以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑詳細(xì)說(shuō)明：

中文名稱	Annexin V-PE/7-AAD凋亡流式檢測(cè)試劑盒
英文名稱	Annexin V-PE/7-AAD Apoptosis Detection Kit
規(guī)格	50次

Annexin V-PE/7-AAD凋亡流式檢測(cè)試劑盒本試劑盒是一種采用Annexin-PE與7-AAD雙染法進(jìn)行細(xì)胞早期凋亡分析的檢測(cè)試劑盒。
細(xì)胞凋亡早期改變發(fā)生在細(xì)胞膜表面，這些細(xì)胞膜表面的改變之一是磷脂酰絲氨酸(PS)從細(xì)胞膜內(nèi)轉(zhuǎn)移到細(xì)胞膜外，使PS暴露在細(xì)胞膜外表面。PS是一種帶負(fù)電荷的磷脂，正常主要存在于細(xì)胞膜的內(nèi)面，在細(xì)胞發(fā)生凋亡時(shí)細(xì)胞膜上的這種磷脂分布的不對(duì)稱性被破壞而使PS暴露在細(xì)胞膜外。Annexin V具有易于結(jié)合到磷脂類如PS的特性，對(duì)PS有高度的親和性。因此，該蛋白可充當(dāng)一敏感的探針檢測(cè)暴露在細(xì)胞膜表面的PS。PS轉(zhuǎn)移到細(xì)胞膜外不是凋亡所獨(dú)特的，也可發(fā)生在細(xì)胞壞死中。兩種細(xì)胞死亡方式間的差別是在凋亡的初始階段細(xì)胞膜是完好的，而細(xì)胞壞死在其早期階段細(xì)胞膜的完整性就被破壞。7-AAD是一種核酸染料，可進(jìn)入死細(xì)胞內(nèi)與DNA結(jié)合，能夠?qū)�壞死和凋亡晚期的�?xì)胞進(jìn)行染色。7-ADD與PI有著相似的熒光特性，但其發(fā)射波譜較PI窄，對(duì)其他檢測(cè)通道的干擾更小，在多色熒光分析中是PI的最佳替代品，因此通常將Annexin V-PE與ADD配合染色，以區(qū)別凋亡早期細(xì)胞與壞死細(xì)胞和凋亡的晚期細(xì)胞。
操作步驟：
、細(xì)胞樣品的準(zhǔn)備：
a．對(duì)于貼壁細(xì)胞：小心收集細(xì)胞培養(yǎng)液到一離心管內(nèi)備用。用胰酶消化細(xì)胞，至細(xì)胞可以被輕輕用移液管或槍頭吹打下來(lái)時(shí)，加入前面收集的細(xì)胞培養(yǎng)液，吹打下所有的貼壁細(xì)胞，并輕輕吹散細(xì)胞。再次收集到離心管內(nèi)。000×g左右離心3-5分鐘，沉淀細(xì)胞。對(duì)于特定的細(xì)胞，如果細(xì)胞沉淀不充分，可以適當(dāng)延長(zhǎng)離心時(shí)間或稍稍加大離心力。小心吸除上清，可以殘留約50μl左右的培養(yǎng)液，以避免吸走細(xì)胞。加入約ml 4℃預(yù)冷的PBS，重懸細(xì)胞，再次離心沉淀細(xì)胞，小心吸除上清。再次加入ml 4℃預(yù)冷的PBS，重懸細(xì)胞，再次離心沉淀細(xì)胞。
b．對(duì)于懸浮細(xì)胞：000×g左右離心3-5分鐘，沉淀細(xì)胞。對(duì)于特定的細(xì)胞，如果細(xì)胞沉淀不充分，可以適當(dāng)延長(zhǎng)離心時(shí)間或稍稍加大離心力。小心吸除上清，可以殘留約50微升左右的培養(yǎng)液，以避免吸走細(xì)胞。加入約ml 4℃預(yù)冷的PBS，重懸細(xì)胞，并轉(zhuǎn)移到.5毫升離心管內(nèi)。再次離心沉淀細(xì)胞，小心吸除上清，可以殘留約50μl左右的PBS，以避免吸走細(xì)胞。再次加入ml 4℃預(yù)冷的PBS，重懸細(xì)胞，再次離心沉淀細(xì)胞。
2、用去離子水按:3稀釋Binding Buffer(4ml Binding Buffer+2ml去離子水)。
3、用250μl Binding Buffer重新懸浮細(xì)胞，調(diào)節(jié)其濃度為×06/ml。
4、取 00μl 的細(xì)胞懸液于 5ml 流式管中，加入 5μl Annexin V-PE 和 0μl 7-AAD 溶液。
5、混勻后于室溫避光孵育 5 分鐘。
6、在反應(yīng)管中加400μl PBS，流式細(xì)胞儀(FACS)分析。
Jurkat細(xì)胞用順鉑誘導(dǎo)凋亡后用Annexin V-PE/7AAD雙染流式分析圖譜
儲(chǔ)存條件：2～8℃，避光保存


注意事項(xiàng)
. 微量試劑取用前請(qǐng)離心集液。
2. Annexin V-PE/7-AAD 避光保存及使用。
3. 7-AAD 為潛在致癌物，操作時(shí)請(qǐng)采取防護(hù)措施，穿防護(hù)服、戴手套等。
4. 本試劑盒適用于檢測(cè)活細(xì)胞，流式細(xì)胞儀檢測(cè)時(shí)，細(xì)胞數(shù)量不以應(yīng)低于×05，，不推薦用于檢測(cè)組織樣本。
5. 推薦使用懸浮培養(yǎng)細(xì)胞。如果是貼壁細(xì)胞，建議適用不含EDTA 的胰酶消化，如消化不當(dāng)，可能引起假陽(yáng)性，而用細(xì)胞刮子會(huì)造成細(xì)胞粘連成團(tuán)，而影響檢測(cè)�？蓪⒁让赶�化后細(xì)胞的保存在含2%BSA 的PBS 中，防止進(jìn)一步的損傷。
6. 細(xì)胞固定后可能導(dǎo)致熒光的淬滅，請(qǐng)不要固定樣品。
7. 因檢測(cè)細(xì)胞的類型、凋亡誘導(dǎo)劑種類、使用的檢測(cè)儀器不同，因而流式檢測(cè)的熒光補(bǔ)償也不同，因此建議每次檢測(cè)均需使用未經(jīng)凋亡誘導(dǎo)處理的細(xì)胞作為對(duì)照，進(jìn)行熒光補(bǔ)償?shù)恼{(diào)節(jié)。
產(chǎn)品特點(diǎn)：
.離心吸附柱內(nèi)硅基質(zhì)膜全部采用進(jìn)口世界著名公司特制吸附膜，柱與柱之間吸附量差異極小，可重復(fù)性好�？朔�了國(guó)產(chǎn)試劑盒膜質(zhì)量不穩(wěn)定的弊端。
2.使用了優(yōu)質(zhì)溶膠液，不含傳統(tǒng)溶膠液的碘化鈉和高氯酸鹽，不抑制回收后酶切、連接克隆等下游反應(yīng)。
3.獨(dú)特的溶膠液/結(jié)合液配方，將溶膠和結(jié)合兩種功能統(tǒng)一，因此一個(gè)試劑盒可以運(yùn)用于瓊脂糖DNA回收、PCR產(chǎn)物清潔純化、酶切產(chǎn)物純化回收等多種情況，節(jié)省了需購(gòu)買多種試劑盒的費(fèi)用，
4.溶膠液/結(jié)合液調(diào)制成為了黃顏色，便于觀察溶膠效果和監(jiān)測(cè)pH值變化從而達(dá)到最佳結(jié)合效果，大大提高回收效率。
5.改進(jìn)的溶膠液配方,大大提高了緩沖能力和穩(wěn)定性，即使樣品變化很大也能將PH緩沖在最佳結(jié)合范圍內(nèi)。
6.快速、方便，不需要使用有毒的苯酚、氯仿等試劑，也不需要乙醇沉淀。 、貼壁細(xì)胞的消化
①吸除培養(yǎng)液，用無(wú)菌 PBS、Hanks 液或無(wú)血清培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞一次，以去除殘余的血清。
②加入少量 源葉生物 Trypsin-EDTA solution，略蓋過(guò)細(xì)胞即可，室溫放置 0.5～2min， 不同的細(xì)胞消化時(shí)間有所不同。
③顯微鏡下觀察，細(xì)胞明顯收縮，并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變
化；或者用槍吹打細(xì)胞發(fā)現(xiàn)細(xì)胞剛好可以被吹打下來(lái)，吸除胰酶細(xì)胞消化液。加入含血清的  完全細(xì)胞培養(yǎng)液，吹打下細(xì)胞，即可直接用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
④如果發(fā)現(xiàn)消化不足，則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞消化時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，未及吹打細(xì)胞，細(xì)胞已經(jīng)有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落， 直接用胰酶細(xì)胞培養(yǎng)液把細(xì)胞全部吹打下來(lái)。000～2000g 離心 min，沉淀細(xì)胞，盡量去除胰酶細(xì)胞消化液后，加入含血清的完全培養(yǎng)液重新懸浮細(xì)胞，即可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
2、組織的消化不同的組織需要消化的時(shí)間相差很大，通常以消化后可以充分打散組織為宜。

上海莼試生物技術(shù)有限公司Shanghai C-reagent Biotechnology  Co. Ltd.  專業(yè)服務(wù)于生命科學(xué)領(lǐng)域，擁有分子生物學(xué)、醫(yī)學(xué)、藥學(xué)、化學(xué)等方面的科研技術(shù)團(tuán)隊(duì)，經(jīng)營(yíng)科研生化試劑、分析試劑、實(shí)驗(yàn)耗材，推出技術(shù)先進(jìn)、質(zhì)量穩(wěn)定的科研產(chǎn)品。為全國(guó)乃至于世界各地科研機(jī)構(gòu)、工業(yè)、電子、醫(yī)療、科技等領(lǐng)域的客戶，提供系統(tǒng)的產(chǎn)品資源及配套技術(shù)服務(wù)。推出十幾個(gè)種類產(chǎn)品線，部分產(chǎn)品接受定制服務(wù)！

       公司著力立足于生命科學(xué)領(lǐng)域，全力打造品質(zhì)生物科技產(chǎn)品鏈和技術(shù)服務(wù)鏈！