產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

Ø 碧云天生產(chǎn)的一步法感受態(tài)細(xì)菌制備試劑盒(One Step Competent Cell Preparation Kit)是一種用于大腸桿菌感受態(tài)細(xì)菌

快速制備的試劑盒。一步法感受態(tài)細(xì)菌制備試劑盒是在經(jīng)典TSS法的基礎(chǔ)上進(jìn)行適當(dāng)改良而成，既繼承了TSS法的快速和簡(jiǎn)便，又
在此基礎(chǔ)上提高了感受態(tài)細(xì)菌的轉(zhuǎn)化效率和易操作性。使用本試劑盒可以使感受態(tài)效率達(dá)到106以上。不僅可以轉(zhuǎn)化質(zhì)粒，而且
可以轉(zhuǎn)化普通的連接產(chǎn)物。另外，對(duì)細(xì)菌的培養(yǎng)條件要求比較寬松，培養(yǎng)的細(xì)菌只要處于對(duì)數(shù)期內(nèi)就可以使用本試劑盒制備感受
態(tài)細(xì)菌。

Ø 使用本試劑盒操作非常簡(jiǎn)單，細(xì)菌培養(yǎng)好后僅需十幾分鐘就可以完成感受態(tài)細(xì)菌的制備。
Ø 本試劑盒適用于絕大部分常見的大腸桿菌，包括DH5α、JM109、TG1、HB101和XL-1等。對(duì)于一些用于蛋白表達(dá)或病毒質(zhì)粒構(gòu)建
的特殊大腸桿菌也適用，制備出來(lái)的感受態(tài)菌轉(zhuǎn)化質(zhì)�？隙�沒有問(wèn)題，但如果轉(zhuǎn)化連接產(chǎn)物有時(shí)效果不如DH5α等其它常見的細(xì)
菌。
Ø 本試劑盒提供了DH5α甘油菌作為菌種，可以用于制備感受態(tài)細(xì)菌。
Ø 本試劑盒可以分多次使用，共可以制備足夠進(jìn)行200-400次轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)菌。




包裝清單：

感受態(tài)制備試劑 10 毫升
DH5α甘油菌 200 微升
說(shuō)明書 1 份




保存條件：

-20℃保存，一年有效。



注意事項(xiàng)：

Ø 需自行配制LB液體培養(yǎng)基和LB平板以用于細(xì)菌的培養(yǎng)和感受態(tài)效率的檢測(cè)。


Ø 盡管經(jīng)過(guò)我們的測(cè)試凡是處于對(duì)數(shù)期內(nèi)的細(xì)菌都可以用于感受態(tài)細(xì)菌的制備，但如果細(xì)菌生長(zhǎng)的OD600的值達(dá)到0.3-0.5左右時(shí)，


制備出來(lái)的感受態(tài)效果最佳。
Ø 在制備感受態(tài)細(xì)菌的過(guò)程中均使用不含抗生素的LB。在使用感受態(tài)菌的過(guò)程中熱休克后的37℃培養(yǎng)時(shí)也必須使用無(wú)抗生素的LB，
即便轉(zhuǎn)入的質(zhì)粒是有抗性的。
Ø 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。


使用說(shuō)明：

1. 涂平板：
為取得最佳的感受態(tài)效率，必須先把甘油菌或其它形式保存的菌種涂LB平板，并培養(yǎng)過(guò)夜。
2.
接種：


取一有新鮮培養(yǎng)的菌種的LB平板，后續(xù)操作均在超凈臺(tái)內(nèi)進(jìn)行。把鑷子的頂端在70%酒精中蘸一下，并在酒精燈上略略燒一下，

使鑷子的頂端處于無(wú)菌狀態(tài)。用鑷子夾取一個(gè)無(wú)菌的塑料槍頭或牙簽，從平板上挑取一個(gè)單克隆，然后把蘸有菌種的塑料槍頭或
牙簽放到裝有3毫升LB的細(xì)菌培養(yǎng)試管內(nèi)。上述操作也可以使用接種環(huán)等進(jìn)行操作。
3. 培養(yǎng)：

37℃約200rpm培養(yǎng)過(guò)夜，通常培養(yǎng)時(shí)間控制在16小時(shí)左右為宜。絕對(duì)不宜超過(guò)18小時(shí)。
4. 再接種培養(yǎng)：

根據(jù)需要制備的感受態(tài)細(xì)菌的量，按照1:100的比例用新鮮培養(yǎng)的過(guò)夜菌接種培養(yǎng)。例如取500微升的新鮮過(guò)夜菌到50毫升的LB中
繼續(xù)37℃約200rpm培養(yǎng)。通常在大約培養(yǎng)2-2.5小時(shí)后OD600可以達(dá)到0.3-0.5。
5. 制備感受態(tài)細(xì)菌：

在培養(yǎng)的細(xì)菌OD600達(dá)到0.3-0.5時(shí)，4℃2000g離心5分鐘收集細(xì)菌。如果離心沉淀前的菌量為50毫升，按后續(xù)操作進(jìn)行，如果是

其它體積則按比例換算后進(jìn)行后續(xù)操作。用5毫升預(yù)冷的LB重新懸浮起細(xì)菌沉淀，加入5毫升在冰浴或冰水浴上融解的感受態(tài)制備
試劑，混勻，冰浴放置5分鐘。然后再輕輕混勻，根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要適當(dāng)分裝到1.5毫升或0.5毫升的離心管內(nèi)后-70℃保存。
注:如果以后會(huì)只做單管的轉(zhuǎn)化，可以分裝成每管最少50微升或100微升，如果以后一次性做多個(gè)轉(zhuǎn)化，可以每管分裝500微升或
更大體積。-70℃保存后，感受態(tài)的效率會(huì)隨時(shí)間的推移逐漸下降，但通常在半年內(nèi)使用轉(zhuǎn)化效率下降不會(huì)太多�？偟膩�(lái)說(shuō)，新
鮮制備的感受態(tài)要比凍存的感受態(tài)轉(zhuǎn)化效率更高一些。
6. 感受態(tài)細(xì)菌的使用：

(1) 對(duì)于感受態(tài)細(xì)菌效率的測(cè)定或連接產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化(其它如基因突變產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化等參考連接產(chǎn)物進(jìn)行) ：
a) 在冰上緩慢融解感受態(tài)細(xì)菌(對(duì)于新鮮制備的感受態(tài)就可以直接使用了)，如果檢測(cè)感受態(tài)細(xì)菌的效率，加入100pg-10ng質(zhì)
粒，但質(zhì)粒的體積不宜超過(guò)感受態(tài)細(xì)菌量的10%。如果轉(zhuǎn)化連接產(chǎn)物，每100微升感受態(tài)細(xì)菌加入10微升連接產(chǎn)物。
b) 輕輕用手指彈動(dòng)離心管，以混勻細(xì)菌和質(zhì)粒或連接產(chǎn)物。冰浴或冰水浴放置30分鐘。
c) 42℃水浴，熱休克2分鐘。
d) 熱休克后立即置于冰水浴中，2分鐘。
e) 加入900微升LB，37℃200rpm培養(yǎng)1小時(shí)。
f) 如果檢測(cè)感受態(tài)效率，取100微升涂布到含有相應(yīng)抗生素的LB平板上。如果轉(zhuǎn)化的是連接產(chǎn)物，2000-3000g離心1分鐘或更長(zhǎng)
時(shí)間使細(xì)菌充分沉淀下來(lái)。去除約900-950微升LB培養(yǎng)液。細(xì)菌沉淀用余下的LB培養(yǎng)液重懸，然后全部涂布到含有適當(dāng)抗生
素的LB平板上。37℃培養(yǎng)過(guò)夜。
(2) 對(duì)于質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化：
a) 融解感受態(tài)細(xì)菌，加入不少于50ng質(zhì)粒到50或100微升感受態(tài)細(xì)菌中。質(zhì)粒的量可以是1微克或更多，但體積不宜超過(guò)感受態(tài)
細(xì)菌量的10%。
b) 輕輕用手指彈動(dòng)離心管，以混勻細(xì)菌和質(zhì)粒。冰浴或冰水浴放置10分鐘。
c) 取全部菌液直接涂布到含有適當(dāng)抗生素的LB平板上，37℃培養(yǎng)過(guò)夜。
 

碧云天由在哈佛大學(xué)工作和學(xué)習(xí)的留學(xué)人員創(chuàng)辦于2001年。20余年來(lái)專注于自主研發(fā)和生產(chǎn)。2007年成立上海碧云天生物技術(shù)有限公司，為國(guó)家級(jí)專精特新“小巨人”企業(yè)，并進(jìn)一步入選第二批第一年建議支持的國(guó)家級(jí)專精特新“小巨人”企業(yè)，也是上海市科技小巨人企業(yè)、G60科創(chuàng)走廊一類重點(diǎn)扶持企業(yè)、上海市高新技術(shù)企業(yè)和上海市專精特新中小企業(yè)。江蘇碧云天為江蘇省高新技術(shù)企業(yè)，南通市雙創(chuàng)優(yōu)企。公司主要研發(fā)生產(chǎn)生物、醫(yī)學(xué)研究用試劑、試劑盒、消耗品和儀器設(shè)備，同時(shí)提供生命科學(xué)研究的技術(shù)服務(wù)和一站式實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備采購(gòu)平臺(tái)。公司核心團(tuán)隊(duì)由來(lái)自美國(guó)哈佛大學(xué)、NIH、香港大學(xué)、中國(guó)科學(xué)院等國(guó)內(nèi)外著名大學(xué)和科研機(jī)構(gòu)的高水平科研人員及諾華、默克等頂尖醫(yī)藥企業(yè)的管理人員組成。2016年1人獲國(guó)務(wù)院政府特殊津貼，2人入選“松江區(qū)優(yōu)秀人才”；2019年1人入選國(guó)家百千萬(wàn)人才工程，1人入選上海市領(lǐng)軍人才，6人獲G60科創(chuàng)走廊優(yōu)秀人才獎(jiǎng)勵(lì)，3人入選長(zhǎng)三角G60科創(chuàng)走廊科技精英，3人入選上海市松江區(qū)拔尖人才培養(yǎng)計(jì)劃。2019年碧云天榮獲江蘇省雙創(chuàng)人才創(chuàng)業(yè)類第一名，2020年碧云天團(tuán)隊(duì)榮獲江蘇省雙創(chuàng)團(tuán)隊(duì)創(chuàng)業(yè)類最高資助。2020年1人榮獲上海市五四青年獎(jiǎng)?wù)�，多人獲G60科創(chuàng)走廊優(yōu)秀人才獎(jiǎng)勵(lì)。2021年2人次入選國(guó)家級(jí)領(lǐng)軍人才，2022年1人次入選國(guó)家級(jí)創(chuàng)新人才。截止2022年12月，已有累計(jì)超過(guò)150000篇注明使用碧云天產(chǎn)品的研究論文發(fā)表在包括Cell、Nature、Science等國(guó)際高水平學(xué)術(shù)期刊。Beyotime品牌年度文獻(xiàn)引用率國(guó)內(nèi)領(lǐng)先，并躋身全球20強(qiáng)。碧云天將繼續(xù)致力于科研用技術(shù)和產(chǎn)品的研發(fā)，用我們最頂尖的技術(shù)、最成熟的產(chǎn)品、最熱情的服務(wù)，服務(wù)生命科學(xué)，造福人民健康！