細(xì)胞介紹
人前列腺癌細(xì)胞LNCaP克隆FGC是從一位50歲白人男性(血型B+)的左鎖骨淋巴結(jié)針刺活檢中分離，該患者經(jīng)確診為前列腺癌轉(zhuǎn)移。這株細(xì)胞對(duì)5-α-二氫睪酮(生長(zhǎng)調(diào)節(jié)子和酸性磷酸脂酶產(chǎn)物)有響應(yīng)。這株細(xì)胞并不形成一致的單層，而是形成集落，在傳代時(shí)可以用滴管反復(fù)吹吸打碎。它們僅僅輕輕地吸附在基底上，不形成匯合，很快使培養(yǎng)基變酸。生長(zhǎng)很慢，傳代后48小時(shí)內(nèi)不應(yīng)擾動(dòng)。當(dāng)培養(yǎng)瓶封包后，多數(shù)細(xì)胞從培養(yǎng)瓶底分離，懸浮在培養(yǎng)基中。收到后，在通常培養(yǎng)單層細(xì)胞的條件下培養(yǎng)24到48小時(shí)，以使細(xì)胞再貼壁。此后可以換上新鮮培養(yǎng)液。如果需要，培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)容物可以收集，300g離心15分鐘，以10毫升培養(yǎng)液重懸并培養(yǎng)到一個(gè)單獨(dú)的培養(yǎng)瓶中。請(qǐng)使用Corning的Cellbind培養(yǎng)瓶培養(yǎng)。
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細(xì)胞特性
1）?來(lái)源：前列腺；左鎖骨淋巴結(jié)癌轉(zhuǎn)移灶
2）?形態(tài)：上皮細(xì)胞樣
3）?含量：>1x106 個(gè)/mL
4）?污染：支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測(cè)為陰性
5）?規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝
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運(yùn)輸和保存
可選擇干冰運(yùn)輸及發(fā)送復(fù)蘇存活細(xì)胞方式
（1）干冰運(yùn)輸，收到后立即轉(zhuǎn)入液氮凍存或直接復(fù)蘇；
（2）存活細(xì)胞，收到后應(yīng)繼續(xù)生長(zhǎng)，傳代達(dá)到細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，再進(jìn)行凍存。具體操作見(jiàn)細(xì)胞培養(yǎng)步驟。
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細(xì)胞用途：僅供科研使用。
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細(xì)胞接受后的處理：
1）?收到細(xì)胞后，請(qǐng)檢查是否漏液，如果漏液，請(qǐng)拍照片發(fā)給我們。
2）?請(qǐng)先在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)，去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h。
3）?棄去T25瓶中的培養(yǎng)基，添加6ml新的完全培養(yǎng)基。
4）?如果細(xì)胞長(zhǎng)滿（90%以上）請(qǐng)及時(shí)進(jìn)行細(xì)胞傳代。
5）?接到細(xì)胞次日，請(qǐng)檢查細(xì)胞是否污染，若發(fā)現(xiàn)污染或疑似污染，請(qǐng)及時(shí)與我們?nèi)〉寐?lián)系。
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細(xì)胞培養(yǎng)步驟
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）?準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；雙抗，1%。
2）?培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）?凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。
二．?細(xì)胞處理：
1）?復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入250px皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）?細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1.?棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2.?加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.?按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.?將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）?細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。
下面T25瓶為例；
1．細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入2ml完全培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
2．1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。本公司按每個(gè)凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個(gè)細(xì)胞凍存。
3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

廈門逸漠生物科技有限公司(Xiamen Immocell Biotechnology Co.,Ltd.)坐落于廈門國(guó)家留學(xué)創(chuàng)業(yè)園(翔安)產(chǎn)業(yè)園，是一家專注于細(xì)胞生物學(xué)領(lǐng)域新產(chǎn)品、新技術(shù)開發(fā)的高新技術(shù)企業(yè)。
公司擁有一支具有深厚造詣和豐富經(jīng)驗(yàn)的高端技術(shù)人才，建設(shè)了高規(guī)格的研發(fā)實(shí)驗(yàn)室與生產(chǎn)車間，建立了規(guī)范的研發(fā)、生產(chǎn)、銷售、客服管理體系。
公司與國(guó)內(nèi)外多家醫(yī)院、高等院校、科研院所、生物醫(yī)藥公司建立了良好的合作關(guān)系，贏得了良好的市場(chǎng)聲譽(yù)和廣泛的客戶認(rèn)可，將努力成為生命科學(xué)界可靠的合作伙伴和堅(jiān)強(qiáng)的技術(shù)后盾。
企業(yè)文化我們的使命：
深耕細(xì)胞技術(shù)，共筑人類健康從細(xì)胞技術(shù)著手，深入地、多維度地進(jìn)行探索與積累,發(fā)展新產(chǎn)品與、新技術(shù)服務(wù)于生命科技探索以及人類疾病診療、人類健康發(fā)展事業(yè)。
我們的愿景：
成為生命科學(xué)領(lǐng)域被認(rèn)可與喜歡的公司我們旨在構(gòu)建細(xì)胞資源與應(yīng)用中心。我們追求為客戶提供靠譜的產(chǎn)品與技術(shù)，讓他們能夠省心省力的專注于自己的科研工作。我們的愿景是讓客戶獲得成功的同時(shí)。成為他們的心中認(rèn)可與喜歡的公司。
我們的經(jīng)營(yíng)理念：
1.精益求精、開拓創(chuàng)新把成熟的產(chǎn)品做到非凡，把創(chuàng)新的產(chǎn)品做到超乎想象。
2.專業(yè)高效、合作共贏專業(yè)就是力量，專業(yè)才能高效;合作就會(huì)發(fā)展、合作才能共贏。我們秉持這種理念，以我們專業(yè)的產(chǎn)品和服務(wù)，與廣大合作伙伴共同應(yīng)對(duì)挑戰(zhàn),共同發(fā)展進(jìn)步。
我們的價(jià)值觀：
1.勇于探索逸漠的精髓基于勇敢地探索，于逆境中的自我激勵(lì)、奮然而起，于順境中自我挑戰(zhàn)、自我超越。逸漠人選擇創(chuàng)造更多的價(jià)值，選擇擁有精彩的人生。
2.團(tuán)結(jié)奮進(jìn)面對(duì)神奇的世界、美好的未來(lái)，我們心懷敬畏與謙卑。我們改變自己,適應(yīng)時(shí)代，我們團(tuán)結(jié)一致、凝聚力量，努力學(xué)習(xí)、不斷進(jìn)步，一起展現(xiàn)我們的創(chuàng)造力與影響力。
3.守護(hù)誠(chéng)信逸漠發(fā)展的過(guò)程就是不斷被別人認(rèn)可的過(guò)程。我們忠誠(chéng)于自己的事業(yè)，守信于他人的事務(wù)，這是我們的寶貴的財(cái)富、強(qiáng)大的基石。我們建立誠(chéng)信、珍惜誠(chéng)信，可以讓我們更加專注于處理自己的事情，也讓事情處理起來(lái)更加簡(jiǎn)單、高效。
4.關(guān)愛(ài)生命尊重與關(guān)愛(ài)生命，是我們職責(zé)，也是我們的發(fā)展動(dòng)力。我們守護(hù)自己與家人，快樂(lè)工作，享受生活;我們珍視生存的世界，崇尚和諧、友善的人際關(guān)系;熱愛(ài)優(yōu)美、多彩的人居環(huán)境。