Annexin V-FITC/PI細(xì)胞凋亡檢測試劑盒本試劑盒是一種采用Annexin V-FITC與PI雙染法進(jìn)行細(xì)胞早期凋亡分析的檢測試劑盒。
細(xì)胞凋亡早期改變發(fā)生在細(xì)胞膜表面，這些細(xì)胞膜表面的改變之一是磷脂酰絲氨酸(PS)從細(xì)胞膜內(nèi)轉(zhuǎn)移到細(xì)胞膜外，使PS暴露在細(xì)胞膜外表面。PS是一種帶負(fù)電荷的磷脂，正常主要存在于細(xì)胞膜的內(nèi)面，在細(xì)胞發(fā)生凋亡時(shí)細(xì)胞膜上的這種磷脂分布的不對稱性被破壞而使PS暴露在細(xì)胞膜外。Annexin V具有易于結(jié)合到磷脂類如PS的特性，對PS有高度的親和性。因此，該蛋白可充當(dāng)一敏感的探針檢測暴露在細(xì)胞膜表面的PS。PS轉(zhuǎn)移到細(xì)胞膜外不是凋亡所獨(dú)特的，也可發(fā)生在細(xì)胞壞死中。兩種細(xì)胞死亡方式間的差別是在凋亡的初始階段細(xì)胞膜是完好的，而細(xì)胞壞死在其早期階段細(xì)胞膜的完整性就被破壞。另外一種活細(xì)胞非透過性熒光染料碘化丙啶(Propidium Iodide，PI)不能通過完整的活細(xì)胞，但能夠?qū)�壞死和凋亡晚期的�?xì)胞進(jìn)行染色， 因此通常將Annexin V與PI配合染色， 以區(qū)別凋亡早期細(xì)胞與壞死細(xì)胞和凋亡的晚期細(xì)胞。
操作步驟：
、細(xì)胞樣品的準(zhǔn)備：
a．對于貼壁細(xì)胞：小心收集細(xì)胞培養(yǎng)液到一離心管內(nèi)備用。用胰酶消化細(xì)胞，至細(xì)胞可以被輕輕用移液管或槍頭吹打下來時(shí)，加入前面收集的細(xì)胞培養(yǎng)液，吹打下所有的貼壁細(xì)胞，并輕輕吹散細(xì)胞。再次收集到離心管內(nèi)。000×g左右離心3-5分鐘，沉淀細(xì)胞。對于特定的細(xì)胞，如果細(xì)胞沉淀不充分，可以適當(dāng)延長離心時(shí)間或稍稍加大離心力。小心吸除上清，可以殘留約50μl左右的培養(yǎng)液，以避免吸走細(xì)胞。加入約ml 4℃預(yù)冷的PBS，重懸細(xì)胞，再次離心沉淀細(xì)胞，小心吸除上清。再次加入ml 4℃預(yù)冷的PBS，重懸細(xì)胞，再次離心沉淀細(xì)胞。
b．對于懸浮細(xì)胞：000×g左右離心3-5分鐘，沉淀細(xì)胞。對于特定的細(xì)胞，如果細(xì)胞沉淀不充分，可以適當(dāng)延長離心時(shí)間或稍稍加大離心力。小心吸除上清，可以殘留約50微升左右的培養(yǎng)液，以避免吸走細(xì)胞。加入約ml 4℃預(yù)冷的PBS，重懸細(xì)胞，并轉(zhuǎn)移到.5毫升離心管內(nèi)。再次離心沉淀細(xì)胞，小心吸除上清，可以殘留約50μl左右的PBS，以避免吸走細(xì)胞。再次加入ml 4℃預(yù)冷的PBS，重懸細(xì)胞，再次離心沉淀細(xì)胞。
2、用去離子水按 :3 稀釋Binding Buffer(4ml Binding Buffer +2ml 去離子水)。
3、用 250μl Binding Buffer重新懸浮細(xì)胞，調(diào)節(jié)其濃度為 ×06/ml。
4、取 00μl 的細(xì)胞懸液于 5ml 流式管中，加入 5μl Annexin V/FITC 和 0μl 20μg/ml的PI溶液。
5、混勻后于室溫避光孵育 5 分鐘。
6、在反應(yīng)管中加 400μl PBS，流式細(xì)胞儀(FACS)分析。
儲(chǔ)存條件：2～8℃，避光保存
以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑詳細(xì)說明：

中文名稱	Annexin V-FITC/PI細(xì)胞凋亡檢測試劑盒
英文名稱	Annexin V-FITC/PI Apoptosis Detection Kit
規(guī)格	50次

注意事項(xiàng)
. 微量試劑取用前請離心集液。
2. Annexin V-PE/7-AAD 避光保存及使用。
3. 7-AAD 為潛在致癌物，操作時(shí)請采取防護(hù)措施，穿防護(hù)服、戴手套等。
4. 本試劑盒適用于檢測活細(xì)胞，流式細(xì)胞儀檢測時(shí)，細(xì)胞數(shù)量不以應(yīng)低于×05，，不推薦用于檢測組織樣本。
5. 推薦使用懸浮培養(yǎng)細(xì)胞。如果是貼壁細(xì)胞，建議適用不含EDTA 的胰酶消化，如消化不當(dāng)，可能引起假陽性，而用細(xì)胞刮子會(huì)造成細(xì)胞粘連成團(tuán)，而影響檢測�？蓪⒁让赶�化后細(xì)胞的保存在含2%BSA 的PBS 中，防止進(jìn)一步的損傷。
6. 細(xì)胞固定后可能導(dǎo)致熒光的淬滅，請不要固定樣品。
7. 因檢測細(xì)胞的類型、凋亡誘導(dǎo)劑種類、使用的檢測儀器不同，因而流式檢測的熒光補(bǔ)償也不同，因此建議每次檢測均需使用未經(jīng)凋亡誘導(dǎo)處理的細(xì)胞作為對照，進(jìn)行熒光補(bǔ)償?shù)恼{(diào)節(jié)。
產(chǎn)品特點(diǎn)：
.離心吸附柱內(nèi)硅基質(zhì)膜全部采用進(jìn)口世界著名公司特制吸附膜，柱與柱之間吸附量差異極小，可重復(fù)性好。克服了國產(chǎn)試劑盒膜質(zhì)量不穩(wěn)定的弊端。
2.使用了優(yōu)質(zhì)溶膠液，不含傳統(tǒng)溶膠液的碘化鈉和高氯酸鹽，不抑制回收后酶切、連接克隆等下游反應(yīng)。
3.獨(dú)特的溶膠液/結(jié)合液配方，將溶膠和結(jié)合兩種功能統(tǒng)一，因此一個(gè)試劑盒可以運(yùn)用于瓊脂糖DNA回收、PCR產(chǎn)物清潔純化、酶切產(chǎn)物純化回收等多種情況，節(jié)省了需購買多種試劑盒的費(fèi)用，
4.溶膠液/結(jié)合液調(diào)制成為了黃顏色，便于觀察溶膠效果和監(jiān)測pH值變化從而達(dá)到最佳結(jié)合效果，大大提高回收效率。
5.改進(jìn)的溶膠液配方,大大提高了緩沖能力和穩(wěn)定性，即使樣品變化很大也能將PH緩沖在最佳結(jié)合范圍內(nèi)。
6.快速、方便，不需要使用有毒的苯酚、氯仿等試劑，也不需要乙醇沉淀。 、貼壁細(xì)胞的消化
①吸除培養(yǎng)液，用無菌 PBS、Hanks 液或無血清培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞一次，以去除殘余的血清。
②加入少量 源葉生物 Trypsin-EDTA solution，略蓋過細(xì)胞即可，室溫放置 0.5～2min， 不同的細(xì)胞消化時(shí)間有所不同。
③顯微鏡下觀察，細(xì)胞明顯收縮，并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變
化；或者用槍吹打細(xì)胞發(fā)現(xiàn)細(xì)胞剛好可以被吹打下來，吸除胰酶細(xì)胞消化液。加入含血清的  完全細(xì)胞培養(yǎng)液，吹打下細(xì)胞，即可直接用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
④如果發(fā)現(xiàn)消化不足，則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞消化時(shí)間過長，未及吹打細(xì)胞，細(xì)胞已經(jīng)有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落， 直接用胰酶細(xì)胞培養(yǎng)液把細(xì)胞全部吹打下來。000～2000g 離心 min，沉淀細(xì)胞，盡量去除胰酶細(xì)胞消化液后，加入含血清的完全培養(yǎng)液重新懸浮細(xì)胞，即可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
2、組織的消化不同的組織需要消化的時(shí)間相差很大，通常以消化后可以充分打散組織為宜。
PPA （500 ug）     5phenyl4Epentenol； PPA
，3Diazacyclopenta2，4diene； ，3diazole     Imidazole， MegaPure
CAY06 （50 mg）     5（4（2（thiophen2yl）ethoxy）benzylidene）thiazolidine2，4dione； Thiazolidinedione derivative； CAY06
Isoproterenol （hydrochloride） （00 mg）     Isoprenaline|NSC 3|NSC 897； 4[hydroxy2[（methylethyl）amino]ethyl], monohydrochloride
7（Z），0（Z），（Z），（Z），（Z）N（2hydroxyethyl）Docosapentaenamide （ mg）     N（2hydroxyethyl）7Z，0Z，Z，Z，Zdocosapentaenamide； 7（Z），0（Z），（Z），（Z），（Z）N（2hydroxyethyl）Docosapentaenamide
Tide Quencher 5 CPG [TQ5 CPG] 000      Tide Quencher 5 CPG [TQ5 CPG] 000
葡萄糖酸鹽，英文名或英文縮寫： gluconate，級(jí)別：BR，土豆來源，規(guī)格：0克
酮　OV6Silicone OV6
正辛基谷酸，英文名或英文縮寫：OGP，級(jí)別：精制級(jí)，00050000u/g，規(guī)格：00克
胺4磺酸鈉 4Aminosulfonic acid sod... 02 25G 通用試劑
熒光速二醋鹽 FLUORqSCqIN DIcCqTcTq 2
M9CAMEDIUMBROTH,POWDERM9CA 培養(yǎng)基肉湯生物技術(shù)級(jí)粉末RT不sigma
(蘇木精)
SudanⅣ蘇旦IV5克BR
縮全二醇 ccqtcl 022
過銨 (電泳級(jí)) Ammonium persulfate (for electrophores... 0 25G 分離試劑
小鼠轉(zhuǎn)鐵蛋白受體2(TFR2)ELISA試劑盒 ，英文名： TFR2 ELISA Kit
犬肝素輔因子Ⅱ(HCⅡ)ELISA檢測試劑盒CanineheparincofactorⅡ,HCⅡELISAKit 96T/48T
犬血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)免疫試劑盒 Dog angiotensin I conveing enzyme(peptidyl-dipeptidase A)(ACE)ELISA kit
英文名稱HA透明質(zhì)酸規(guī)格：96T/48T
超白金TAGDNA聚合酶200U
Ratglucocoicoidreceptor,GRELISA試劑盒大鼠糖皮質(zhì)類固醇受體(GR)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
小鼠β干擾素(IFN-β/IFNB)ELISA試劑盒 ，英文名： IFN-β/IFNB ELISA Kit
大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶3(MMP-3)ELISA檢測試劑盒Ratmaixmetalloproteinase3,MMP-3ELISAkit 96T/48T
人P0蛋白抗體(IgM)免疫試劑盒 Human myelin protein zero aibody IgM ELISA Kit
Annexin V-FITC/PI細(xì)胞凋亡檢測試劑盒英文名稱MouseSolubleCD40ligandELISAKit小鼠可溶性CD40配體(sCD40L)規(guī)格：96T/48T
胞漿谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶(GSHST)活性酶動(dòng)力比色法定量檢測試劑盒20次
rabbitThyroidStimulatingHormone,TSHELISA試劑盒兔子促甲狀腺素(TSH)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

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