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Crispr/Cas9 慢病毒
漢恒生物獨(dú)創(chuàng)性采用慢病毒體系先在細(xì)胞中穩(wěn)定表達(dá)Cas9蛋白,構(gòu)建穩(wěn)定表達(dá)Cas9蛋白的細(xì)胞系,再在該細(xì)胞系的基礎(chǔ)上導(dǎo)入gRNA和基因敲除實(shí)驗(yàn)中用到的其它原件用于特異性基因敲除。
服務(wù)類別:分子與細(xì)胞總訪問(wèn):913
最后更新:2015-7-20半年訪問(wèn):8
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服務(wù)簡(jiǎn)介

 

 

       Cas9蛋白的CDS長(zhǎng)達(dá)4kb,克隆難度和包毒難度都相對(duì)大,將Cas9基因高效導(dǎo)入細(xì)胞是應(yīng)用Cas9/CRISPR系統(tǒng)進(jìn)行基因敲除的難點(diǎn)之一,極大地限制可供選擇的將基因?qū)爰?xì)胞的方法。并且在用CRISPR/Cas9系統(tǒng)進(jìn)行基因敲除時(shí),還需要同時(shí)轉(zhuǎn)入識(shí)別靶點(diǎn)的gRNA,篩選陽(yáng)性細(xì)胞的抗性基因或熒光基因,用同源重組法進(jìn)行基因敲除,還需要導(dǎo)入同源重組模板。如此多的基因共同表達(dá),很難得到較高的基因編輯效率,造成后續(xù)的陽(yáng)性克隆篩選和檢測(cè)工作難度大。

 

       漢恒生物獨(dú)創(chuàng)性研發(fā)出慢病毒Cas9表達(dá)體系,該體系采用慢病毒體系先在細(xì)胞中穩(wěn)定表達(dá)Cas9蛋白,構(gòu)建穩(wěn)定表達(dá)Cas9蛋白的細(xì)胞系,再在該細(xì)胞系的基礎(chǔ)上導(dǎo)入gRNA和基因敲除實(shí)驗(yàn)中用到的其它原件用于特異性基因敲除。

 

 

產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)

 

 

a、實(shí)驗(yàn)方案設(shè)計(jì)更靈活。由于不必表達(dá)大蛋白Cas9,可以根據(jù)細(xì)胞特性選擇化學(xué)轉(zhuǎn)染、腺病毒、腺相關(guān)病毒等多種方法導(dǎo)入或敲除相關(guān)基因;

 

b、提高基因敲除效率。在穩(wěn)定表達(dá)Cas9蛋白的細(xì)胞系上進(jìn)行基因敲除比瞬時(shí)轉(zhuǎn)染Cas9進(jìn)行基因敲除的效率更高;

 

c、可對(duì)同一細(xì)胞進(jìn)行多個(gè)基因敲除實(shí)驗(yàn)。對(duì)于需要在同一個(gè)細(xì)胞系中進(jìn)行多個(gè)基因的編輯或需要長(zhǎng)期用一個(gè)細(xì)胞模型進(jìn)行多項(xiàng)基因研究,先構(gòu)建一個(gè)Cas9蛋白穩(wěn)定表達(dá)的細(xì)胞系可顯著提高后續(xù)實(shí)驗(yàn)的效率,降低實(shí)驗(yàn)難度。

 

 

 

服務(wù)特點(diǎn)

 

 

a、適用于在同一個(gè)細(xì)胞系中需要進(jìn)行多個(gè)基因敲除的實(shí)驗(yàn);

b、基因敲除效率比直接質(zhì)粒轉(zhuǎn)染更高;

c、提供多種不同熒光和抗性標(biāo)記的慢病毒表達(dá)載體,更易篩選到基因敲除成功細(xì)胞;

d、接受cas9蛋白穩(wěn)定表達(dá)不同細(xì)胞系定制。

 

 

服務(wù)流程

 

 

 

 

A、cas9載體構(gòu)建及慢病毒包裝

     將cas9基因CDS區(qū)克隆至慢病毒載體,并進(jìn)行cas9慢病毒包裝。

 

B、穩(wěn)定株篩選

     將cas9慢病毒感染特定的目的細(xì)胞,進(jìn)行cas9穩(wěn)定表達(dá)的細(xì)胞株篩選。

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