以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑詳細(xì)說(shuō)明：

中文名稱	臺(tái)盼藍(lán)染色法細(xì)胞活力檢測(cè)試劑盒
英文名稱	Typan Blue Staining Cell Viability Assay Kit
規(guī)格	00T

臺(tái)盼藍(lán)染色法細(xì)胞活力檢測(cè)試劑盒本試劑盒各組分均以無(wú)菌形式提供，可直接用于細(xì)胞實(shí)驗(yàn)。臺(tái)盼藍(lán)（Trypan Blue），一種偶氮、親水性酸性藍(lán)色染料，可透過(guò)死亡細(xì)胞和垂死細(xì)胞的細(xì)胞膜，將其染成藍(lán)色，而活細(xì)胞由于其細(xì)胞膜的完整性，可將臺(tái)盼藍(lán)排斥在外，因此，通過(guò)顏色的變化即可將活細(xì)胞（活細(xì)胞呈透明無(wú)色）和死細(xì)胞鑒別開(kāi)來(lái)，基于此原理，本品廣泛用于細(xì)胞活性水平的常規(guī)評(píng)估。臺(tái)盼藍(lán)還可染色膠原和淀粉樣蛋白。臺(tái)盼藍(lán)與蛋白結(jié)合形成的復(fù)合物可發(fā)出紅色熒光。另外，臺(tái)盼藍(lán)（合適濃度）還常用來(lái)淬滅細(xì)胞表面的自熒光或者其他熒光信號(hào)。
使用方法
）對(duì)于懸浮細(xì)胞，離心收集細(xì)胞，對(duì)其充分清洗后，加入適量細(xì)胞重懸液重懸細(xì)胞制成單細(xì)胞懸液；對(duì)于貼壁細(xì)胞，先用胰酶消化細(xì)胞，再按照懸浮細(xì)胞的方法制備單細(xì)胞懸液。
2）取0.ml單細(xì)胞懸液，按照:比例與0.ml 0.4%臺(tái)盼藍(lán)染色液充分混勻，室溫染色3~0min。
【注】：因臺(tái)盼藍(lán)具有細(xì)胞毒性，染色時(shí)間過(guò)久會(huì)導(dǎo)致部分死細(xì)胞染色，干擾計(jì)數(shù)。通常染色3min即可。
3）取少量上述染色細(xì)胞加入血細(xì)胞計(jì)數(shù)板，于顯微鏡低倍鏡下計(jì)數(shù)，分別計(jì)算著色細(xì)胞（即損傷細(xì)胞和死細(xì)胞）和總細(xì)胞。
【注】：用移液槍加染色細(xì)胞時(shí)，沿著蓋玻片的邊緣輕輕加液使其完全覆蓋住整個(gè)小室。不可過(guò)量加液或者不足量。
【注2】：mm2方格內(nèi)細(xì)胞數(shù)通�？刂圃�20-50 cells，當(dāng)細(xì)胞數(shù)超過(guò)200個(gè)，需重新調(diào)整稀釋倍數(shù)。
4）按照以下公式來(lái)計(jì)算細(xì)胞數(shù)目和活細(xì)胞百分比，
a，計(jì)算每ml細(xì)胞數(shù)目：Cells/ml=mm2大方格內(nèi)的平均細(xì)胞數(shù)×稀釋倍數(shù)×04；【注】：此時(shí)的稀釋倍數(shù)為：步驟2所取的單細(xì)胞懸液與臺(tái)盼藍(lán)染色液混合后的稀釋倍數(shù)
b，總細(xì)胞數(shù)目：Total cells=（Cells/ml）×最初制備單細(xì)胞懸液的總體積
c，細(xì)胞活力值：Viability（%）=（總細(xì)胞數(shù)-總著色細(xì)胞數(shù)）/總細(xì)胞數(shù)×00
【注】：通常情況，健康的對(duì)數(shù)期培養(yǎng)細(xì)胞，活細(xì)胞至少占到95%。
儲(chǔ)存條件：室溫，有效期2年


注意事項(xiàng)
. 微量試劑取用前請(qǐng)離心集液。
2. Annexin V-PE/7-AAD 避光保存及使用。
3. 7-AAD 為潛在致癌物，操作時(shí)請(qǐng)采取防護(hù)措施，穿防護(hù)服、戴手套等。
4. 本試劑盒適用于檢測(cè)活細(xì)胞，流式細(xì)胞儀檢測(cè)時(shí)，細(xì)胞數(shù)量不以應(yīng)低于×05，，不推薦用于檢測(cè)組織樣本。
5. 推薦使用懸浮培養(yǎng)細(xì)胞。如果是貼壁細(xì)胞，建議適用不含EDTA 的胰酶消化，如消化不當(dāng)，可能引起假陽(yáng)性，而用細(xì)胞刮子會(huì)造成細(xì)胞粘連成團(tuán)，而影響檢測(cè)�？蓪⒁让赶�化后細(xì)胞的保存在含2%BSA 的PBS 中，防止進(jìn)一步的損傷。
6. 細(xì)胞固定后可能導(dǎo)致熒光的淬滅，請(qǐng)不要固定樣品。
7. 因檢測(cè)細(xì)胞的類(lèi)型、凋亡誘導(dǎo)劑種類(lèi)、使用的檢測(cè)儀器不同，因而流式檢測(cè)的熒光補(bǔ)償也不同，因此建議每次檢測(cè)均需使用未經(jīng)凋亡誘導(dǎo)處理的細(xì)胞作為對(duì)照，進(jìn)行熒光補(bǔ)償?shù)恼{(diào)節(jié)。
產(chǎn)品特點(diǎn)：
.離心吸附柱內(nèi)硅基質(zhì)膜全部采用進(jìn)口世界著名公司特制吸附膜，柱與柱之間吸附量差異極小，可重復(fù)性好�？朔�了國(guó)產(chǎn)試劑盒膜質(zhì)量不穩(wěn)定的弊端。
2.使用了優(yōu)質(zhì)溶膠液，不含傳統(tǒng)溶膠液的碘化鈉和高氯酸鹽，不抑制回收后酶切、連接克隆等下游反應(yīng)。
3.獨(dú)特的溶膠液/結(jié)合液配方，將溶膠和結(jié)合兩種功能統(tǒng)一，因此一個(gè)試劑盒可以運(yùn)用于瓊脂糖DNA回收、PCR產(chǎn)物清潔純化、酶切產(chǎn)物純化回收等多種情況，節(jié)省了需購(gòu)買(mǎi)多種試劑盒的費(fèi)用，
4.溶膠液/結(jié)合液調(diào)制成為了黃顏色，便于觀察溶膠效果和監(jiān)測(cè)pH值變化從而達(dá)到最佳結(jié)合效果，大大提高回收效率。
5.改進(jìn)的溶膠液配方,大大提高了緩沖能力和穩(wěn)定性，即使樣品變化很大也能將PH緩沖在最佳結(jié)合范圍內(nèi)。
6.快速、方便，不需要使用有毒的苯酚、氯仿等試劑，也不需要乙醇沉淀。 、貼壁細(xì)胞的消化
①吸除培養(yǎng)液，用無(wú)菌 PBS、Hanks 液或無(wú)血清培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞一次，以去除殘余的血清。
②加入少量 源葉生物 Trypsin-EDTA solution，略蓋過(guò)細(xì)胞即可，室溫放置 0.5～2min， 不同的細(xì)胞消化時(shí)間有所不同。
③顯微鏡下觀察，細(xì)胞明顯收縮，并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變
化；或者用槍吹打細(xì)胞發(fā)現(xiàn)細(xì)胞剛好可以被吹打下來(lái)，吸除胰酶細(xì)胞消化液。加入含血清的  完全細(xì)胞培養(yǎng)液，吹打下細(xì)胞，即可直接用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
④如果發(fā)現(xiàn)消化不足，則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞消化時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，未及吹打細(xì)胞，細(xì)胞已經(jīng)有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落， 直接用胰酶細(xì)胞培養(yǎng)液把細(xì)胞全部吹打下來(lái)。000～2000g 離心 min，沉淀細(xì)胞，盡量去除胰酶細(xì)胞消化液后，加入含血清的完全培養(yǎng)液重新懸浮細(xì)胞，即可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
2、組織的消化不同的組織需要消化的時(shí)間相差很大，通常以消化后可以充分打散組織為宜。

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