Annexin V-APC/7-AAD細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品背景：
細(xì)胞凋亡是細(xì)胞的基本特征之一，它在機(jī)體的胚胎發(fā)育、組織修復(fù)、內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定和一些疾病發(fā)生過(guò)程等方面起著十分重要的作用。
在正常細(xì)胞中，磷脂酰絲氨酸(PS)只分布在細(xì)胞膜脂質(zhì)雙層的內(nèi)側(cè)，而在細(xì)胞凋亡早期，細(xì)胞膜中的磷脂酰絲氨酸(PS)由脂膜內(nèi)側(cè)翻向外側(cè)。在體內(nèi)，巨噬細(xì)胞可以識(shí)別翻轉(zhuǎn)到細(xì)胞膜表面的PS 從而將這些程序性死亡的細(xì)胞清除，因此凋亡過(guò)程中并不伴隨局部的炎癥反應(yīng)，而在細(xì)胞壞死的過(guò)程中則常常伴隨著炎癥反應(yīng)。
AnnexinⅤ是一種分子量為35-36kD的Ca2+依賴性磷脂結(jié)合蛋白，能與細(xì)胞凋亡過(guò)程中翻轉(zhuǎn)到膜外的PS 高親和力特異性結(jié)合。PS 外翻發(fā)生在細(xì)胞核破裂，DNA 片段化以及凋亡相關(guān)蛋白出現(xiàn)之前，這使得Annexin V 與PS的結(jié)合成為凋亡早期的一種重要檢測(cè)標(biāo)志事件。
檢測(cè)原理：
在正常的活細(xì)胞中，磷脂酰絲氨酸(phosphotidylserine，PS)位于細(xì)胞膜的內(nèi)側(cè)，但在早期凋亡的細(xì)胞中，PS 從細(xì)胞膜的內(nèi)側(cè)翻轉(zhuǎn)到細(xì)胞膜的表面，暴露在細(xì)胞外環(huán)境中。
Annexin-Ⅴ能與PS 高親和力結(jié)合。可通過(guò)細(xì)胞外側(cè)暴露的磷脂酰絲氨酸與凋亡早期細(xì)胞的胞膜結(jié)合。用標(biāo)記了APC的AnnexinⅤ作為熒光探針，利用流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡可檢測(cè)細(xì)胞凋亡的發(fā)生。細(xì)胞壞死的過(guò)程中也會(huì)發(fā)生細(xì)胞膜損傷，壞死的細(xì)胞會(huì)結(jié)合Annexin V-APC。
Annexin V-APC 通常與細(xì)胞膜非滲透性核酸熒光染料聯(lián)合使用以檢測(cè)凋亡細(xì)胞。常用的染料是7-AAD。正常細(xì)胞和早期凋亡細(xì)胞的細(xì)胞膜是完整的，核酸染料7-AAD 不能透過(guò)完整的細(xì)胞膜，但在凋亡中晚期的細(xì)胞和壞死細(xì)胞，7-AAD 能夠透過(guò)細(xì)胞膜與細(xì)胞核結(jié)合呈現(xiàn)紅色。
7-AAD/Annexin V-APC試劑盒將Annexin Ⅴ與7-AAD匹配使用，可以將凋亡早期的細(xì)胞和晚期的細(xì)胞以及死細(xì)胞區(qū)分開(kāi)來(lái)。壞死細(xì)胞可以同時(shí)與Annexin V-APC和7-AAD 結(jié)合顯色，而7-AAD 則被排除在活細(xì)胞(APC陰性)和早期凋亡細(xì)胞(APC陽(yáng)性)之外。在沒(méi)有巨噬細(xì)胞的情況下，凋亡的最后階段會(huì)像細(xì)胞壞死一樣發(fā)生整個(gè)細(xì)胞的解體，從而使凋亡晚期的細(xì)胞也同時(shí)被APC和7-AAD 結(jié)合染色呈現(xiàn)雙陽(yáng)性。
儲(chǔ)存條件：染色液2-8℃避光保存；結(jié)合液2-8℃保存；長(zhǎng)期不用-20℃保存。
Annexin V-APC染色液避免反復(fù)凍融，凍融2次以上可能會(huì)失效。長(zhǎng)期保存分裝后-20℃保存。
有效期：一年。
以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑詳細(xì)說(shuō)明：

中文名稱	Annexin V-APC/7-AAD細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒
英文名稱
規(guī)格	50T|00T

注意事項(xiàng)
. 微量試劑取用前請(qǐng)離心集液。
2. Annexin V-PE/7-AAD 避光保存及使用。
3. 7-AAD 為潛在致癌物，操作時(shí)請(qǐng)采取防護(hù)措施，穿防護(hù)服、戴手套等。
4. 本試劑盒適用于檢測(cè)活細(xì)胞，流式細(xì)胞儀檢測(cè)時(shí)，細(xì)胞數(shù)量不以應(yīng)低于×05，，不推薦用于檢測(cè)組織樣本。
5. 推薦使用懸浮培養(yǎng)細(xì)胞。如果是貼壁細(xì)胞，建議適用不含EDTA 的胰酶消化，如消化不當(dāng)，可能引起假陽(yáng)性，而用細(xì)胞刮子會(huì)造成細(xì)胞粘連成團(tuán)，而影響檢測(cè)�？蓪⒁让赶�化后細(xì)胞的保存在含2%BSA 的PBS 中，防止進(jìn)一步的損傷。
6. 細(xì)胞固定后可能導(dǎo)致熒光的淬滅，請(qǐng)不要固定樣品。
7. 因檢測(cè)細(xì)胞的類型、凋亡誘導(dǎo)劑種類、使用的檢測(cè)儀器不同，因而流式檢測(cè)的熒光補(bǔ)償也不同，因此建議每次檢測(cè)均需使用未經(jīng)凋亡誘導(dǎo)處理的細(xì)胞作為對(duì)照，進(jìn)行熒光補(bǔ)償?shù)恼{(diào)節(jié)。
產(chǎn)品特點(diǎn)：
.離心吸附柱內(nèi)硅基質(zhì)膜全部采用進(jìn)口世界著名公司特制吸附膜，柱與柱之間吸附量差異極小，可重復(fù)性好�？朔�了國(guó)產(chǎn)試劑盒膜質(zhì)量不穩(wěn)定的弊端。
2.使用了優(yōu)質(zhì)溶膠液，不含傳統(tǒng)溶膠液的碘化鈉和高氯酸鹽，不抑制回收后酶切、連接克隆等下游反應(yīng)。
3.獨(dú)特的溶膠液/結(jié)合液配方，將溶膠和結(jié)合兩種功能統(tǒng)一，因此一個(gè)試劑盒可以運(yùn)用于瓊脂糖DNA回收、PCR產(chǎn)物清潔純化、酶切產(chǎn)物純化回收等多種情況，節(jié)省了需購(gòu)買(mǎi)多種試劑盒的費(fèi)用，
4.溶膠液/結(jié)合液調(diào)制成為了黃顏色，便于觀察溶膠效果和監(jiān)測(cè)pH值變化從而達(dá)到最佳結(jié)合效果，大大提高回收效率。
5.改進(jìn)的溶膠液配方,大大提高了緩沖能力和穩(wěn)定性，即使樣品變化很大也能將PH緩沖在最佳結(jié)合范圍內(nèi)。
6.快速、方便，不需要使用有毒的苯酚、氯仿等試劑，也不需要乙醇沉淀。 、貼壁細(xì)胞的消化
①吸除培養(yǎng)液，用無(wú)菌 PBS、Hanks 液或無(wú)血清培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞一次，以去除殘余的血清。
②加入少量 源葉生物 Trypsin-EDTA solution，略蓋過(guò)細(xì)胞即可，室溫放置 0.5～2min， 不同的細(xì)胞消化時(shí)間有所不同。
③顯微鏡下觀察，細(xì)胞明顯收縮，并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變
化；或者用槍吹打細(xì)胞發(fā)現(xiàn)細(xì)胞剛好可以被吹打下來(lái)，吸除胰酶細(xì)胞消化液。加入含血清的  完全細(xì)胞培養(yǎng)液，吹打下細(xì)胞，即可直接用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
④如果發(fā)現(xiàn)消化不足，則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞消化時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，未及吹打細(xì)胞，細(xì)胞已經(jīng)有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落， 直接用胰酶細(xì)胞培養(yǎng)液把細(xì)胞全部吹打下來(lái)。000～2000g 離心 min，沉淀細(xì)胞，盡量去除胰酶細(xì)胞消化液后，加入含血清的完全培養(yǎng)液重新懸浮細(xì)胞，即可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
2、組織的消化不同的組織需要消化的時(shí)間相差很大，通常以消化后可以充分打散組織為宜。
Myriocin （ mg）     2amino3，4dihydroxy2（hydroxymethyl）oxo6eicosenoic acid； ISP|Thermozymocidin； Myriocin
GDF （human recombinant） （25 ug）     BMP|Growth/Differentiation Factor
JWH 0 （solution） （5 mg）     （pentylHindol3yl）naphthalenylmethanone； AM8； JWH 0 （solution）
（）PFI2 （hydrochloride） （0 mg）     （R）PFI2； （R）8fluoroN（oxo（pyrrolidinyl）3（3（trifluoromethyl）phenyl）propan2yl）,2,3,4tetrahydroisoquinoline6sulfonamide, monohydrochloride
Tanshinone IIA （0 mg）     6，7，8，9tetrahydro，6，6trimethylphenanthro[，2b]furan0，dione； NSC |NSC |TSA； Tanshinone IIA
pGB BAX siRNA Vector Mix     pGB BAX siRNA Vector Mix
乙二醛縮雙鄰羥本，英文名或英文縮寫(xiě)：GBHA，級(jí)別：生物技術(shù)級(jí)，規(guī)格：克
52D葡萄糖酸;五羥基己酸DGluconic acid;Gluconic acid;Dextronic acid;Maltoni acid;Glyconic acid;Glycogenic acid;Pentaxy7noxycaproic acid��
CalciumDgluconateD葡萄糖酸鈣0UBR，97%
鄰本二迷 ,2Dimqthoxybqnzqnq 7
3嗎啉炳磺醋 MOPS 6
FmocPbf精酸，英文名或英文縮寫(xiě)：FmocArg(Pbf)OH，級(jí)別：BR，98%，規(guī)格：500克
2陽(yáng)離子交換樹(shù)脂NA
LAsparagineMonohydrateL天冬素一水0克BR，99%
.5務(wù)二醇punum≈97% ,5Pqntcnqdiol
基加醋酯 Mqthyl ccrbczctq 99
小鼠合成酶(NOS)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
Rat protein phosphatase (PP) ELISA Kit 大鼠蛋酸酶(PP)ELISA試劑盒
Humanmaturationpromotingfactor,MF/MPFELISAKit 人促有絲分裂因子(MF/MPF)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
CLIAKitfor7-KS(Human7-ketosteroids)ELISAKit人7-同類固醇規(guī)格：48T/96T
飲料精氨酸(arginine)含量酶連續(xù)循環(huán)反應(yīng)比色法定量檢測(cè)試劑盒20次
Mouseleukemiainhibitoryfactorreceptor,LIFRELISAKit小鼠白血病抑制因子受體(LIFR)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
小鼠Toll樣受體5(TLR-5)ELISA試劑盒 ，英文名： TLR-5 ELISA Kit
大鼠細(xì)胞間粘附分子2(ICAM-2/CD02)ELISA檢測(cè)試劑盒Ratiercellularadhesionmolecule2,ICAM-2ELISAKit 96T/48T
人H5型禽流感病毒(H5N)抗體(IgG)免疫試劑盒 Human H5N aibody IgG ELISA Kit
Annexin V-APC/7-AAD細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒英文名稱MousePTHELISAKit小鼠甲狀旁腺激素(PTH)規(guī)格：96T/48T
冰凍切片膽色素史汀(Stein)染色試劑盒50次
Ratacidicfibroblastgrowthfactor,aFGF-ELISA試劑盒大鼠酸性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(aFGF-)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

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