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小鼠5核苷酸酶(5-NT)檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品信息:
中文名:小鼠5核苷酸酶(5-NT)檢測(cè)試劑盒 |
雙抗體夾心法實(shí)驗(yàn)步驟:
一、實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備
實(shí)驗(yàn)材料:血清、血漿、體液
實(shí)驗(yàn)儀器:酶標(biāo)比色計(jì)、96 孔板、移液槍、離心管、離心管盒
所需試劑及試劑盒:碳酸鹽包被緩沖液、抗體球蛋白、吐溫-20、檸檬酸、硫酸
二、實(shí)驗(yàn)操作
包被抗體:用包被緩沖液稀釋特異性抗體球蛋白至最適濃度(1~10 μg /ml),每凹孔加 0.3 ml,4 ℃ 過(guò)夜,或 37 ℃ 水浴 3 小時(shí),貯存冰箱
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洗滌:移去包被液,凹孔用洗滌緩沖液(含 0.05% 吐溫-20)洗 3 次,每次 5 分鐘
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每凹孔加入 0.2 ml 用稀釋緩沖液稀釋的含抗原的被檢標(biāo)本,37 ℃ 作用 1~2 小時(shí)
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加入 0.2 ml 用稀釋緩沖液稀釋的酶標(biāo)記特異性抗體溶液,37 ℃ 作用 1~2 小時(shí)或由預(yù)試實(shí)驗(yàn)確定作用時(shí)間
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加入 0.2 ml 底物溶液于每個(gè)凹孔 (OPD 或 OT),室溫作用 30 分鐘(另作一空白對(duì)照,0.4 ml 底物加 0.1 ml 終止劑)
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加終止劑:每凹孔加 2M H2SO4 或 2 M 檸檬酸 0.05 ml
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觀察記錄結(jié)果:目測(cè)或用酶標(biāo)比色計(jì)測(cè)定(OPD 用 492 nm)OD 值
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