糖基化主要是指將聚糖連接到蛋白質(zhì)、脂質(zhì)或其他有機(jī)分子上的酶促過(guò)程，是最常見(jiàn)的蛋白質(zhì)翻譯后修飾（PTM）。由于連接的聚糖的復(fù)雜性和同量異位性質(zhì)，糖基化分析十分具有挑戰(zhàn)性。隨著蛋白質(zhì)治療劑在臨床實(shí)踐中的應(yīng)用增多，如單克隆抗體、糖蛋白、激素、細(xì)胞因子和凝血因子，蛋白質(zhì)N-糖基化（也稱作N聚糖，N糖）的檢測(cè)受到越來(lái)越廣泛的關(guān)注。

不同生物內(nèi)產(chǎn)生的不同類型的N-聚糖

N糖（N-Glycan）是一種含有Man3-GlcNAc2的寡糖結(jié)構(gòu)，它們通過(guò)末端N-乙�；�葡糖胺（GlcNAc）和天冬酰胺的NH2基團(tuán)之間的糖苷鍵與蛋白質(zhì)的多肽鏈連接。大多數(shù)聚糖分析的樣品制備步驟包括糖蛋白的消化、去糖基化、純化、標(biāo)記/衍生化和SPE。根據(jù)樣品的特性，也可以使用其他步驟和技術(shù)進(jìn)行樣品制備。

N糖鏈分析的一般流程（以抗體為例）

可利用MALDI TOF MS和/或UHPLC技術(shù)，對(duì)聚糖及其種類進(jìn)行分析。

MALDI-TOF對(duì)糖基化化合物的結(jié)構(gòu)表征具有很高的靈敏度，且可實(shí)現(xiàn)高通量檢測(cè)。在對(duì)混合物N糖進(jìn)行分析時(shí)，MALDI通過(guò)單電荷離子的形成對(duì)樣品進(jìn)行分析，而不是電噴霧電離進(jìn)行分析。使用N-糖苷酶A或F酶促反應(yīng)，釋放樣品的N糖后，將樣品甲基化后進(jìn)行檢測(cè)。

基于質(zhì)譜的N糖鏈分析

基于LC-MS的N糖分析是現(xiàn)在的主流分析方法，親水相互作用色譜法（HILIC）可用于N糖分析，PNGase F酶促反應(yīng)釋放的N糖，利用2-氨基苯甲酰胺(2-AB) 對(duì)釋放所得的糖鏈進(jìn)行衍生化，對(duì)衍生后的糖鏈進(jìn)行測(cè)定，可用于大量樣本N糖的分析。在進(jìn)行熒光標(biāo)記之前，如果存在大量可能干擾衍生化反應(yīng)的去污劑、非揮發(fā)性鹽或帶有游離氨基的物質(zhì)，可通過(guò)TSK Amide-80色譜柱對(duì)N糖進(jìn)行純化。標(biāo)記后的N糖通過(guò)HILIC-UHPLC MS進(jìn)行分析。

利用HILIC色譜柱進(jìn)行N-聚糖分析的常規(guī)流程

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1. 實(shí)驗(yàn)步驟（中英文）
2. 相關(guān)的質(zhì)譜參數(shù)（中英文）
3. 質(zhì)譜圖片
4. 原始數(shù)據(jù)
5. N-糖分析結(jié)果

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