中文名稱：細胞周期與凋亡檢測試劑盒
英文名稱：Cell Cycle and Apoptosis Detection Kit
產(chǎn)品規(guī)格：50次
發(fā)貨周期：～3天
細胞周期與凋亡檢測試劑盒細胞周期與凋亡檢測試劑盒是一種采用經(jīng)典的碘化丙啶染色方法進行細胞周期與細胞凋亡分析的檢測試劑盒。本試劑盒每個樣品的細胞數(shù)量可以為0-00萬。
碘化丙啶是一種雙鏈DNA的熒光染料。碘化丙啶和雙鏈DNA結合后可以產(chǎn)生熒光，并且熒光強度和雙鏈DNA的含量成正比。細胞內(nèi)的DNA被碘化丙啶染色后，可以用流式細胞儀對細胞進行DNA含量測定，然后根據(jù)DNA含量的分布情況，可以進行細胞周期和細胞凋亡分析。碘化丙啶染色后，假設G0/G期細胞的熒光強度為，那么含有雙份基因組DNA的G2/M期細胞的熒光強度的理論值為2，正在進行DNA復制的S期細胞的熒光強度為-2之間。凋亡細胞由于細胞核發(fā)生濃縮以及發(fā)生DNA片段化(DNA fragmentation)導致部分基因組DNA片斷在染色過程中丟失，因此凋亡細胞碘化丙啶染色后呈現(xiàn)明顯的弱染，即熒光強度小于，在流式檢測的熒光圖上出現(xiàn)所謂的sub-G峰，即凋亡細胞峰。細胞發(fā)生凋亡時，由于胞漿和染色質(zhì)濃縮、核碎裂，產(chǎn)生凋亡小體，使細胞的光散射性質(zhì)發(fā)生變化。在細胞凋亡的早期，細胞對前向角光散射的能力顯著降低，對側向光散射的能力增加或沒有變化。在細胞凋亡的晚期，前向和側向光散射的信號均降低。因此可通過流式細胞儀測定細胞光散射的變化觀察細胞凋亡情況。
本試劑盒通常應用于培養(yǎng)的貼壁或懸浮細胞的細胞周期與細胞凋亡檢測。如果用于組織的細胞周期與細胞凋亡檢測，則必須把組織消化成單細胞狀態(tài)，才可以進行檢測。
操作步驟：
、細胞樣品的準備：
a．對于貼壁細胞：小心收集細胞培養(yǎng)液到一離心管內(nèi)備用。用胰酶消化細胞，至細胞可以被輕輕用移液管或槍頭吹打下來時，加入前面收集的細胞培養(yǎng)液，吹打下所有的貼壁細胞，并輕輕吹散細胞。再次收集到離心管內(nèi)。000×g左右離心3-5分鐘，沉淀細胞。對于特定的細胞，如果細胞沉淀不充分，可以適當延長離心時間或稍稍加大離心力。小心吸除上清，可以殘留約50μl左右的培養(yǎng)液，以避免吸走細胞。加入約毫升冰浴預冷的PBS，重懸細胞，再次離心沉淀細胞，小心吸除上清。再次加入ml冰浴預冷的PBS，重懸細胞。
b．對于懸浮細胞：000×g左右離心3-5分鐘，沉淀細胞。對于特定的細胞，如果細胞沉淀不充分，可以適當延長離心時間或稍稍加大離心力。小心吸除上清，可以殘留約50微升左右的培養(yǎng)液，以避免吸走細胞。加入約ml冰浴預冷的PBS，重懸細胞，并轉移到.5毫升離心管內(nèi)。再次離心沉淀細胞，小心吸除上清，可以殘留約50μl左右的PBS，以避免吸走細胞。再次加入ml冰浴預冷的PBS，重懸細胞。
2、細胞固定：
取4毫升冰浴預冷的95%乙醇，低速渦旋震蕩的同時加入毫升細胞懸液，混勻后4℃固定2小時或更長時間。固定2-24小時可能效果更佳。000×g左右離心3-5分鐘，沉淀細胞。對于特定的細胞，如果細胞沉淀不充分，可以適當延長離心時間或稍稍加大離心力。小心吸除上清，可以殘留約50μl左右的乙醇，以避免吸走細胞。加入約5ml冰浴預冷的PBS，重懸細胞，再次離心沉淀細胞，小心吸除上清，可以殘留約50μl左右的PBS，以避免吸走細胞。輕輕彈擊離心管底以適當分散細胞，避免細胞成團。
3、PI染色液的配制：
注：配制好的PI染色液短時間內(nèi)可以4℃保存，宜當日使用。
4、染色：
每管細胞樣品中加入400μl PI染色液，緩慢并充分重懸細胞沉淀，37℃避光溫浴30分鐘。隨后可以4℃或冰浴避光存放。染色完成后宜在24小時內(nèi)完成流式檢測，最好能在當日完成流式檢測。
5、流式檢測和分析：
用流式細胞儀在激發(fā)波長488 nm波長處檢測紅色熒光，同時檢測光散射情況。采用適當分析軟件進行細胞DNA含量分析和光散射分析。
儲存條件：-20℃，避光保存

注意事項：
、懸浮細胞用此法時必須經(jīng)離心后才能吸出上清再加DMSO。
2、Formazan 的生成不僅與活細胞數(shù)成比例，也受作用時間的影響，因此當樣品較多時測定的OD 值可能隨時間而變。
3、MTT 溶液為黃色，需避光保存，長時間光照會導致失效。當顏色變?yōu)榛揖G色時，請勿使用。MTT 溶液在4℃或較低溫度情況下會凝固，可以20-25℃水浴溫育片刻至全部融解后使用。
4、為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
PPA （5 mg）     5phenyl4Epentenol； PPA
Sunitinib Maleate， SU， Sutent， PHA0AD， PNU0AD     EZSolution Sunitinib Malate
（R）MG2 （25 mg）     N[（phenylmethoxy）carbonyl]LleucylN[（R）formyl3methylbutyl]Lleucinamide； （R）MG2
Naloxone （hydrochloride） （00 mg）     NAllyldihydrohydroxynormorphinone|NIH 90； 4,5αepoxy3,dihydroxy（2propenyl）morphinan6one, monohydrochloride
Stearoyl Ethanolamided3 （ mg）     N（2hydroxyethyl）octadecanamide，，d3； Ceramidd3|Stearic Acid Ethanolamided3； Stearoyl Ethanolamided3
6TAMRA CPG     6TAMRA CPG 000
GLUCOSETRISEDTASTERILEGTE緩沖液生物技術級00MLCOLD
酮彈性體　IINA
GLYMOγ(2,3環(huán)氧丙氧)丙基氧基烷00克FMP，%
苯 4Phenylbutyric acid,99% 2 5G 標準品
拂米龍 FluoroMqtholonq
M9MEDIUMBROTH,POWDERM9培養(yǎng)基肉湯生物技術級RT不sigma
287偶氮二羧97%Dietxyl azodicarboxylate
Rambach瓊脂支RT
4乙基 4Ethylresorcinol,98% 28608 5G 通用試劑
化亞/一化/甘/Mercuric chloride CP，99%， 500克 國產(chǎn)/進口
小鼠轉鐵蛋白受體(TFR/CD7)ELISA試劑盒 ，英文名： TFR/CD7 ELISA Kit
小鼠心肌營養(yǎng)素(CT-)ELISA檢測試劑盒Mousecardioophln,CT-ELISAKit 96T/48T
人抗α干擾素抗體(IFNα-Ab)免疫試劑盒 Human IerferonαAibody,IFNα-Ab ELISA Kit
Rabbiturokinaseplasminogenactivator,uPAELISAKit兔尿激酶型纖溶酶原激活物(uPA)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
載玻片細胞GSK-3ALPHA蛋白表達NBT顯色光學顯微鏡檢測試劑盒0/20次
Humanβ-lactamaseELISA試劑盒人β內(nèi)酰胺酶(β-lactamase)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
小鼠β-骨膠原交聯(lián)(βCTx)ELISA試劑盒 ，英文名： βCTx ELISA Kit
人多巴胺D2受體(D2R)ELISA檢測試劑盒HumandopamineD2receptor,D2RELISAKit 96T/48T
大鼠甲狀腺球蛋白(TG)免疫試劑盒 Rat Thyroglobulin,TG ELISA Kit
英文名稱RatE-SelectinELISAkit大鼠E選擇素(E-Selectin)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
抗體稀釋緩沖液00毫升
ELISAKitCALLA人普通急性淋巴細胞白血病抗原規(guī)格：48T/96T
細胞周期與凋亡檢測試劑盒操作規(guī)程
、在96孔板加入細胞00μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入00微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入00微升5000～0000個細胞（具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當濃度的0～0μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及00%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成× MTT 溶液。
5、每孔加50μL × MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液，每孔加50μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。
8、結果分析
 a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（完全培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（完全培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×00
 b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 0%時的藥物濃度(IC90)

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