RT4_人膀胱癌細(xì)胞
產(chǎn)品信息
細(xì)胞名稱(chēng)：  RT4_人膀胱癌細(xì)胞
種屬來(lái)源:   人
性別年齡： 63歲，男性
種屬來(lái)源:   膀胱
生長(zhǎng)特性： 貼壁生長(zhǎng)
細(xì)胞形態(tài):  上皮細(xì)胞樣
細(xì)胞規(guī)格:  1 X 10⁶cells/T25或1 mL凍存管
培養(yǎng)條件:  McCoy's 5a Medium Modified +10% fetal bovine serum
37 ℃, 5% CO2
凍存條件:  90% FBS + 10% DMSO
傳代方法：1:3傳代, 2-3天傳1代
細(xì)胞培養(yǎng)操作
干冰運(yùn)輸：收到細(xì)胞后需立即轉(zhuǎn)入液氮保存、或者-80°C冰箱短期凍存、或者直接復(fù)蘇
常溫運(yùn)輸：收到細(xì)胞后，請(qǐng)立即將細(xì)胞培養(yǎng)瓶從包裝盒中取出，并按照下方操作步驟進(jìn)行培養(yǎng)傳代
細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)80% - 90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)
 
培養(yǎng)瓶中細(xì)胞操作步驟
 對(duì)于貼壁培養(yǎng)的細(xì)胞，寄送前，我們會(huì)將培養(yǎng)基充滿(mǎn)整個(gè)培養(yǎng)瓶，以減少產(chǎn)品運(yùn)輸過(guò)程中貼壁細(xì)胞的脫落。

1. 收到細(xì)胞后，請(qǐng)注意觀察是否有污染。將培養(yǎng)瓶置于倒置顯微鏡下仔細(xì)檢查是否渾濁、是否細(xì)菌污染。因?yàn)檫\(yùn)輸過(guò)程中存在顛簸，且有些細(xì)胞對(duì)溫度變化也很敏感，可能存在一些細(xì)胞脫落漂浮的情況，這些細(xì)胞仍是活細(xì)胞，請(qǐng)勿丟棄，可離心富集后傳代使用。
2. 對(duì)于貼壁細(xì)胞，在生物安全柜環(huán)境中，用真空泵去除培養(yǎng)瓶中多余的培養(yǎng)基，至剩余5-8mL 左右，隨后根據(jù)培養(yǎng)基選擇合適的CO2含量的37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，擰松瓶蓋。如果細(xì)胞已經(jīng)長(zhǎng)滿(mǎn)培養(yǎng)瓶，請(qǐng)立即傳代。
3. 對(duì)于懸浮的細(xì)胞，在生物安全柜環(huán)境中，轉(zhuǎn)移培養(yǎng)瓶中的細(xì)胞至離心管，150 g 離心 5 分鐘，去除上清后，用5 mL培養(yǎng)基吹散細(xì)胞，轉(zhuǎn)移至新的培養(yǎng)瓶中，隨后置于合適的CO2含量的37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

 
凍存管細(xì)胞操作步驟
注意： 為保證細(xì)胞的高活率，請(qǐng)收到產(chǎn)品后，立即解凍培養(yǎng)。

1. 將凍存管置于37℃水浴中來(lái)回晃動(dòng)，迅速解凍。為避免污染，確保凍存管口置于水面之上。解凍需迅速，大約1分鐘。
2. 一旦凍存管中液體融化后，立即取出，采用酒精噴拭凍存管表面。從此步開(kāi)始，后續(xù)操作須在生物安全柜中完成。
3. 將凍存管中的液體轉(zhuǎn)移到含有5mL完全培養(yǎng)基的離心管中，150 g 離心 5 分鐘，用真空泵去除上清。
4. 用完全培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞并轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)瓶中。為保證細(xì)胞復(fù)蘇的存活率，請(qǐng)將培養(yǎng)基在37℃水浴預(yù)熱后使用。
5. 將細(xì)胞置于含有合適CO2的37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

 
貼壁細(xì)胞傳代培養(yǎng)

1. 吸取并棄掉培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)基，加入PBS潤(rùn)洗一次。
2. 加入1 mL 0.25 (w/v) Trypsin-EDTA 溶液，并置于37℃培養(yǎng)箱中孵育，直至細(xì)胞從壁上脫落分離。此過(guò)程大約需要3-5分鐘。
3. 加入2mL完全培養(yǎng)基中和胰蛋白酶，并輕輕吹打?qū)⒓?xì)胞從培養(yǎng)瓶表面吹落，并使細(xì)胞分散。
4. 將細(xì)胞懸液收集到15mL離心管里，150 g 離心 5 分鐘，用真空泵去除上清。取適量的培養(yǎng)基將細(xì)胞重懸，轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。

懸浮細(xì)胞傳代可參考以下方法：
 一、直接傳代法
    1、待懸浮細(xì)胞長(zhǎng)滿(mǎn)至 80%～90%（細(xì)胞懸液變黃），即可傳代；
    2、用吸管吸棄細(xì)胞懸液 1 / 2~1 / 3；
    3、加入適量的新鮮培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)。
 二、離心傳代法（在發(fā)現(xiàn)有細(xì)胞碎片的情況下）
    1、將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi)；
    2、150 g 離心 5 min，棄去上層清液；
    3、使用新鮮的培養(yǎng)基重懸細(xì)胞；
    4、吸管吸取適量細(xì)胞懸液，裝入新的培養(yǎng)瓶，再加入適量的新鮮培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)。
 
細(xì)胞凍存操作
1. 1000rpm離心5分鐘去掉上清。加1 mL血清重懸細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入血清和DMSO，輕輕混勻，    DMSO終濃度為10%，細(xì)胞密度不低于1 x 10⁶/mL，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。
2. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80°C冰箱，至少2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。
 

上海格寧生物科技有限公司成立于2020年10月，經(jīng)營(yíng)范圍為生物科技領(lǐng)域內(nèi)的技術(shù)開(kāi)發(fā)、技術(shù)咨詢(xún)、技術(shù)轉(zhuǎn)讓和技術(shù)服務(wù)。主要從事新藥研發(fā)領(lǐng)域的重組細(xì)胞系構(gòu)建和細(xì)胞生化水平的藥物樣品活性測(cè)試。上海格寧生物科技有限公司開(kāi)發(fā)了1000種以上各類(lèi)重組細(xì)胞系，靶點(diǎn)涉及G蛋白偶聯(lián)受體、離子通道、核受體、信號(hào)通路等。利用這些穩(wěn)定表達(dá)功能型細(xì)胞系，公司將構(gòu)建廣泛的藥物篩選平臺(tái)，一方面對(duì)外出售功能驗(yàn)證的細(xì)胞產(chǎn)品，一方面為國(guó)內(nèi)外醫(yī)藥企業(yè)提供研發(fā)外包服務(wù)，以人類(lèi)健康為使命，助力合作伙伴的科研進(jìn)程。