以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑詳細(xì)說明：

中文名稱	細(xì)胞凋亡線粒體膜電位檢測試劑盒(JC-0)
英文名稱	JC-0 Apoptosis Detection Kit
規(guī)格	0T|20T|50T|00T

細(xì)胞凋亡線粒體膜電位檢測試劑盒(JC-0)本試劑盒可應(yīng)用于細(xì)胞、組織或純化的線粒體膜電位檢測。大量的研究表明線粒體與細(xì)胞凋亡密切相關(guān)，其中線粒體跨膜電位（△?）的破壞，被認(rèn)為是細(xì)胞凋亡級(jí)聯(lián)反應(yīng)過程中最早發(fā)生的事件之一，它發(fā)生在細(xì)胞核凋亡特征（染色質(zhì)濃縮、DNA斷裂）出現(xiàn)之前，一旦線粒體跨膜電位崩潰，則細(xì)胞凋亡不可逆轉(zhuǎn)。
本試劑盒采用JC-0 (Enhanced JC-)一種陽離子脂質(zhì)熒光染料作為檢測線粒體跨膜電位指示劑。JC-00 可以選擇性地進(jìn)入線粒體，且由于膜電位的增加，其顏色會(huì)發(fā)生從綠色到橙色的可逆性改變。這種特性是由于JC-00 聚合物的可逆結(jié)構(gòu)，在膜極化條件下，它的發(fā)射光由520nm(JC-00 單體發(fā)射光)轉(zhuǎn)移到570nm (J-聚合體發(fā)射光)。當(dāng)在490nm 處激發(fā)時(shí)，JC-00 發(fā)生從綠色到橙綠色的可逆改變。這兩種顏色都可以被流式細(xì)胞儀上裝好的一般濾光器檢測到，因此綠色發(fā)射光可以通過熒光通道（FL）進(jìn)行分析，橙綠色發(fā)射光可以通過熒光通道2（FL2）進(jìn)行分析。它除了有潛力用于流式細(xì)胞術(shù)，也可以用于熒光成像分析。
注意事項(xiàng)
. 微量試劑取用前請(qǐng)離心集液。
2. JC-0 避光保存及使用。
3. 細(xì)胞培養(yǎng)至匯合度80-90%，收集細(xì)胞量在×06/Test。
4. 對(duì)PH 變化過于敏感的細(xì)胞建議用胎牛血清取代Buffer 孵育染色及洗滌，或延長觀測時(shí)間。
5. 流式細(xì)胞儀檢測線粒體膜電位變化受到多種因素的影響，因誘導(dǎo)劑、細(xì)胞株類型，作用時(shí)間的不同而熒光強(qiáng)度比例都有不同，因此沒有通用標(biāo)準(zhǔn)的補(bǔ)償設(shè)門指南，因此每個(gè)試驗(yàn)需設(shè)陰性及陽性對(duì)照組進(jìn)行熒光補(bǔ)償及設(shè)門。
6. 組織需先制備單細(xì)胞懸液或提取純化線粒體后方可進(jìn)行檢測，可選用我司細(xì)胞懸液制備試劑盒或線粒體提取試劑盒。


注意事項(xiàng)
. 微量試劑取用前請(qǐng)離心集液。
2. Annexin V-PE/7-AAD 避光保存及使用。
3. 7-AAD 為潛在致癌物，操作時(shí)請(qǐng)采取防護(hù)措施，穿防護(hù)服、戴手套等。
4. 本試劑盒適用于檢測活細(xì)胞，流式細(xì)胞儀檢測時(shí)，細(xì)胞數(shù)量不以應(yīng)低于×05，，不推薦用于檢測組織樣本。
5. 推薦使用懸浮培養(yǎng)細(xì)胞。如果是貼壁細(xì)胞，建議適用不含EDTA 的胰酶消化，如消化不當(dāng)，可能引起假陽性，而用細(xì)胞刮子會(huì)造成細(xì)胞粘連成團(tuán)，而影響檢測。可將胰酶消化后細(xì)胞的保存在含2%BSA 的PBS 中，防止進(jìn)一步的損傷。
6. 細(xì)胞固定后可能導(dǎo)致熒光的淬滅，請(qǐng)不要固定樣品。
7. 因檢測細(xì)胞的類型、凋亡誘導(dǎo)劑種類、使用的檢測儀器不同，因而流式檢測的熒光補(bǔ)償也不同，因此建議每次檢測均需使用未經(jīng)凋亡誘導(dǎo)處理的細(xì)胞作為對(duì)照，進(jìn)行熒光補(bǔ)償?shù)恼{(diào)節(jié)。
產(chǎn)品特點(diǎn)：
.離心吸附柱內(nèi)硅基質(zhì)膜全部采用進(jìn)口世界著名公司特制吸附膜，柱與柱之間吸附量差異極小，可重復(fù)性好�？朔�了國產(chǎn)試劑盒膜質(zhì)量不穩(wěn)定的弊端。
2.使用了優(yōu)質(zhì)溶膠液，不含傳統(tǒng)溶膠液的碘化鈉和高氯酸鹽，不抑制回收后酶切、連接克隆等下游反應(yīng)。
3.獨(dú)特的溶膠液/結(jié)合液配方，將溶膠和結(jié)合兩種功能統(tǒng)一，因此一個(gè)試劑盒可以運(yùn)用于瓊脂糖DNA回收、PCR產(chǎn)物清潔純化、酶切產(chǎn)物純化回收等多種情況，節(jié)省了需購買多種試劑盒的費(fèi)用，
4.溶膠液/結(jié)合液調(diào)制成為了黃顏色，便于觀察溶膠效果和監(jiān)測pH值變化從而達(dá)到最佳結(jié)合效果，大大提高回收效率。
5.改進(jìn)的溶膠液配方,大大提高了緩沖能力和穩(wěn)定性，即使樣品變化很大也能將PH緩沖在最佳結(jié)合范圍內(nèi)。
6.快速、方便，不需要使用有毒的苯酚、氯仿等試劑，也不需要乙醇沉淀。 、貼壁細(xì)胞的消化
①吸除培養(yǎng)液，用無菌 PBS、Hanks 液或無血清培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞一次，以去除殘余的血清。
②加入少量 源葉生物 Trypsin-EDTA solution，略蓋過細(xì)胞即可，室溫放置 0.5～2min， 不同的細(xì)胞消化時(shí)間有所不同。
③顯微鏡下觀察，細(xì)胞明顯收縮，并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變
化；或者用槍吹打細(xì)胞發(fā)現(xiàn)細(xì)胞剛好可以被吹打下來，吸除胰酶細(xì)胞消化液。加入含血清的  完全細(xì)胞培養(yǎng)液，吹打下細(xì)胞，即可直接用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
④如果發(fā)現(xiàn)消化不足，則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞消化時(shí)間過長，未及吹打細(xì)胞，細(xì)胞已經(jīng)有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落， 直接用胰酶細(xì)胞培養(yǎng)液把細(xì)胞全部吹打下來。000～2000g 離心 min，沉淀細(xì)胞，盡量去除胰酶細(xì)胞消化液后，加入含血清的完全培養(yǎng)液重新懸浮細(xì)胞，即可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
2、組織的消化不同的組織需要消化的時(shí)間相差很大，通常以消化后可以充分打散組織為宜。

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