凝血酶原時(shí)間（PT）檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說明書（中文版）

主要用途

凝血酶原時(shí)間（PT）檢測(cè)試劑是一種旨在通過組織因子替代反應(yīng)物，與血漿樣品混合后，加入鈣離子啟動(dòng)凝血反應(yīng)，產(chǎn)生凝塊，通過分光光度儀檢測(cè)，來測(cè)定樣品中凝塊形成時(shí)間的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適用于各種動(dòng)物和人體血漿樣品凝血系統(tǒng)的檢測(cè)，以及凝血因子和抑制劑的的篩選。產(chǎn)品嚴(yán)格無菌，即到即用，操作簡(jiǎn)捷，性能穩(wěn)定。

 

技術(shù)背景

 

凝血酶原時(shí)間（thromboplastin time；PT）是指血漿在組織凝血活酶（人腦、兔腦、胎盤及肺組織等制品的浸出液）和鈣離子等的參與下，使凝血酶原變?yōu)槟�血酶，后者使纖維蛋白原轉(zhuǎn)變?yōu)槔w維蛋白，形成血漿纖維蛋白凝塊（fibrin clot）所需的時(shí)間長(zhǎng)度。其反映和檢測(cè)血液系統(tǒng)外源性（extrinsic）或稱常見（common）凝血通路或機(jī)制的生理或病理狀況。外源性凝血通路或機(jī)制由凝血因子2、7、5、10、1等構(gòu)成。正常凝血酶原時(shí)間通常為11至15秒。凝血酶原時(shí)間用于篩選出血傾向的病人，即外源性凝血系統(tǒng)異常的病人；定量檢測(cè)凝血因子1、2、5、7、10、凝血酶原（prothrombin）、纖維蛋白原（fibrinogen）等差異和缺陷；檢測(cè)血液病理性凝血抑制劑，例如狼瘡抗凝物（lupus anticoagulant；LA）；監(jiān)測(cè)華法林（Warfarin）抗凝血療法和凝血因子替代療法。維生素K缺乏、肝病、低（無）纖維蛋白原血癥 、遺傳性無纖維蛋白原血癥（congenital afibrinogenemia）、凝血因子5缺陷、阻塞性黃疸、淀粉樣紫癜（amyloid purpura）、肝素、狼瘡抗凝物等導(dǎo)致凝血酶原時(shí)間延長(zhǎng)；而口服避孕藥、高凝狀態(tài)和血栓性疾病等則引起凝血酶原時(shí)間縮短。其檢測(cè)方法在于使用枸櫞酸抗凝后的血漿和組織因子（來自于人胎盤促凝血酶原激酶（human placental thromboplastin）等，混合在一起，加熱孵育后加入鈣離子后啟動(dòng)凝血反應(yīng)。

 

產(chǎn)品內(nèi)容

 

抗凝液（Reagent A）   5毫升

反應(yīng)液（Reagent B）     1管

稀釋液（Reagent C）   5毫升

標(biāo)準(zhǔn)液（Reagent D）   500微升（另購(gòu)）

產(chǎn)品說明書      1份

 

保存方式

 

保存標(biāo)準(zhǔn)液（Reagent D）在-20℃冰箱里；其余的保存在4℃冰箱里；反應(yīng)液（Reagent B）一旦啟用，保存在-20℃冰箱里；有效保證3月 

 

用戶自備

 

2毫升離心管：用于樣品操作的容器

1.5毫升離心管：用于樣品反應(yīng)的容器

微型臺(tái)式離心機(jī)：用于樣品操作

培養(yǎng)箱或恒溫水槽：用于反應(yīng)物孵育

計(jì)時(shí)器：用于反應(yīng)計(jì)時(shí)

比色皿：用于樣品凝血儀測(cè)定的容器

凝血儀：用于樣品凝塊形成分析

 

實(shí)驗(yàn)步驟

 

• 血漿制備

 

• 準(zhǔn)備好2毫升離心管（注意：1小時(shí)內(nèi)完成后續(xù)操作）
• 加入200微升抗凝液（Reagent A） 
• 抽取1.8毫升血液到含抗凝液（Reagent A）的離心管
• 放進(jìn)微型臺(tái)式離心機(jī)離心10分鐘，速度為3000g 
• 小心移取上層黃色液體到新的2毫升離心管――此為血漿成分（注意：避免觸碰白色液體層）
• 即刻置于冰槽里備用（注意：2小時(shí)內(nèi)使用）

 

• 測(cè)定準(zhǔn)備

 

• 準(zhǔn)備好上述制備的血漿樣品
• 設(shè)定好凝血儀并預(yù)熱
• 實(shí)驗(yàn)開始前，移出4毫升稀釋液（Reagent C）到反應(yīng)液（Reagent B）管里，混勻后，標(biāo)記為反應(yīng)工作液，然后移出200微升到新的1.5毫升離心管，置于37℃恒溫培養(yǎng)箱里孵育30分鐘，其余的即刻放進(jìn)-20℃保存?zhèn)溆?/li>

 

• 凝血測(cè)定（手工操作）

 

• 準(zhǔn)備好1個(gè)1.5毫升離心管
• 加入100微升上述制備的待測(cè)樣品，混勻
• 放進(jìn)37℃培養(yǎng)箱里孵育3分鐘（注意：不宜超過5分鐘）
• 即刻加入上述孵育的200微升反應(yīng)工作液；同時(shí)開啟計(jì)時(shí)器進(jìn)行計(jì)時(shí)（注意：以秒計(jì)時(shí)）
• 傾斜離心管觀察凝塊形成，直至液體凝固；同時(shí)關(guān)閉計(jì)時(shí)器結(jié)束計(jì)時(shí)
• 正常參考范圍：

手工操作：11至15秒

凝血儀操作：10至13秒

• 其它參數(shù)計(jì)算公式：

• 凝血酶原時(shí)間比值（prothrombin ratio；PR）：即病人的凝血酶原時(shí)間除以正常參比血漿的凝血酶原時(shí)間所得的比值

PR=（樣品凝血酶原時(shí)間；秒）÷（正常對(duì)照或標(biāo)準(zhǔn)樣品凝血酶原時(shí)間；秒）

參考范圍：1±0.15

 

• 國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)化值（International normalised ratio；INR）

 

INR=PR^ISI （ISI 為國(guó)際敏感指數(shù)（internationalsensitivity index，為0.97代表凝血激酶反應(yīng)性）

參考范圍：0.8-1.5

注意事項(xiàng)

 

• 本產(chǎn)品為20次操作，包括標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照測(cè)定
• 操作時(shí)，須戴手套
• 血液采集，避免使用肝素、EDTA抗凝管
• 樣品避免溶血，采血避免損傷組織
• 溶血、脂血、腸胃外喂養(yǎng)（parenteral feeding）樣品或血漿中含有肝素、纖維蛋白（fibronogen）、狼瘡抗凝物（lupus anticoagulant；LA）、水蛭素（Hirudin）等則干擾檢測(cè)
• 血漿樣品避免反復(fù)凍融：4℃環(huán)境維持4小時(shí)；－20℃維持2月；－80℃維持6月
• 標(biāo)準(zhǔn)液（Reagent D）為標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照血漿
• 建議用戶使用正常對(duì)照樣品，建立自己的正常參考值范圍
• 用戶可以使用各種自動(dòng)和半自動(dòng)凝血儀：例如Sysmex CA 7000等進(jìn)行檢測(cè)，按照儀器操作手冊(cè)操作
• 用戶可以使用660nm波長(zhǎng)的光度儀進(jìn)行檢測(cè)
• 本公司提供系列血液凝集檢測(cè)試劑產(chǎn)品

 

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

 

• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定檢測(cè)敏感

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