TUNEL細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒(FITC)本試劑盒應(yīng)用范圍廣,可以用于檢測(cè)冷凍或石蠟切片中的細(xì)胞凋亡情況,也可以檢測(cè)培養(yǎng)的貼壁細(xì)胞或懸浮細(xì)胞的凋亡情況。
細(xì)胞在發(fā)生凋亡時(shí),會(huì)激活一些DNA內(nèi)切酶,這些內(nèi)切酶會(huì)切斷核小體間的基因組DNA。細(xì)胞凋亡時(shí)抽提DNA進(jìn)行電泳檢測(cè),可以發(fā)現(xiàn)80-200bp的DNA ladder。
TUNEL (TdT mediated dUTP Nick End Labeling)細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒(FITC)可以用來檢測(cè)組織細(xì)胞在凋亡晚期過程中細(xì)胞核DNA的斷裂情況。其原理是在末端脫氧核糖核苷酸轉(zhuǎn)移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT)的作用下,在基因組DNA斷裂時(shí)暴露出的3′-羥基(3′-OH)末端摻入FITC-2-dUTP,從而可以用熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀檢測(cè)。
本試劑盒對(duì)標(biāo)記反應(yīng)進(jìn)行了優(yōu)化,采用最佳比例的FITC-2-dUTP和未標(biāo)記dNTP進(jìn)行3’-OH末端的核苷酸摻入,使得同一個(gè)斷裂的DNA片段末端可以形成更長(zhǎng)的“標(biāo)記尾巴”。該“標(biāo)記尾巴”減少了相鄰摻入dNTP上標(biāo)記基團(tuán)的空間位阻,增加每個(gè)斷裂片段上的熒光基團(tuán)數(shù)目,降低熒光基團(tuán)相鄰后可能造成的聚集和淬滅,從而提高檢測(cè)靈敏度,減少非特異性反應(yīng)。
試劑盒組份:
5×Equilibration Buffer————750μl
FITC-2-dUTP Labeling Mix———00 μl
Recombinant TdT Enzyme—————20 μl
Proteinase K (2 mg/ml)————40 μl
DNase I ( U/μl)———————5μl
0×DNase I Buffer——————00 μl
儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期一年。
以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑詳細(xì)說明:
注意事項(xiàng)
. 微量試劑取用前請(qǐng)離心集液。
2. Annexin V-PE/7-AAD 避光保存及使用。
3. 7-AAD 為潛在致癌物,操作時(shí)請(qǐng)采取防護(hù)措施,穿防護(hù)服、戴手套等。
4. 本試劑盒適用于檢測(cè)活細(xì)胞,流式細(xì)胞儀檢測(cè)時(shí),細(xì)胞數(shù)量不以應(yīng)低于×05,,不推薦用于檢測(cè)組織樣本。
5. 推薦使用懸浮培養(yǎng)細(xì)胞。如果是貼壁細(xì)胞,建議適用不含EDTA 的胰酶消化,如消化不當(dāng),可能引起假陽(yáng)性,而用細(xì)胞刮子會(huì)造成細(xì)胞粘連成團(tuán),而影響檢測(cè)?蓪⒁让赶蠹(xì)胞的保存在含2%BSA 的PBS 中,防止進(jìn)一步的損傷。
6. 細(xì)胞固定后可能導(dǎo)致熒光的淬滅,請(qǐng)不要固定樣品。
7. 因檢測(cè)細(xì)胞的類型、凋亡誘導(dǎo)劑種類、使用的檢測(cè)儀器不同,因而流式檢測(cè)的熒光補(bǔ)償也不同,因此建議每次檢測(cè)均需使用未經(jīng)凋亡誘導(dǎo)處理的細(xì)胞作為對(duì)照,進(jìn)行熒光補(bǔ)償?shù)恼{(diào)節(jié)。
產(chǎn)品特點(diǎn):
.離心吸附柱內(nèi)硅基質(zhì)膜全部采用進(jìn)口世界著名公司特制吸附膜,柱與柱之間吸附量差異極小,可重復(fù)性好。克服了國(guó)產(chǎn)試劑盒膜質(zhì)量不穩(wěn)定的弊端。
2.使用了優(yōu)質(zhì)溶膠液,不含傳統(tǒng)溶膠液的碘化鈉和高氯酸鹽,不抑制回收后酶切、連接克隆等下游反應(yīng)。
3.獨(dú)特的溶膠液/結(jié)合液配方,將溶膠和結(jié)合兩種功能統(tǒng)一,因此一個(gè)試劑盒可以運(yùn)用于瓊脂糖DNA回收、PCR產(chǎn)物清潔純化、酶切產(chǎn)物純化回收等多種情況,節(jié)省了需購(gòu)買多種試劑盒的費(fèi)用,
4.溶膠液/結(jié)合液調(diào)制成為了黃顏色,便于觀察溶膠效果和監(jiān)測(cè)pH值變化從而達(dá)到最佳結(jié)合效果,大大提高回收效率。
5.改進(jìn)的溶膠液配方,大大提高了緩沖能力和穩(wěn)定性,即使樣品變化很大也能將PH緩沖在最佳結(jié)合范圍內(nèi)。
6.快速、方便,不需要使用有毒的苯酚、氯仿等試劑,也不需要乙醇沉淀。
操作步驟:
、貼壁細(xì)胞的消化
①吸除培養(yǎng)液,用無菌 PBS、Hanks 液或無血清培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞一次,以去除殘余的血清。
②加入少量 源葉生物 Trypsin-EDTA solution,略蓋過細(xì)胞即可,室溫放置 0.5~2min, 不同的細(xì)胞消化時(shí)間有所不同。
③顯微鏡下觀察,細(xì)胞明顯收縮,并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變
化;或者用槍吹打細(xì)胞發(fā)現(xiàn)細(xì)胞剛好可以被吹打下來,吸除胰酶細(xì)胞消化液。加入含血清的 完全細(xì)胞培養(yǎng)液,吹打下細(xì)胞,即可直接用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
④如果發(fā)現(xiàn)消化不足,則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞消化時(shí)間過長(zhǎng),未及吹打細(xì)胞,細(xì)胞已經(jīng)有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落, 直接用胰酶細(xì)胞培養(yǎng)液把細(xì)胞全部吹打下來。000~2000g 離心 min,沉淀細(xì)胞,盡量去除胰酶細(xì)胞消化液后,加入含血清的完全培養(yǎng)液重新懸浮細(xì)胞,即可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
2、組織的消化不同的組織需要消化的時(shí)間相差很大,通常以消化后可以充分打散組織為宜。
PBS Stock Solution (0X, pH 7。4) ( L) Phosphatebuffered Saline; PBS Stock Solution (0X, pH 7。4)
4’MethylNmethylhexanophenone (hydrochloride) (50 mg) 4’Methylhexedrone|4’methylNmethyl HP; 2(methylamino)(ptolyl)hexanone, monohydrochloride
(R)methyl Prostaglandin D2 ( mg) 9。alpha。,Rdihydroxyoxomethylprosta5Z,Edienoic acid; (R)methyl PGD2; (R)methyl Prostaglandin D2
(±)8,9DHET (50 ug) (±)8,9dihydroxy5Z,Z,Zeicosatrienoic acid; (±)8,9DiHETrE; (±)8,9DHET
5fluoro PB22 (25 mg) (5fluoropentyl)8quinolinyl esterHindole3carboxylic acid; 5fluoro PB22
Bovine Serum Albumin – Cohn Fraction V, Endotoxin Low, pH – 7.0 Bovine Serum Albumin – Cohn Fraction V, Endotoxin Low, pH – 7.0
鈉shēng huà shì jì容量:5克
5837,4二甲基本4Bromooxylene
2壬醇250毫克保存:20℃
4 4(六拂異亞炳基)二本安 98% 2,2Bis(4cminophqnyl)hqxcfluoropropcnq 09
重酸00克
DMEM培養(yǎng)基500張/包
2022氧代鈉ALPHAKETOBUTYRIC ACID wo7ium SALT
蛋清粉25克
正丁酰 Butyryl chloride,≥98.0% 25ML 通用試劑
紫云英苷 Astragaline (≥98%,HPLC) 004 20MG 標(biāo)準(zhǔn)品
小鼠脂蛋白脂酶(LIPD)ELISA試劑盒 ,英文名: LIPD ELISA Kit
α微球蛋白(α-MG)ELISA檢測(cè)試劑盒Monkeyα-microglobulin,α-MGELISAKit 96T/48T
犬皮質(zhì)醇(Coisol)免疫試劑盒 Canine Coisol ELISA Kit
英文名稱HumanInsulin-likegrowthfactorbindingprotein4,IGFBP4ELISAkit人胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白4(IGFBP4)規(guī)格:96T/48T
化人體RUNX3基因重組表達(dá)載體(pcDNA-RUNX3)0微克
RatHomocysteicacid,HcyELISA試劑盒大鼠同型半胱氨酸(Hcy)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
小鼠白介素3(IL-3)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
Rat nerve growth factor (NGF) ELISA Kit 大鼠神經(jīng)生長(zhǎng)因子(NGF)ELISA試劑盒
TUNEL細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒(FITC)HumanCrosslaps,CrELISAKit 人骨膠原交聯(lián)(Cr)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
HumanCaspase2,Casp-2ELISA試劑盒人胱天蛋白酶2(Casp-2)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
轉(zhuǎn)基因棉花MON53品系試劑盒20次
HumanskeletalmuscleActinin-α,smActinin-αELISAKit人橫紋肌輔肌動(dòng)蛋白α(smActinin-α)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
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