中文名稱:
細胞周期與細胞凋亡檢測試劑盒
英文名稱:Cell Cycle and Apoptosis Analysis Kit
產(chǎn)品規(guī)格:50T
發(fā)貨周期:~3天
細胞周期與細胞凋亡檢測試劑盒細胞周期與細胞凋亡檢測試劑盒采用了經(jīng)典的碘化丙啶染色(Propidium staining,即PI staining)方法進行細胞周期與細胞凋亡的分析。
碘化丙啶 (Propidium,PI) 是一種雙鏈DNA熒光染料,其嵌入雙鏈DNA后可以產(chǎn)生熒光,并且熒光強度和雙鏈DNA的含量成正比。細胞內(nèi)的DNA被PI染色后,可以用流式細胞儀對細胞進行DNA含量測定,根據(jù)DNA含量的分布情況,進行細胞周期和細胞凋亡分析。
PI染色后,假設G0/G期細胞的熒光強度為,那么含有雙份基因組DNA的G2/M期細胞的熒光強度的理論值為2,正在進行DNA復制的S期細胞的熒光強度為-2之間。凋亡細胞由于細胞核發(fā)生濃縮以及發(fā)生DNA片段化 (DNA fragmentation) 導致部分基因組DNA片斷在染色過程中丟失,因此凋亡細胞PI染色后呈現(xiàn)明顯的弱染,即熒光強度小于,在流式檢測的熒光圖上出現(xiàn)所謂的sub-G峰,即凋亡細胞峰。
細胞凋亡也可以用流式細胞儀觀察細胞光散射的變化來檢測。 細胞發(fā)生凋亡時,由于胞漿和染色質(zhì)濃縮、核碎裂,產(chǎn)生凋亡小體,使細胞的光散射性質(zhì)發(fā)生變化。凋亡前期,染色質(zhì)皺縮,細胞密度增加,前向角光散射色顯著降低。凋亡后期,細胞產(chǎn)生凋亡小體,前向角光散射和側(cè)向角光散色都顯著降低。
本試劑盒通常應用于培養(yǎng)的貼壁或懸浮細胞的細胞周期與細胞凋亡檢測。如果用于組織的細胞周期與細胞凋亡檢測,則必須把組織消化成單細胞狀態(tài),才可以進行檢測。
儲存條件:-20℃,避光
注意事項:
、懸浮細胞用此法時必須經(jīng)離心后才能吸出上清再加DMSO。
2、Formazan 的生成不僅與活細胞數(shù)成比例,也受作用時間的影響,因此當樣品較多時測定的OD 值可能隨時間而變。
3、MTT 溶液為黃色,需避光保存,長時間光照會導致失效。當顏色變?yōu)榛揖G色時,請勿使用。MTT 溶液在4℃或較低溫度情況下會凝固,可以20-25℃水浴溫育片刻至全部融解后使用。
4、為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
PCF Diluent (0X) (0 ml) PCF Diluent (0X)
ZIETDFMK, Caspase8抑制劑(氟) Caspase8 Inhibitor ZIETDFMK
Bisindolylmaleimide V ( mg) 3,4diHindol3ylmethylHpyrrole2,5dione; Ro 30|BIM V; Bisindolylmaleimide V
Captopril (25 g) SA 333|SQ ,225; [(2S)3mercapto2methyloxopropyl]Lproline
Minocycline (hydrochloride) (50 mg) (4S,aS)4,7bis(dimethylamino),4,4aS,5,5aR,6,,aoctahydro3,0,,atetrahydroxy,dioxo2naphthacenecarboxamide, monohydrochloride; NSC ; Minocycline (hydrochloride)
DmyoInositol,3,4,5,6pentaphosphate ammonium salt) (5 mg) Ins(,3,4,5,6)P5|,3,4,5,6IP5 (sodium salt), DmyoInositol,3,4,5,6pentaphosphate ammonium salt), Dmyoinositol,3,4,5,6penta(hydrogen phosphate), decaammonium salt
葡聚糖T500500u保存:20℃
525PSS辛基本基取代物Octapxenylsilsesquioxane
豬血清(無菌)shēng huà shì jì容量:RT25克
噠螨靈 Pyridaben 97 250MG 通用試劑
L炳安醋 Lclcninq;(S)2cMinopropionic ccid;L2cMinopropionic ccid 264
HPheOMeoHClL本基酸鹽酸鹽0克特,98.0%
70異丁酰錄;錄化異丁酰Isobutyryl chloride;Isobutyroyl chloride
etxyl 2amino4(4chloropxenyl)3thiopxenecarboxylate 2
3酸 3Bromopropionic Acid Methyl Ester,98% 333 25ML 通用試劑
司盤/司班/山油酸山梨醇酯/失水山梨醇油酸三酯/司本/山梨糖醇酐三油酸酯/清涼茶醇三油酸酯/Span CP 500克 國產(chǎn)/進口
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操作規(guī)程
細胞周期與細胞凋亡檢測試劑盒、在96孔板加入細胞00μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入00微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入00微升5000~0000個細胞(具體每孔所用的細胞的數(shù)目,需根據(jù)細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當濃度的0~0μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及00%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成× MTT 溶液。
5、每孔加50μL × MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加50μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(完全培養(yǎng)基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(完全培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×00
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 0%時的藥物濃度(IC90)
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