（半干轉(zhuǎn)�。┑竭^夜轉(zhuǎn)印（濕法轉(zhuǎn)�。�，時間不等。轉(zhuǎn)印完成后，膜的自由結合位點被蛋白質(zhì)混合物封閉，因此后續(xù)抗體檢測不會受到干擾。即可對轉(zhuǎn)印到膜上的蛋白質(zhì)進行抗體檢測。包含蛋白質(zhì)的膜首先與一抗進行孵育，然后再由識別一抗的二抗結合后進行檢測。二抗一般帶有報告基團，并具有很高的靈敏度。

最靈敏的檢測方法是使用增強化學發(fā)光（ECL）：通過抗體-辣根結合物對一抗進行識別。使用增強化學發(fā)光的特殊變體，可檢測低至1 pg的蛋白條帶。

蛋白免疫印跡還可用于追蹤蛋白質(zhì)的磷酸化，與磷酸化蛋白質(zhì)的所有亞型相結合的抗體會在二維凝膠上呈現(xiàn)“念珠狀”外觀。也可用于鑒定免疫共沉淀產(chǎn)生的復合物中的已知蛋白和未知蛋白，只要目標蛋白質(zhì)在凝膠中，就可以通過考馬斯亮藍染色，從凝膠中切出相應的斑點，進行后續(xù)質(zhì)譜鑒定。