試劑盒組成：

特別說明：

*: [96T/48T]（打開包裝后請及時檢查所有物品是否齊全完整）

#: 一周內(nèi)使用可存于4℃，需長時間存放或多次使用建議存于-20℃.

相關(guān)試劑在分裝時會比標(biāo)簽上標(biāo)明的體積稍多一些，請在使用時量取而非直接倒出！

 

檢測原理:

本試劑盒采用雙抗體夾心CLIA法。用抗人α1-AGP抗體包被于酶標(biāo)板上，實(shí)驗(yàn)時樣品或標(biāo)準(zhǔn)品中的人α1-AGP會與包被抗體結(jié)合，游離的成分被洗去。依次加入生物素化的抗人α1-AGP抗體和辣根過氧化物酶標(biāo)記的親和素。抗人α1-AGP抗體與結(jié)合在包被抗體上的人α1-AGP結(jié)合、生物素與親和素特異性結(jié)合而形成免疫復(fù)合物，游離的成分被洗去。加入發(fā)光底物混合液，發(fā)光底物在辣根過氧化物酶的催化下發(fā)出熒光，用化學(xué)發(fā)光免疫分析儀測定化學(xué)發(fā)光值（CL），人α1-AGP濃度與化學(xué)發(fā)光值之間呈正相關(guān)，通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線計算出樣品中人α1-AGP的濃度。

 

 

樣品收集:

1.       血清：全血樣品于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測，收集血液的試管應(yīng)為一次性的無熱原，無內(nèi)毒素試管。

2.       血漿：抗凝劑推薦使用EDTA-Na2，樣品采集后30分鐘內(nèi)于1000×g離心15分鐘，取上清即可檢測。避免使用溶血，高血脂樣品。

3.       組織勻漿：用預(yù)冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織，去除殘留血液（勻漿中裂解的紅細(xì)胞會影響測量結(jié)果），稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應(yīng)體積的PBS（一般按1:9的重量體積比，比如1g的組織樣品對應(yīng)9mL的PBS，具體體積可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要適當(dāng)調(diào)整，并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑）加入玻璃勻漿器中，于冰上充分研磨。為了進(jìn)一步裂解組織細(xì)胞，可以對勻漿液進(jìn)行超聲破碎，或反復(fù)凍融。最后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘，取上清檢測。

4.       細(xì)胞培養(yǎng)上清：取細(xì)胞培養(yǎng)上清于1000×g離心20分鐘，除去雜質(zhì)及細(xì)胞碎片。取上清檢測。

5.       其它生物樣品：1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測

具體處理方法可參考：http://www.elabscience.cn/index.php/resources/view/aid/17671.jsp

6.       樣品應(yīng)清澈透明，懸浮物應(yīng)離心去除。

7.       樣品收集后若在1周內(nèi)進(jìn)行檢測的可保存于4℃，若不能及時檢測，請按一次使用量分裝，凍存于-20℃(1個月內(nèi)檢測)，或-80℃（6個月內(nèi)檢測），避免反復(fù)凍融。

8.       如果您的樣品中檢測物濃度高于標(biāo)準(zhǔn)品最高值，請根據(jù)實(shí)際情況，做適當(dāng)倍數(shù)稀釋（建議先做預(yù)實(shí)驗(yàn)，以確定稀釋倍數(shù)）。

 

試驗(yàn)所需自備物品:

1.       化學(xué)發(fā)光免疫分析儀

2.       高精度移液器，EP管及一次性吸頭：0.5-10μL, 2-20μL, 20-200μL, 200-1000μL

3.       37℃恒溫箱，雙蒸水或去離子水

4.       吸水紙

 

檢測前準(zhǔn)備工作:

1.         請?zhí)崆?0分鐘從冰箱中取出試劑盒，平衡至室溫。

2.         將濃縮洗滌液用雙蒸水稀釋(1:25)。未用完的放回4℃。從冰箱中取出的濃縮洗滌液可能有結(jié)晶，屬于正�，F(xiàn)象，可用40℃水浴微加熱使結(jié)晶完全溶解后再配制洗滌液（加熱溫度不要超過50℃，使用時洗滌液應(yīng)為室溫）。當(dāng)日使用。

3.         標(biāo)準(zhǔn)品: 加入標(biāo)準(zhǔn)品&樣品稀釋液1.0mL至凍干標(biāo)準(zhǔn)品中，靜置10分鐘，待其充分溶解后，輕輕混勻（濃度為200ng/mL）。然后根據(jù)需要進(jìn)行倍比稀釋（注：不要直接在反應(yīng)孔中進(jìn)行倍比稀釋）。建議配制成以下濃度：200、100、50、25、12.5、6.25、3.125、0ng/mL，標(biāo)準(zhǔn)品&樣品稀釋液直接作為空白孔0ng/mL。如配制100ng/mL標(biāo)準(zhǔn)品：取0.5mL200ng/mL的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.5mL標(biāo)準(zhǔn)品&樣品稀釋液的EP管中，混勻即可，其余濃度依此類推。

4.         生物素化抗體工作液：實(shí)驗(yàn)前計算當(dāng)次實(shí)驗(yàn)所需用量（以100μL/孔計），實(shí)際配制時應(yīng)多配制100-200μL。使用前15分鐘，以生物素化抗體稀釋液稀釋濃縮生物素化抗體(1:100)成工作濃度。當(dāng)日使用。

5.        酶結(jié)合物工作液：實(shí)驗(yàn)前計算當(dāng)次實(shí)驗(yàn)所需用量（以100μL/孔計），實(shí)際配制時應(yīng)多配制100-200μL。使用前15分鐘，以酶結(jié)合物稀釋液稀釋濃縮HRP酶結(jié)合物(1:100)成工作濃度。當(dāng)日使用。

6.        發(fā)光底物工作液：實(shí)驗(yàn)前計算當(dāng)次實(shí)驗(yàn)所需用量（以100μL/孔計），實(shí)際配制時應(yīng)多配制100-200μL。使用前15分鐘，將發(fā)光底物A液和B液等體積混合。當(dāng)日使用。

 

洗滌方法:

1.         自動洗板機(jī)：每孔加入洗滌液350μL，注入與吸出間隔60秒。

2.         手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體，在潔凈的吸水紙上拍干，每孔加洗滌液350μL，浸泡1-2分鐘，吸去（不可觸及板壁）或甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體，在厚的吸水紙上拍干。

 

操作步驟:

實(shí)驗(yàn)開始前，各試劑均應(yīng)平衡至室溫；試劑或樣品配制時，均需充分混勻，并盡量避免起泡。

1.     加樣：分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔�？瞻卓准訕�(biāo)準(zhǔn)品&樣品稀釋液100μL，余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品100μL，注意不要有氣泡，加樣時將樣品加于酶標(biāo)板底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。給酶標(biāo)板覆膜，37℃孵育90分鐘。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性，每次實(shí)驗(yàn)請使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

2.     棄去液體，甩干，不用洗滌。每個孔中加入生物素化抗體工作液100μL（在使用前15分鐘內(nèi)配制），酶標(biāo)板加上覆膜，37℃溫育1小時。

3.     棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板 3次，每次浸泡1-2分鐘，大約350μL/每孔，甩干并在吸水紙上輕拍將孔內(nèi)液體拍干。

4.     每孔加酶結(jié)合物工作液（臨用前15分鐘內(nèi)配制）100μL，加上覆膜，37℃溫育30分鐘。

5.     棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5次，方法同步驟3。

6.     每孔加混合好的發(fā)光底物工作液100μL，酶標(biāo)板加上覆膜37℃避光孵育5分鐘。

7.     立即用化學(xué)發(fā)光免疫分析儀測定各孔的化學(xué)發(fā)光值。應(yīng)提前打開化學(xué)發(fā)光免疫分析儀電源，預(yù)熱儀器，設(shè)置好檢測程序。

8.     實(shí)驗(yàn)完畢后將未用完的試劑按規(guī)定的保存溫度放回冰箱保存。

 

注意事項：

1.       保存：試劑盒中各試劑請按說明書提示合理存放。在儲存及溫育過程中避免將試劑暴露在強(qiáng)光中。所有試劑瓶蓋須旋緊以防止蒸發(fā)和微生物的污染，否則可能會出現(xiàn)錯誤的結(jié)果。

2.       酶標(biāo)板：剛開啟的酶標(biāo)板孔中可能會有少許水樣物質(zhì)，此為正常現(xiàn)象，不會對實(shí)驗(yàn)結(jié)果造成任何影響。暫時不用的板條應(yīng)拆卸后放入備用鋁箔袋，按推薦溫度存放！

3.       加樣：加樣或加試劑時，第一個孔與最后一個孔的加樣時間間隔如果太大，將會導(dǎo)致不同的“預(yù)溫育”時間，從而明顯地影響到測量值的準(zhǔn)確性及重復(fù)性。每次的加樣時間最好控制在10分鐘內(nèi)。推薦設(shè)置復(fù)孔。

4.       溫育：為防止樣品蒸發(fā)，實(shí)驗(yàn)時必須給酶標(biāo)板覆膜；洗板后應(yīng)盡快進(jìn)行下步操作，避免酶標(biāo)板處于干燥狀態(tài)；嚴(yán)格遵守給定的溫育時間和溫度。

5.       洗滌：洗滌過程中反應(yīng)孔中殘留的洗滌液應(yīng)在吸水紙上拍干，勿將濾紙直接放入反應(yīng)孔中吸水。

6.       試劑配制：Concentrated BiotinylatedDetection Ab及Concentrated HRP Conjugate體積較小，運(yùn)輸過程會使液體沾到管壁或瓶蓋，因此使用前1000轉(zhuǎn)/分離心1min，以使附著管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。取用前，請用移液器小心吹打4-5次使溶液混勻。標(biāo)準(zhǔn)品、生物素化抗體工作液、酶結(jié)合物工作液請根據(jù)所需用量配制，并使用相應(yīng)的稀釋液配制，不能混淆。請精確配制標(biāo)準(zhǔn)品及工作液，盡量不要微量配制（如吸取Concentrated BiotinylatedDetection Ab時，一次不要小于10μL），以避免由于不準(zhǔn)確稀釋而造成濃度誤差；請勿重復(fù)使用已稀釋過的標(biāo)準(zhǔn)品、生物素化抗體工作液、酶結(jié)合物工作液。若需要分次使用標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)按照每一次用量分裝，將其放在-20～-80℃貯存。避免反復(fù)凍融。

7.       底物：底物請避光保存，在儲存和溫育時避免強(qiáng)光直接照射。

8.       混勻：充分輕微混勻?qū)Ψ磻?yīng)結(jié)果尤為重要，最好使用微量振蕩器(使用最低頻率)，如無微量振蕩器，可在反應(yīng)前手工輕輕敲擊酶標(biāo)板框混勻。

9.       安全：試驗(yàn)中請穿著實(shí)驗(yàn)服并帶乳膠手套做好防護(hù)工作。特別是檢測血液或者其他體液樣品時，請按國家生物試驗(yàn)室安全防護(hù)條例執(zhí)行。

10.   不同批號的試劑盒組份不能混用（洗滌液除外）

11.   試驗(yàn)中所用的EP管和吸頭均為一次性使用，嚴(yán)禁混用，否則將影響試驗(yàn)結(jié)果！

 

 

更多詳情，請訪問www.elabscience.cn

 

產(chǎn)品推薦

 

WB抗體：http://www.elabscience.cn/page/antibody/antibody-wb.html

 

IF抗體：http://www.elabscience.cn/page/antibody/antibody-if.html

 

IHC抗體：http://www.elabscience.cn/page/ihc/antibody-ihc.html

 

兔多克隆抗體定制：

 

http://www.elabscience.cn/page/antibody/rabbit-polyclonal-antibody-custom-service.html

公司簡介
名稱：武漢伊萊瑞特生物科技股份有限公司
網(wǎng)址：www.elabscience.cn
電話：400-999-2100
郵箱：marketing@elabscience.cn
地址：武漢市高新大道858號光谷生物醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)園二期B18棟

        武漢伊萊瑞特生物科技股份有限公司（Elabscience Biotechnology Co.,Ltd.）成立于2011年，是一家專注于為客戶提供細(xì)胞檢測試劑、工具及解決方案的高新技術(shù)企業(yè)，總部位于國家生物產(chǎn)業(yè)基地——武漢光谷生物城，建有美國分公司與休斯頓研發(fā)中心，主要產(chǎn)品為流式抗體、細(xì)胞功能檢測試劑盒、代謝測定試劑盒、ELISA試劑盒、蛋白抗體類試劑，均通過ISO9001國際認(rèn)證及歐盟CE認(rèn)證，已暢銷至全球150多個國家和地區(qū)。

        武漢伊萊瑞特是一家集研發(fā)、生產(chǎn)、銷售為一體的綜合性生物公司，擁有普諾賽（Pricella）、戴安（DIA•AN）、伊萊瑞特（Elabscience）、優(yōu)恩（Uni-science）四個子品牌，業(yè)務(wù)范圍涉及流式抗體、細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)相關(guān)試劑、細(xì)胞功能檢測、細(xì)胞代謝檢測、抗體蛋白原料、臨床用IVD產(chǎn)品等

        公司現(xiàn)有辦公面積12000㎡+，專業(yè)實(shí)驗(yàn)室15000㎡+，擁有萬級GMP凈化車間和質(zhì)量管理體系，形成完備的實(shí)驗(yàn)硬件設(shè)施和技術(shù)體系�，F(xiàn)有員工700余人，由碩博比例超30%的高學(xué)歷人才領(lǐng)隊，組成專業(yè)的研發(fā)和技術(shù)服務(wù)團(tuán)隊。

        Elabscience®集中上下游產(chǎn)業(yè)鏈優(yōu)勢，自主建立了蛋白表達(dá)、免疫學(xué)、細(xì)胞模型與功能檢測、細(xì)胞代謝檢測、抗體制備等五大特色技術(shù)平臺，通過卓越的研發(fā)實(shí)力與高標(biāo)準(zhǔn)的質(zhì)量管控體系，為全球科研用戶提供專業(yè)可靠的實(shí)驗(yàn)試劑與科研服務(wù)。
        未來，Elabscience®將以細(xì)胞檢測試劑為基石，以流式檢測為突破口，加速新品研發(fā)與市場拓展，持續(xù)提升客戶體驗(yàn)，助推生命科學(xué)及健康領(lǐng)域取得新突破。

超14300篇+SCI文獻(xiàn)選擇

自2012年第一篇引用文獻(xiàn)問世，至2023年12月末，Elabscience®已協(xié)助各地科研工作者發(fā)表超14,300篇SCI文獻(xiàn)，包括行業(yè)頂級期刊Nature Medicine, Nature, Cell, Signal Transduction and Targeted Therapy, Circulation, Molecular Cancer, Immunity, Advanced Materials等，總影響因子（IF）68686，其中IF≥30的文獻(xiàn)超40篇，最高影響因子為66.849，發(fā)文單位包含北京大學(xué)、中國科學(xué)技術(shù)大學(xué)、浙江大學(xué)、斯坦福大學(xué)、耶魯大學(xué)、柏林夏里特大學(xué)等國內(nèi)外各大高校。
每年引用文獻(xiàn)數(shù)量持續(xù)增長，保持逐年30%+高增長率，可以預(yù)見，Elabscience®產(chǎn)品將幫助更多科研工作者發(fā)表高質(zhì)量SCI論文。

公司發(fā)展歷程：

• 2011   公司成立，ELISA試劑盒進(jìn)入國內(nèi)市場
• 2012    搭建五大技術(shù)平臺，國際市場擴(kuò)張
• 2015    榮獲國家"高新技術(shù)企業(yè)"認(rèn)證，抗體和蛋白進(jìn)入市場
• 2016    美國分公司成立，代謝檢測試劑盒進(jìn)入市場
• 2017    入駐光谷生物城，流式研發(fā)平臺搭建
• 2018    流式抗體正式推入市場，細(xì)胞和相關(guān)試劑盒進(jìn)入市場
• 2019    被CiteAb評為 "值得推薦的ELISA試劑盒供貨商"
• 2021    被CiteAb評為 "值得推薦的抗體供貨商"
• 2022    入選國家級 "專精特新小巨人"