4.         生物素化抗體工作液：實(shí)驗(yàn)前計(jì)算當(dāng)次實(shí)驗(yàn)所需用量（以100μL/孔計(jì)），實(shí)際配制時(shí)應(yīng)多配制100-200μL。使用前15分鐘，以生物素化抗體稀釋液稀釋濃縮生物素化抗體(1:100)成工作濃度。當(dāng)日使用。

5.        酶結(jié)合物工作液：實(shí)驗(yàn)前計(jì)算當(dāng)次實(shí)驗(yàn)所需用量（以100μL/孔計(jì)），實(shí)際配制時(shí)應(yīng)多配制100-200μL。使用前15分鐘，以酶結(jié)合物稀釋液稀釋濃縮HRP酶結(jié)合物(1:100)成工作濃度。當(dāng)日使用。

6.        發(fā)光底物工作液：實(shí)驗(yàn)前計(jì)算當(dāng)次實(shí)驗(yàn)所需用量（以100μL/孔計(jì)），實(shí)際配制時(shí)應(yīng)多配制100-200μL。使用前15分鐘，將發(fā)光底物A液和B液等體積混合。當(dāng)日使用。

洗滌方法:

1.         自動(dòng)洗板機(jī)：每孔加入洗滌液350μL，注入與吸出間隔60秒。

2.         手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體，在潔凈的吸水紙上拍干，每孔加洗滌液350μL，浸泡1-2分鐘，吸去（不可觸及板壁）或甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體，在厚的吸水紙上拍干。

操作步驟:

實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前，各試劑均應(yīng)平衡至室溫；試劑或樣品配制時(shí)，均需充分混勻，并盡量避免起泡。

1.     加樣：分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔�？瞻卓准訕�(biāo)準(zhǔn)品&樣品稀釋液100μL，余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100μL，注意不要有氣泡，加樣時(shí)將樣品加于酶標(biāo)板底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。給酶標(biāo)板覆膜，37℃孵育90分鐘。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性，每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

2.     棄去液體，甩干，不用洗滌。每個(gè)孔中加入生物素化抗體工作液100μL（在使用前15分鐘內(nèi)配制），酶標(biāo)板加上覆膜，37℃溫育1小時(shí)。

3.     棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板 3次，每次浸泡1-2分鐘，大約350μL/每孔，甩干并在吸水紙上輕拍將孔內(nèi)液體拍干。

4.     每孔加酶結(jié)合物工作液（臨用前15分鐘內(nèi)配制）100μL，加上覆膜，37℃溫育30分鐘。

5.     棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5次，方法同步驟3。

6.     每孔加混合好的發(fā)光底物工作液100μL，酶標(biāo)板加上覆膜37℃避光孵育5分鐘。

7.     立即用化學(xué)發(fā)光免疫分析儀測(cè)定各孔的化學(xué)發(fā)光值。應(yīng)提前打開(kāi)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀電源，預(yù)熱儀器，設(shè)置好檢測(cè)程序。

8.     實(shí)驗(yàn)完畢后將未用完的試劑按規(guī)定的保存溫度放回冰箱保存。

注意事項(xiàng)：

1.       保存：試劑盒中各試劑請(qǐng)按說(shuō)明書(shū)提示合理存放。在儲(chǔ)存及溫育過(guò)程中避免將試劑暴露在強(qiáng)光中。所有試劑瓶蓋須旋緊以防止蒸發(fā)和微生物的污染，否則可能會(huì)出現(xiàn)錯(cuò)誤的結(jié)果。

2.       酶標(biāo)板：剛開(kāi)啟的酶標(biāo)板孔中可能會(huì)有少許水樣物質(zhì)，此為正�，F(xiàn)象，不會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果造成任何影響。暫時(shí)不用的板條應(yīng)拆卸后放入備用鋁箔袋，按推薦溫度存放！

3.       加樣：加樣或加試劑時(shí)，第一個(gè)孔與最后一個(gè)孔的加樣時(shí)間間隔如果太大，將會(huì)導(dǎo)致不同的“預(yù)溫育”時(shí)間，從而明顯地影響到測(cè)量值的準(zhǔn)確性及重復(fù)性。每次的加樣時(shí)間最好控制在10分鐘內(nèi)。推薦設(shè)置復(fù)孔。

4.       溫育：為防止樣品蒸發(fā)，實(shí)驗(yàn)時(shí)必須給酶標(biāo)板覆膜；洗板后應(yīng)盡快進(jìn)行下步操作，避免酶標(biāo)板處于干燥狀態(tài)；嚴(yán)格遵守給定的溫育時(shí)間和溫度。

5.       洗滌：洗滌過(guò)程中反應(yīng)孔中殘留的洗滌液應(yīng)在吸水紙上拍干，勿將濾紙直接放入反應(yīng)孔中吸水。

6.       試劑配制：Concentrated BiotinylatedDetection Ab及Concentrated HRP Conjugate體積較小，運(yùn)輸過(guò)程會(huì)使液體沾到管壁或瓶蓋，因此使用前1000轉(zhuǎn)/分離心1min，以使附著管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。取用前，請(qǐng)用移液器小心吹打4-5次使溶液混勻。標(biāo)準(zhǔn)品、生物素化抗體工作液、酶結(jié)合物工作液請(qǐng)根據(jù)所需用量配制，并使用相應(yīng)的稀釋液配制，不能混淆。請(qǐng)精確配制標(biāo)準(zhǔn)品及工作液，盡量不要微量配制（如吸取Concentrated BiotinylatedDetection Ab時(shí)，一次不要小于10μL），以避免由于不準(zhǔn)確稀釋而造成濃度誤差；請(qǐng)勿重復(fù)使用已稀釋過(guò)的標(biāo)準(zhǔn)品、生物素化抗體工作液、酶結(jié)合物工作液。若需要分次使用標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)按照每一次用量分裝，將其放在-20～-80℃貯存。避免反復(fù)凍融。

7.       底物：底物請(qǐng)避光保存，在儲(chǔ)存和溫育時(shí)避免強(qiáng)光直接照射。

8.       混勻：充分輕微混勻?qū)Ψ磻?yīng)結(jié)果尤為重要，最好使用微量振蕩器(使用最低頻率)，如無(wú)微量振蕩器，可在反應(yīng)前手工輕輕敲擊酶標(biāo)板框混勻。

9.       安全：試驗(yàn)中請(qǐng)穿著實(shí)驗(yàn)服并帶乳膠手套做好防護(hù)工作。特別是檢測(cè)血液或者其他體液樣品時(shí)，請(qǐng)按國(guó)家生物試驗(yàn)室安全防護(hù)條例執(zhí)行。

10.   不同批號(hào)的試劑盒組份不能混用（洗滌液除外）

11.   試驗(yàn)中所用的EP管和吸頭均為一次性使用，嚴(yán)禁混用，否則將影響試驗(yàn)結(jié)果！

產(chǎn)品推薦

WB抗體：http://www.elabscience.cn/page/antibody/antibody-wb.html

IF抗體：http://www.elabscience.cn/page/antibody/antibody-if.html

IHC抗體：http://www.elabscience.cn/page/ihc/antibody-ihc.html

兔多克隆抗體定制：

http://www.elabscience.cn/page/antibody/rabbit-polyclonal-antibody-custom-service.html