N-糖基化是一種涉及多種生理和病理過程的蛋白翻譯后修飾。糖基化修飾位點(diǎn)的可變性是細(xì)胞活性的關(guān)鍵指標(biāo)，血清蛋白糖基化附著位點(diǎn)的減少與先天性糖基化疾病(CDGs)的嚴(yán)重程度之間的相關(guān)性證明了這一點(diǎn)。因此，為了充分了解蛋白糖基化對人體健康的影響，準(zhǔn)確確定位點(diǎn)占用率具有重要意義。

為了確定糖基化附著位點(diǎn)，通常在重水里面使用蛋白n-糖苷酶F（PNGase F）從蛋白質(zhì)中分離多糖，在此過程中，原先糖基化的天冬酰胺經(jīng)歷脫酰胺化成為天冬氨酸，增加O18修飾。因?yàn)橐�入O18后分子質(zhì)量發(fā)生變化，糖基化位點(diǎn)可以通過比較含有天冬氨酸的肽與含有非糖基化的天冬酰胺的肽進(jìn)行檢測。分析糖蛋白中可變N-糖基化位點(diǎn)的一般策略包括蛋白質(zhì)使用PNGaseF酶消化、聚糖釋放、液相色譜法分離糖肽和質(zhì)譜檢測。

基于LC-MS的N-糖基化位點(diǎn)附著一般分析流程

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