百泰派克生物科技提供一站式蛋白質(zhì)凝膠服務(wù)相關(guān)解決方案，包括SDS-PAGE、IEF和Native PAGE分析。

聚丙烯酰胺凝膠電泳（PAGE）是分離大分子最常用的技術(shù)之一，包括DNA，RNA和蛋白質(zhì)。電泳過程是通過施加電場作用使帶電離子進(jìn)行遷移的過程。在該技術(shù)中，帶電分子的遷移率與其凈電荷和通過的溶液的電阻成正比。十二烷基硫酸鈉（SDS）是一種陰離子去污劑，溶解過程中，其分子在較廣pH范圍內(nèi)具有凈負(fù)電荷。多肽鏈與其相對分子質(zhì)量成比例地結(jié)合一定數(shù)量的SDS，SDS上的負(fù)電荷破壞蛋白質(zhì)的大多數(shù)復(fù)雜結(jié)構(gòu)。

1D SDS-PAGE

將蛋白質(zhì)混合物添加到凝膠上樣空中后，可能會出現(xiàn)最大的蛋白質(zhì)還沒有遷移到凝膠上時(shí)，最小的蛋白質(zhì)在已經(jīng)跑出了凝膠的現(xiàn)象。因此為了獲得更好的分離效果，利用凝膠的特性，將凝膠分為濃縮膠和分離膠兩層的方法能夠解決該問題。PAGE膠底部是較大的分離膠，頂部是較窄的濃縮膠。電泳緩沖液由甘氨酸制成，pH 8.3，濃縮膠的pH值為6.8，而分離凝膠的pH值為8.8。電泳期間，電流由帶負(fù)電荷的分子攜帶向同一個(gè)方向遷移。由于在pH 8.3時(shí)僅有約10％的甘氨酸分子帶負(fù)電荷，因此此處的電流主要由堆積緩沖液中的Cl-攜帶，Cl-離子趕在蛋白質(zhì)之前朝堆積凝膠底部堆積。從而使得由SDS包裹的蛋白質(zhì)分子被夾在位于上方的甘氨酸分子和下方的Cl-之間，并被濃縮成比最初加載的體積小得多的條帶。

隨著電流作用遷移，蛋白質(zhì)遷移到分離膠中。此時(shí)，pH為8.8的分離凝膠緩沖液中的甘氨酸成為帶負(fù)電荷的分子，能夠非常快速的遷移，幾乎與Cl-離子保持一致，而蛋白質(zhì)緊隨其后。此時(shí)蛋白質(zhì)經(jīng)由Cl-和甘氨酸陰離子的移動(dòng)軌跡進(jìn)入分離凝膠而攜帶電流。蛋白質(zhì)變成一種具有類似流體動(dòng)力學(xué)性質(zhì)的桿狀帶負(fù)電荷高分子，其遷移率僅取決于其分子質(zhì)量。

SDS-PAGE廣泛應(yīng)用于蛋白質(zhì)組學(xué)分析，包括蛋白質(zhì)分子量測定，蛋白質(zhì)鑒定，樣品純度分析，二硫鍵鑒定，蛋白質(zhì)定量等。

等電聚焦（IEF）是一種基于蛋白質(zhì)等電點(diǎn)（pI）分離蛋白質(zhì)的一種電泳技術(shù)。當(dāng)pI=pH時(shí)，蛋白質(zhì)凈電荷為0，因此蛋白質(zhì)不會在電場中遷移。在IEF中，蛋白質(zhì)的分離是在含有兩性電解質(zhì)混合物的聚丙烯酰胺或瓊脂糖凝膠中進(jìn)行的，兩性電解質(zhì)在電場中遷移并在凝膠中形成pH梯度。蛋白分子被集中在一個(gè)具有pH梯度的介質(zhì)中，通過介質(zhì)的電流將產(chǎn)生帶正電荷的氧化極和帶負(fù)電荷的還原極。帶電的蛋白質(zhì)分子會向與其有相反電荷的一極運(yùn)動(dòng)，直到與周圍pH值與其等電點(diǎn)相同時(shí)帶電分子才停止在凝膠中運(yùn)動(dòng)，即蛋白質(zhì)凈電荷為0時(shí)。

于是，具有相同等電點(diǎn)的蛋白質(zhì)集中在pH固定的條帶中。每種蛋白質(zhì)都位于pH梯度中與其pI相對應(yīng)的位置。IEF技術(shù)具有極高的分辨率，即使僅有一個(gè)電荷不同的蛋白質(zhì)，也會被分到不同的條帶。

等電聚焦IEF分析