大量SperfusinX脂質(zhì)體靜脈法siRNA動(dòng)物轉(zhuǎn)染試劑盒產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)（中文版）

主要用途

YIJI大量SperfusinX脂質(zhì)體靜脈法siRNA動(dòng)物轉(zhuǎn)染試劑是一種旨在通過(guò)高效低毒的單價(jià)陽(yáng)離子脂質(zhì)體介導(dǎo)載體，能與目標(biāo)siRNA形成復(fù)合物，進(jìn)行體內(nèi)轉(zhuǎn)染操作的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過(guò)精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適用于各種DNA、RNA、寡聚核苷酸、核蛋白等的轉(zhuǎn)染，可以轉(zhuǎn)染各種類(lèi)型的貼壁和懸浮培養(yǎng)細(xì)胞系（株）。尤其可用于動(dòng)物體內(nèi)直接轉(zhuǎn)染。產(chǎn)品嚴(yán)格無(wú)菌，即到即用，無(wú)核酶污染，配比優(yōu)化，操作簡(jiǎn)捷，性能穩(wěn)定，轉(zhuǎn)染效率明顯。

 

技術(shù)背景

 

自1973年Greoridis最先應(yīng)用脂質(zhì)體包裹生物分子導(dǎo)入細(xì)胞后，人們開(kāi)始應(yīng)用脂質(zhì)體將各種生物大分子導(dǎo)入細(xì)胞，實(shí)驗(yàn)證明脂質(zhì)體作為基因載體可將各種DNA轉(zhuǎn)入細(xì)菌、真菌、植物原生質(zhì)和動(dòng)物細(xì)胞，并可在受體細(xì)胞中表達(dá)。脂質(zhì)體作為外源基因的載體，制備簡(jiǎn)單，無(wú)免疫原性，成分無(wú)毒性；可以運(yùn)載不同大小的基因；可以抵抗核酸酶的作用，延緩基因降解；可以傳輸至不同類(lèi)型的細(xì)胞；脂質(zhì)體膜上滲入歸巢裝置，可以增加靶向性等。SperfusinX為轉(zhuǎn)染效率更高、細(xì)胞毒性更低的新型脂質(zhì)型介導(dǎo)載體，經(jīng)包裝在任何條件下形成高效轉(zhuǎn)染復(fù)合物。穿膜效率高，轉(zhuǎn)染速度快。對(duì)細(xì)胞的負(fù)面影響最低。體外培養(yǎng)時(shí)，培養(yǎng)血清和抗菌素不影響其轉(zhuǎn)染效率；在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中成功用于體內(nèi)轉(zhuǎn)染,為基因治療應(yīng)用于臨床提供有利條件。

 

產(chǎn)品內(nèi)容

 

YIJI轉(zhuǎn)染液（Reagent A）    2毫升

YIJI介導(dǎo)液（Reagent B）  500微升

產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)    1份

 

保存方式

 

保存在4℃冰箱里，有效保證6月

 

用戶(hù)自備

 

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：用于基因療法的目標(biāo)動(dòng)物

1.5毫升離心管：用于轉(zhuǎn)染操作的容器

1毫升針筒27號(hào)針頭：用于注射的器械

 

實(shí)驗(yàn)步驟

 

實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前，準(zhǔn)備好實(shí)驗(yàn)所需的動(dòng)物（大鼠或小鼠）。同時(shí)完成siRNA雙鏈退火復(fù)合。然后進(jìn)行下列操作。

 

• 移取50微升YIJI介導(dǎo)液（Reagent B）到1.5毫升離心管
• 加入120微升YIJI轉(zhuǎn)染液（Reagent A）
• 用200微升槍頭上下抽吸混勻
• 移取10微升（總量25微克）用戶(hù)自備的siRNA樣品到另一個(gè)新的1.5毫升離心管
• 加入50微升YIJI轉(zhuǎn)染液（Reagent A）
• 用200微升槍頭上下抽吸混勻
• 即刻全部移入到含有YIJI介導(dǎo)液（Reagent B）的離心管里
• 用200微升槍頭上下抽吸混勻
• 置于室溫下靜置30分鐘（注意：混合液呈現(xiàn)混濁，但沒(méi)有沉淀）
• 使用1毫升針筒27號(hào)針頭吸入230微升上述混合液
• 即刻進(jìn)行動(dòng)物尾靜脈消毒
• 緩慢注射
• 16至24小時(shí)后，處死動(dòng)物
• 手術(shù)移取組織、分離細(xì)胞等后續(xù)操作

 

注意事項(xiàng)

 

• 本產(chǎn)品為10次操作
• 整個(gè)操作須無(wú)菌操作
• 注意動(dòng)物消毒
• 本產(chǎn)品可以轉(zhuǎn)染各種類(lèi)型的大鼠和小鼠
• 本產(chǎn)品提供的成分配比優(yōu)化
• siRNA用量可以使用25至100微克
• 建議轉(zhuǎn)染時(shí)間不要超過(guò)24小時(shí)
• 本公司提供系列細(xì)胞或動(dòng)物轉(zhuǎn)染試劑產(chǎn)品

 

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

 

• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定轉(zhuǎn)染效率高

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