Panc 02.03_人胰腺癌細胞
產(chǎn)品信息
細胞名稱：  Panc 02.03_人胰腺癌細胞
種屬來源:   人
性別年齡： 70歲，白人女性
種屬來源:   胰腺
生長特性： 貼壁生長
細胞形態(tài):  上皮細胞樣
細胞規(guī)格:  1 X 10⁶cells/T25或1 mL凍存管
培養(yǎng)條件:  RPMI1640 +15% fetal bovine serum+ 10 Units/mL human recombinant insulin
37 ℃, 5% CO2
凍存條件:  90% FBS + 10% DMSO
傳代方法：1:3傳代, 2-3天傳1代
細胞培養(yǎng)操作
干冰運輸：收到細胞后需立即轉(zhuǎn)入液氮保存、或者-80°C冰箱短期凍存、或者直接復(fù)蘇
常溫運輸：收到細胞后，請立即將細胞培養(yǎng)瓶從包裝盒中取出，并按照下方操作步驟進行培養(yǎng)傳代
細胞傳代：細胞密度達80% - 90%，即可進行傳代培養(yǎng)
 
培養(yǎng)瓶中細胞操作步驟
 對于貼壁培養(yǎng)的細胞，寄送前，我們會將培養(yǎng)基充滿整個培養(yǎng)瓶，以減少產(chǎn)品運輸過程中貼壁細胞的脫落。

1. 收到細胞后，請注意觀察是否有污染。將培養(yǎng)瓶置于倒置顯微鏡下仔細檢查是否渾濁、是否細菌污染。因為運輸過程中存在顛簸，且有些細胞對溫度變化也很敏感，可能存在一些細胞脫落漂浮的情況，這些細胞仍是活細胞，請勿丟棄，可離心富集后傳代使用。
2. 對于貼壁細胞，在生物安全柜環(huán)境中，用真空泵去除培養(yǎng)瓶中多余的培養(yǎng)基，至剩余5-8mL 左右，隨后根據(jù)培養(yǎng)基選擇合適的CO2含量的37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，擰松瓶蓋。如果細胞已經(jīng)長滿培養(yǎng)瓶，請立即傳代。
3. 對于懸浮的細胞，在生物安全柜環(huán)境中，轉(zhuǎn)移培養(yǎng)瓶中的細胞至離心管，150 g 離心 5 分鐘，去除上清后，用5 mL培養(yǎng)基吹散細胞，轉(zhuǎn)移至新的培養(yǎng)瓶中，隨后置于合適的CO2含量的37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

 
凍存管細胞操作步驟
注意： 為保證細胞的高活率，請收到產(chǎn)品后，立即解凍培養(yǎng)。

1. 將凍存管置于37℃水浴中來回晃動，迅速解凍。為避免污染，確保凍存管口置于水面之上。解凍需迅速，大約1分鐘。
2. 一旦凍存管中液體融化后，立即取出，采用酒精噴拭凍存管表面。從此步開始，后續(xù)操作須在生物安全柜中完成。
3. 將凍存管中的液體轉(zhuǎn)移到含有5mL完全培養(yǎng)基的離心管中，150 g 離心 5 分鐘，用真空泵去除上清。
4. 用完全培養(yǎng)基重新懸浮細胞并轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)瓶中。為保證細胞復(fù)蘇的存活率，請將培養(yǎng)基在37℃水浴預(yù)熱后使用。
5. 將細胞置于含有合適CO2的37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

 
貼壁細胞傳代培養(yǎng)

1. 吸取并棄掉培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)基，加入PBS潤洗一次。
2. 加入1 mL 0.25 (w/v) Trypsin-EDTA 溶液，并置于37℃培養(yǎng)箱中孵育，直至細胞從壁上脫落分離。此過程大約需要3-5分鐘。
3. 加入2mL完全培養(yǎng)基中和胰蛋白酶，并輕輕吹打?qū)⒓毎麖呐囵B(yǎng)瓶表面吹落，并使細胞分散。
4. 將細胞懸液收集到15mL離心管里，150 g 離心 5 分鐘，用真空泵去除上清。取適量的培養(yǎng)基將細胞重懸，轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。

懸浮細胞傳代可參考以下方法：
 一、直接傳代法
    1、待懸浮細胞長滿至 80%～90%（細胞懸液變黃），即可傳代；
    2、用吸管吸棄細胞懸液 1 / 2~1 / 3；
    3、加入適量的新鮮培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)。
 二、離心傳代法（在發(fā)現(xiàn)有細胞碎片的情況下）
    1、將細胞懸液轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi)；
    2、150 g 離心 5 min，棄去上層清液；
    3、使用新鮮的培養(yǎng)基重懸細胞；
    4、吸管吸取適量細胞懸液，裝入新的培養(yǎng)瓶，再加入適量的新鮮培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)。
 
細胞凍存操作
1. 1000rpm離心5分鐘去掉上清。加1 mL血清重懸細胞，根據(jù)細胞數(shù)量加入血清和DMSO，輕輕混勻，    DMSO終濃度為10%，細胞密度不低于1 x 10⁶/mL，每支凍存管凍存1mL細胞懸液，注意凍存管做好標識。
2. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80°C冰箱，至少2個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。
 

上海格寧生物科技有限公司成立于2020年10月，經(jīng)營范圍為生物科技領(lǐng)域內(nèi)的技術(shù)開發(fā)、技術(shù)咨詢、技術(shù)轉(zhuǎn)讓和技術(shù)服務(wù)。主要從事新藥研發(fā)領(lǐng)域的重組細胞系構(gòu)建和細胞生化水平的藥物樣品活性測試。上海格寧生物科技有限公司開發(fā)了1000種以上各類重組細胞系，靶點涉及G蛋白偶聯(lián)受體、離子通道、核受體、信號通路等。利用這些穩(wěn)定表達功能型細胞系，公司將構(gòu)建廣泛的藥物篩選平臺，一方面對外出售功能驗證的細胞產(chǎn)品，一方面為國內(nèi)外醫(yī)藥企業(yè)提供研發(fā)外包服務(wù)，以人類健康為使命，助力合作伙伴的科研進程。