以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑詳細(xì)說明：

中文名稱	Tunel細(xì)胞凋亡檢測試劑盒（FITC）
英文名稱	Tunel cell apoptosis detection kit（FITC）
規(guī)格	0次/20次/50次

Tunel細(xì)胞凋亡檢測試劑盒（FITC）檢測原理：細(xì)胞在發(fā)生凋亡時(shí)，會(huì)在生理生化和細(xì)胞形態(tài)上發(fā)生一系列變化，在凋亡中晚期，激活的DNA內(nèi)切酶會(huì)切斷核小體間的基因組DNA，DNA會(huì)被降解成為約80bp-200bp 的片段，而正�；蛘咴鲋臣�(xì)胞很少發(fā)生DNA斷裂。利用這個(gè)差異，用脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶（TdT 酶）把FITC標(biāo)記的dUTP標(biāo)記到斷裂DNA片段的3'-OH 末端，然后進(jìn)行熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀檢測，這個(gè)方法被稱為TUNEL(TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling)法細(xì)胞凋亡檢測。
產(chǎn)品優(yōu)勢和特點(diǎn)：TUNEL細(xì)胞凋亡檢測試劑盒，集成了不同廠家產(chǎn)品的諸多特長，形成獨(dú)特優(yōu)勢和特點(diǎn)：
•  高活性的重組TdT突變體酶----該轉(zhuǎn)移酶的比活是其他試劑盒里TdT活力的0倍，同樣情況下，不被標(biāo)記的3'-OH 末端可以順利標(biāo)記上熒光，因此檢測靈敏度更高；
•  經(jīng)反復(fù)優(yōu)化的標(biāo)記反應(yīng)底物----降低了熒光基團(tuán)相鄰后可能造成聚集和淬滅的效果，從而提高檢測靈敏度，同時(shí)減少非特異性反應(yīng)；
•  更精確的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)----試劑盒提供的PI 核染料，可以將全部標(biāo)記和未標(biāo)記細(xì)胞的DNA 著色，并在488nm波長激發(fā)光下發(fā)出紅色熒光，從而得以判斷凋亡細(xì)胞占總細(xì)胞比例；
•  一步染色，使用方便----只需一步染色反應(yīng)，染色完成后洗滌即可觀察，約-2個(gè)小時(shí)即可完成；
•  應(yīng)用范圍廣----既可以用于檢測冷凍或石蠟切片中的細(xì)胞凋亡情況，也可以檢測培養(yǎng)的貼壁細(xì)胞或懸浮細(xì)胞的凋亡情況。
檢測方法：熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀
樣本類型：石蠟包埋組織切片、組織冰凍切片、細(xì)胞涂片以及細(xì)胞懸液
保存條件：-20°非無霜冰箱中，避免反復(fù)凍融。


注意事項(xiàng)
. 微量試劑取用前請離心集液。
2. Annexin V-PE/7-AAD 避光保存及使用。
3. 7-AAD 為潛在致癌物，操作時(shí)請采取防護(hù)措施，穿防護(hù)服、戴手套等。
4. 本試劑盒適用于檢測活細(xì)胞，流式細(xì)胞儀檢測時(shí)，細(xì)胞數(shù)量不以應(yīng)低于×05，，不推薦用于檢測組織樣本。
5. 推薦使用懸浮培養(yǎng)細(xì)胞。如果是貼壁細(xì)胞，建議適用不含EDTA 的胰酶消化，如消化不當(dāng)，可能引起假陽性，而用細(xì)胞刮子會(huì)造成細(xì)胞粘連成團(tuán)，而影響檢測�？蓪⒁让赶�化后細(xì)胞的保存在含2%BSA 的PBS 中，防止進(jìn)一步的損傷。
6. 細(xì)胞固定后可能導(dǎo)致熒光的淬滅，請不要固定樣品。
7. 因檢測細(xì)胞的類型、凋亡誘導(dǎo)劑種類、使用的檢測儀器不同，因而流式檢測的熒光補(bǔ)償也不同，因此建議每次檢測均需使用未經(jīng)凋亡誘導(dǎo)處理的細(xì)胞作為對照，進(jìn)行熒光補(bǔ)償?shù)恼{(diào)節(jié)。
產(chǎn)品特點(diǎn)：
.離心吸附柱內(nèi)硅基質(zhì)膜全部采用進(jìn)口世界著名公司特制吸附膜，柱與柱之間吸附量差異極小，可重復(fù)性好。克服了國產(chǎn)試劑盒膜質(zhì)量不穩(wěn)定的弊端。
2.使用了優(yōu)質(zhì)溶膠液，不含傳統(tǒng)溶膠液的碘化鈉和高氯酸鹽，不抑制回收后酶切、連接克隆等下游反應(yīng)。
3.獨(dú)特的溶膠液/結(jié)合液配方，將溶膠和結(jié)合兩種功能統(tǒng)一，因此一個(gè)試劑盒可以運(yùn)用于瓊脂糖DNA回收、PCR產(chǎn)物清潔純化、酶切產(chǎn)物純化回收等多種情況，節(jié)省了需購買多種試劑盒的費(fèi)用，
4.溶膠液/結(jié)合液調(diào)制成為了黃顏色，便于觀察溶膠效果和監(jiān)測pH值變化從而達(dá)到最佳結(jié)合效果，大大提高回收效率。
5.改進(jìn)的溶膠液配方,大大提高了緩沖能力和穩(wěn)定性，即使樣品變化很大也能將PH緩沖在最佳結(jié)合范圍內(nèi)。
6.快速、方便，不需要使用有毒的苯酚、氯仿等試劑，也不需要乙醇沉淀。 、貼壁細(xì)胞的消化
①吸除培養(yǎng)液，用無菌 PBS、Hanks 液或無血清培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞一次，以去除殘余的血清。
②加入少量 源葉生物 Trypsin-EDTA solution，略蓋過細(xì)胞即可，室溫放置 0.5～2min， 不同的細(xì)胞消化時(shí)間有所不同。
③顯微鏡下觀察，細(xì)胞明顯收縮，并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變
化；或者用槍吹打細(xì)胞發(fā)現(xiàn)細(xì)胞剛好可以被吹打下來，吸除胰酶細(xì)胞消化液。加入含血清的  完全細(xì)胞培養(yǎng)液，吹打下細(xì)胞，即可直接用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
④如果發(fā)現(xiàn)消化不足，則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞消化時(shí)間過長，未及吹打細(xì)胞，細(xì)胞已經(jīng)有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落， 直接用胰酶細(xì)胞培養(yǎng)液把細(xì)胞全部吹打下來。000～2000g 離心 min，沉淀細(xì)胞，盡量去除胰酶細(xì)胞消化液后，加入含血清的完全培養(yǎng)液重新懸浮細(xì)胞，即可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
2、組織的消化不同的組織需要消化的時(shí)間相差很大，通常以消化后可以充分打散組織為宜。

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