CCK-8試劑盒CCK法應(yīng)用非常廣泛,如藥物篩選、細(xì)胞增殖測定、細(xì)胞毒性測定、腫瘤藥敏試驗(yàn)以及生物因子的活性檢測等。
Cell Counting Kit簡稱CCK試劑盒,是一種基于WST-8(化學(xué)名:2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽)的廣泛應(yīng)用于細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性的快速高靈敏度檢測試劑盒。
WST-8屬于MTT的升級產(chǎn)品,工作原理為:在電子耦合試劑存在的情況下,可以被線粒體內(nèi)的脫氫酶還原生成高度水溶性的橙黃色的甲臜產(chǎn)物(formazan) 。顏色的深淺與細(xì)胞的增殖成正比,與細(xì)胞毒性成反比。使用酶標(biāo)儀在450mM波長處測定OD值,間接反映活細(xì)胞數(shù)量。
以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑詳細(xì)說明:
中文名稱 |
CCK-8試劑盒 |
英文名稱 |
Cell Counting Kit (CCK-8) |
規(guī)格 |
00T |
注意事項(xiàng)
. 微量試劑取用前請離心集液。
2. Annexin V-PE/7-AAD 避光保存及使用。
3. 7-AAD 為潛在致癌物,操作時(shí)請采取防護(hù)措施,穿防護(hù)服、戴手套等。
4. 本試劑盒適用于檢測活細(xì)胞,流式細(xì)胞儀檢測時(shí),細(xì)胞數(shù)量不以應(yīng)低于×05,,不推薦用于檢測組織樣本。
5. 推薦使用懸浮培養(yǎng)細(xì)胞。如果是貼壁細(xì)胞,建議適用不含EDTA 的胰酶消化,如消化不當(dāng),可能引起假陽性,而用細(xì)胞刮子會造成細(xì)胞粘連成團(tuán),而影響檢測?蓪⒁让赶蠹(xì)胞的保存在含2%BSA 的PBS 中,防止進(jìn)一步的損傷。
6. 細(xì)胞固定后可能導(dǎo)致熒光的淬滅,請不要固定樣品。
7. 因檢測細(xì)胞的類型、凋亡誘導(dǎo)劑種類、使用的檢測儀器不同,因而流式檢測的熒光補(bǔ)償也不同,因此建議每次檢測均需使用未經(jīng)凋亡誘導(dǎo)處理的細(xì)胞作為對照,進(jìn)行熒光補(bǔ)償?shù)恼{(diào)節(jié)。
產(chǎn)品特點(diǎn):
.離心吸附柱內(nèi)硅基質(zhì)膜全部采用進(jìn)口世界著名公司特制吸附膜,柱與柱之間吸附量差異極小,可重復(fù)性好。克服了國產(chǎn)試劑盒膜質(zhì)量不穩(wěn)定的弊端。
2.使用了優(yōu)質(zhì)溶膠液,不含傳統(tǒng)溶膠液的碘化鈉和高氯酸鹽,不抑制回收后酶切、連接克隆等下游反應(yīng)。
3.獨(dú)特的溶膠液/結(jié)合液配方,將溶膠和結(jié)合兩種功能統(tǒng)一,因此一個(gè)試劑盒可以運(yùn)用于瓊脂糖DNA回收、PCR產(chǎn)物清潔純化、酶切產(chǎn)物純化回收等多種情況,節(jié)省了需購買多種試劑盒的費(fèi)用,
4.溶膠液/結(jié)合液調(diào)制成為了黃顏色,便于觀察溶膠效果和監(jiān)測pH值變化從而達(dá)到最佳結(jié)合效果,大大提高回收效率。
5.改進(jìn)的溶膠液配方,大大提高了緩沖能力和穩(wěn)定性,即使樣品變化很大也能將PH緩沖在最佳結(jié)合范圍內(nèi)。
6.快速、方便,不需要使用有毒的苯酚、氯仿等試劑,也不需要乙醇沉淀。
操作步驟:
、貼壁細(xì)胞的消化
①吸除培養(yǎng)液,用無菌 PBS、Hanks 液或無血清培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞一次,以去除殘余的血清。
②加入少量 源葉生物 Trypsin-EDTA solution,略蓋過細(xì)胞即可,室溫放置 0.5~2min, 不同的細(xì)胞消化時(shí)間有所不同。
③顯微鏡下觀察,細(xì)胞明顯收縮,并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變
化;或者用槍吹打細(xì)胞發(fā)現(xiàn)細(xì)胞剛好可以被吹打下來,吸除胰酶細(xì)胞消化液。加入含血清的 完全細(xì)胞培養(yǎng)液,吹打下細(xì)胞,即可直接用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
④如果發(fā)現(xiàn)消化不足,則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞消化時(shí)間過長,未及吹打細(xì)胞,細(xì)胞已經(jīng)有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落, 直接用胰酶細(xì)胞培養(yǎng)液把細(xì)胞全部吹打下來。000~2000g 離心 min,沉淀細(xì)胞,盡量去除胰酶細(xì)胞消化液后,加入含血清的完全培養(yǎng)液重新懸浮細(xì)胞,即可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
2、組織的消化不同的組織需要消化的時(shí)間相差很大,通常以消化后可以充分打散組織為宜。
PCF Fluorophore ( ea) PCF Fluorophore
AcIETDpNA, Caspase8顯色底物 Caspase8 Substrate IETDpNA
Bisindolylmaleimide IV (25 mg) 3,4diHindol3ylHpyrrole2,5dione; Arcyriarubin A|BIM IV; Bisindolylmaleimide IV
Captopril ( g) SA 333|SQ ,225; [(2S)3mercapto2methyloxopropyl]Lproline
Minocycline (hydrochloride) (00 mg) (4S,aS)4,7bis(dimethylamino),4,4aS,5,5aR,6,,aoctahydro3,0,,atetrahydroxy,dioxo2naphthacenecarboxamide, monohydrochloride; NSC ; Minocycline (hydrochloride)
+)AS (5 mg) +)AS , N[2[[(S,2R)2(butoxymethyl)cyclohexyl]methoxy]ethyl]2fluorophenyl estercarbamic acid
葡聚糖凝膠S200HR250U
銨Ammonium, Quant Test Strips
2叔丁基5(4叔丁芐基硫)代4錄3(二氫)噠嗪酮,英文名或英文縮寫:Pyridaben,級別:BR,98%,規(guī)格:公斤
3基苯硼酸 3Aminobenzeoronic acid,98% 3048 G 通用試劑
L基甘安醋 LclphcCyclohqxylglycinq 2
HPCD羥基倍他環(huán)糊精毫克超,99%
9005327海藻酸;藻朊酸Alginic acid;PolyMannuronic acid;Sazio
3,5二L甲腺酸shēng huà shì jì容量:00克
4,5二苯基咪唑 4,5Diphenylimidazole,98% 40 5G 通用試劑
化膽堿 (細(xì)胞培養(yǎng)) Choline chloride (cell culture test, ... 00G 通用試劑
小鼠脂多糖結(jié)合蛋白(LBP)ELISA試劑盒 ,英文名: LBP ELISA Kit
巨噬細(xì)胞炎性蛋白α(MIP-α/CCL3)ELISA檢測試劑盒MonkeyMacrophageInflammatoryProtein-α,MIP-αELISAkit 96T/48T
犬葡萄糖-6-0酸酶(G6PC)免疫試劑盒 Dog Glucose-6-phosphatase,G6PC ELISA kit
英文名稱HumanAmylinELISAKit人胰淀素(Amylin)規(guī)格:96T/48T
化大鼠腎上腺髓質(zhì)素(AM)基因重組表達(dá)載體(pGEFP-AM)0微克
RatHistoneDeacetylase,HDELISA試劑盒大鼠組織蛋白去乙;(HD)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
小鼠白介素2(IL-2/P70)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
Rat neuropeptide Y (NP-Y) ELISA Kit 大鼠神經(jīng)肽Y(NP-Y)ELISA試劑盒
Humaarate-resistaacidphosphatase5b,ACP-5bELISAKit 人抗酸性0酸酶5b(ACP-5b)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
CCK-8試劑盒HumanCaspase3,Casp-3ELISA試劑盒人胱天蛋白酶3(Casp-3)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
轉(zhuǎn)基因棉花MON8893品系試劑盒20次
humansinglesandedDNAAibody,ssDNAELISAKit人抗單鏈DNA抗體/變性DNA抗體(ssDNA)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
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