以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑詳細(xì)說(shuō)明：

中文名稱	CFDA SE細(xì)胞增殖與示蹤檢測(cè)試劑盒
英文名稱	CFDA SE Cell Proliferation Assay and Tracking Kit
規(guī)格	2000次

CFDA SE細(xì)胞增殖與示蹤檢測(cè)試劑盒本試劑盒是基于一種新型熒光探針CFDA SE的用于細(xì)胞增殖檢測(cè)和細(xì)胞熒光示蹤的檢測(cè)試劑盒。CFDA SE目前被廣泛用于替代MTT法或[3H]-thymidine摻入等其它細(xì)胞增殖檢測(cè)方法�；�于CFDA SE熒光標(biāo)記的細(xì)胞增殖檢測(cè)和[3H]-thymidine摻入、BrdU標(biāo)記獲得的檢測(cè)結(jié)果完全一致，但同時(shí)可以提供更多的細(xì)胞增殖信息。使用CFDA SE檢測(cè)可以提供整個(gè)細(xì)胞群中有多少比例的細(xì)胞分裂了次、2次或更多次數(shù)，同時(shí)如果和其它熒光探針聯(lián)用，可以獲取不同分裂次數(shù)細(xì)胞的其它相關(guān)信息。
CFDA-SE的全稱為Carboxyfluorescein diacetate, succinimidyl ester，分子式為C29H9NO，分子量為557.47，CAS number為50347-59-4。CFDA SE可以通透細(xì)胞膜，進(jìn)入細(xì)胞后可以被細(xì)胞內(nèi)的酯酶(esterase)催化分解成CFSE，CFSE可以偶發(fā)性地(spontaneously)并不可逆地和細(xì)胞內(nèi)蛋白的Lysine殘基或其它氨基發(fā)生結(jié)合反應(yīng)，并標(biāo)記這些蛋白。在加入熒光探針CFDA SE后大約24小時(shí)，即可充分標(biāo)記細(xì)胞。被CFDA SE標(biāo)記的非分裂細(xì)胞的熒光非常穩(wěn)定，穩(wěn)定標(biāo)記的時(shí)間可達(dá)數(shù)個(gè)月。CFDA SE標(biāo)記細(xì)胞的熒光非常均一，比以前使用的其它細(xì)胞示蹤熒光探針例如PKH26的熒光更加均一，并且分裂后的子代細(xì)胞的熒光分配也更均勻。
由于CFDA SE標(biāo)記細(xì)胞的熒光非常均勻和穩(wěn)定，每分裂一次子代細(xì)胞的熒光會(huì)減弱一半，這樣通過(guò)流式細(xì)胞儀檢測(cè)就可以檢測(cè)出沒(méi)有分裂的細(xì)胞，分裂一次的細(xì)胞(/2的熒光強(qiáng)度)，分離兩次的細(xì)胞(/4的熒光強(qiáng)度)，分裂三次的細(xì)胞(/8的熒光強(qiáng)度)以及類似的其它分裂次數(shù)的細(xì)胞。采用CFDA SE通過(guò)流式細(xì)胞儀檢測(cè)獲得的檢測(cè)結(jié)果參考右圖。每一個(gè)峰代表一種分裂次數(shù)的細(xì)胞，從右至左的峰通常依次為分裂0次、次、2次、3次等次數(shù)的細(xì)胞。分裂次數(shù)較多后，分裂0次或次等沒(méi)有分裂或分裂次數(shù)較少的細(xì)胞會(huì)逐漸減少直至檢測(cè)不到。
使用CFDA SE可以檢測(cè)分裂多達(dá)8次或更多次數(shù)的細(xì)胞增殖。目前CFDA SE標(biāo)記細(xì)胞后通常用流式細(xì)胞儀進(jìn)行細(xì)胞增殖檢測(cè)。最常用于淋巴細(xì)胞的增殖檢測(cè)，也可以用于成纖維細(xì)胞、NK細(xì)胞等其它細(xì)胞的增殖檢測(cè)，甚至還可以用于細(xì)菌增殖的檢測(cè)。
CFDA SE標(biāo)記細(xì)胞呈綠色熒光，檢測(cè)時(shí)的激發(fā)波長(zhǎng)可以選擇488nm，此時(shí)的發(fā)射波長(zhǎng)為58nm，使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)時(shí)可以采用FL detection channel。CFDA SE標(biāo)記的細(xì)胞也可以用熒光顯微鏡進(jìn)行觀察。CFDA SE標(biāo)記的細(xì)胞無(wú)論在體外還是體內(nèi)都不會(huì)使鄰近細(xì)胞染色。即CFDA SE熒光探針完成標(biāo)記后不會(huì)從一個(gè)細(xì)胞轉(zhuǎn)移到鄰近細(xì)胞。CFDA SE標(biāo)記細(xì)胞僅需5-5分鐘即可完成。對(duì)于不同細(xì)胞，最佳標(biāo)記時(shí)間需自行摸索。
本試劑盒提供了配制CFDA SE所需的溶液以及CFDA SE進(jìn)行細(xì)胞標(biāo)記時(shí)所需的配套試劑。如果每個(gè)檢測(cè)樣品的熒光探針標(biāo)記體積為ml，本試劑盒共可以檢測(cè)2000個(gè)樣品。
試劑盒組份：
CFDA SE——————————————管
CFDA SE溶劑————————————ml/管，共兩管
CFDA SE細(xì)胞標(biāo)記液(0X) ——————00ml/瓶，共兩瓶
儲(chǔ)存條件：-20℃，有效期6個(gè)月。


注意事項(xiàng)
. 微量試劑取用前請(qǐng)離心集液。
2. Annexin V-PE/7-AAD 避光保存及使用。
3. 7-AAD 為潛在致癌物，操作時(shí)請(qǐng)采取防護(hù)措施，穿防護(hù)服、戴手套等。
4. 本試劑盒適用于檢測(cè)活細(xì)胞，流式細(xì)胞儀檢測(cè)時(shí)，細(xì)胞數(shù)量不以應(yīng)低于×05，，不推薦用于檢測(cè)組織樣本。
5. 推薦使用懸浮培養(yǎng)細(xì)胞。如果是貼壁細(xì)胞，建議適用不含EDTA 的胰酶消化，如消化不當(dāng)，可能引起假陽(yáng)性，而用細(xì)胞刮子會(huì)造成細(xì)胞粘連成團(tuán)，而影響檢測(cè)�？蓪⒁让赶�化后細(xì)胞的保存在含2%BSA 的PBS 中，防止進(jìn)一步的損傷。
6. 細(xì)胞固定后可能導(dǎo)致熒光的淬滅，請(qǐng)不要固定樣品。
7. 因檢測(cè)細(xì)胞的類型、凋亡誘導(dǎo)劑種類、使用的檢測(cè)儀器不同，因而流式檢測(cè)的熒光補(bǔ)償也不同，因此建議每次檢測(cè)均需使用未經(jīng)凋亡誘導(dǎo)處理的細(xì)胞作為對(duì)照，進(jìn)行熒光補(bǔ)償?shù)恼{(diào)節(jié)。
產(chǎn)品特點(diǎn)：
.離心吸附柱內(nèi)硅基質(zhì)膜全部采用進(jìn)口世界著名公司特制吸附膜，柱與柱之間吸附量差異極小，可重復(fù)性好�？朔�了國(guó)產(chǎn)試劑盒膜質(zhì)量不穩(wěn)定的弊端。
2.使用了優(yōu)質(zhì)溶膠液，不含傳統(tǒng)溶膠液的碘化鈉和高氯酸鹽，不抑制回收后酶切、連接克隆等下游反應(yīng)。
3.獨(dú)特的溶膠液/結(jié)合液配方，將溶膠和結(jié)合兩種功能統(tǒng)一，因此一個(gè)試劑盒可以運(yùn)用于瓊脂糖DNA回收、PCR產(chǎn)物清潔純化、酶切產(chǎn)物純化回收等多種情況，節(jié)省了需購(gòu)買多種試劑盒的費(fèi)用，
4.溶膠液/結(jié)合液調(diào)制成為了黃顏色，便于觀察溶膠效果和監(jiān)測(cè)pH值變化從而達(dá)到最佳結(jié)合效果，大大提高回收效率。
5.改進(jìn)的溶膠液配方,大大提高了緩沖能力和穩(wěn)定性，即使樣品變化很大也能將PH緩沖在最佳結(jié)合范圍內(nèi)。
6.快速、方便，不需要使用有毒的苯酚、氯仿等試劑，也不需要乙醇沉淀。 、貼壁細(xì)胞的消化
①吸除培養(yǎng)液，用無(wú)菌 PBS、Hanks 液或無(wú)血清培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞一次，以去除殘余的血清。
②加入少量 源葉生物 Trypsin-EDTA solution，略蓋過(guò)細(xì)胞即可，室溫放置 0.5～2min， 不同的細(xì)胞消化時(shí)間有所不同。
③顯微鏡下觀察，細(xì)胞明顯收縮，并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變
化；或者用槍吹打細(xì)胞發(fā)現(xiàn)細(xì)胞剛好可以被吹打下來(lái)，吸除胰酶細(xì)胞消化液。加入含血清的  完全細(xì)胞培養(yǎng)液，吹打下細(xì)胞，即可直接用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
④如果發(fā)現(xiàn)消化不足，則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞消化時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，未及吹打細(xì)胞，細(xì)胞已經(jīng)有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落， 直接用胰酶細(xì)胞培養(yǎng)液把細(xì)胞全部吹打下來(lái)。000～2000g 離心 min，沉淀細(xì)胞，盡量去除胰酶細(xì)胞消化液后，加入含血清的完全培養(yǎng)液重新懸浮細(xì)胞，即可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
2、組織的消化不同的組織需要消化的時(shí)間相差很大，通常以消化后可以充分打散組織為宜。

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