本試劑盒僅供研究使用。
                                                                      96T
 
使用目的：
本試劑盒用于測定人血清,血漿樣本中乙肝e抗體(HbeAb)表達(dá)。
實(shí)驗(yàn)原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗原夾心法測定標(biāo)本中人乙肝e抗體(HbeAb)表達(dá)。用純化的抗原包被微孔板，制成固相抗原，可與樣品中乙肝e抗體(HbeAb)相結(jié)合，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗體和其他成分后再與HRP標(biāo)記的抗原結(jié)合，形成抗原-抗體-酶標(biāo)抗原復(fù)合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），與CUTOFF值相比較，從而判定標(biāo)本中人乙肝e抗體(HbeAb)的存在與否。
試劑盒組成

1	30倍濃縮洗滌液	20ml×1瓶	7	陽性對(duì)照	0.5ml×1瓶
2	酶標(biāo)試劑	6ml×1瓶	8	陰性對(duì)照	0.5ml×1瓶
3	酶標(biāo)包被板	12孔×8條	9	說明書	1份
4	顯色劑A液	6ml×1瓶	10	封板膜	2張
5	顯色劑B液	6ml×1/瓶	11	密封袋	1個(gè)
6	終止液	6ml×1瓶

樣本處理及要求：
1. 血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。
2. 血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)該再次離心。
3. 不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
 
操作步驟：

• 編號(hào)：將樣品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào)，每板應(yīng)設(shè)陰性對(duì)照2孔、陽性對(duì)照2孔、空白對(duì)照1孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）
• 加樣：分別在陰、陽性對(duì)照孔中加入陰性對(duì)照、陽性對(duì)照50μl。待測樣品孔中加待測樣本50μl。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，
• 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。
• 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
• 配液：將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液加蒸餾水至600ml后備用
• 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。
• 顯色：每孔先加入顯色劑A 50μl，再加入顯色劑B 50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘
• 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。
• 測定：以空白孔調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

計(jì)算和結(jié)果判定：
  試驗(yàn)有效性：陽性對(duì)照孔平均值≥1.00; 陰性對(duì)照平均值≤0.20
  臨界值（CUT OFF）計(jì)算：臨界值=陰性對(duì)照孔平均值+0.15
  陰性判定：樣品OD值< 臨界值（CUT OFF）者為乙肝e抗體(HbeAb)陰性
  陽性判定：樣品OD值≥ 臨界值（CUT OFF）者為乙肝e抗體(HbeAb)陽性。
注意事項(xiàng)
1．操作嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行，本試劑不同批號(hào)組分不得混用。
2．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
3．濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。

• 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

5．底物請(qǐng)避光保存。
6．試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)，使用雙波長檢測時(shí)，參考波長為630nm
7．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。終止液為2M的硫酸，使用時(shí)必須注意安全。
保存條件及有效期
1．試劑盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6個(gè)月
 

       上海雅吉生物科技有限公司成立于2011年3月，是一家面向生命科學(xué)領(lǐng)域，科研機(jī)構(gòu)、高校、院所及企業(yè)產(chǎn)品開發(fā)研究提供所需要的科研類試劑、耗材、儀器、技術(shù)服務(wù)等。包括分子生物學(xué)、免疫學(xué)、微生物學(xué)、細(xì)胞學(xué)，通過公司各個(gè)部門所有員工的共同努力在行業(yè)內(nèi)擁有較高知名度，深得新老客戶的厚愛，本著“優(yōu)質(zhì)、服務(wù)、信譽(yù)”的精神，堅(jiān)持以先進(jìn)的技術(shù)、優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品、良好的信譽(yù)，為國內(nèi)外廣大用戶提供優(yōu)質(zhì)生物產(chǎn)品和服務(wù)。公司在重視產(chǎn)品質(zhì)量的同時(shí)，也建立了一套集技術(shù)支持、物流、售后服務(wù)等多個(gè)部門聯(lián)動(dòng)服務(wù)體系，努力把我們方便、快捷、周到的服務(wù)提供給每一個(gè)客戶本研究所鄭重承諾：質(zhì)量保證、供貨及時(shí)、服務(wù)周到，公司總投資超過2000萬元，并先后引進(jìn)了自動(dòng)化設(shè)備，組建了專業(yè)的研發(fā)技術(shù)團(tuán)隊(duì)。憑借著潔凈化的生產(chǎn)車間、標(biāo)準(zhǔn)化的質(zhì)量管理系統(tǒng)，為生產(chǎn)高質(zhì)量的產(chǎn)品提供了有效保證。
     雅吉生物自主研發(fā)的ELISA試劑盒，在國內(nèi)眾多重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室廣泛使用，深受廣大科研人員的好評(píng)，先后在權(quán)威雜志文章中被引用。 
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