RAW-264.7 來源于雄性Abelson
鼠科白血病病毒誘導(dǎo)的腫瘤
是常用的炎癥細(xì)胞模型之一
常用于研究細(xì)胞吞噬
細(xì)胞免疫,分子免疫學(xué)
屬單核細(xì)胞/巨噬細(xì)胞系
具有松散貼壁的短縮型細(xì)胞和圓形活細(xì)胞
細(xì)胞常用DMEM培養(yǎng)基
含10%優(yōu)質(zhì)胎牛血清
一般2-3天傳代1次
推薦傳代比例1:3到1:4
RAW 264.7在培養(yǎng)中容易出現(xiàn)細(xì)胞形態(tài)改變
長出偽足
消化困難
生長緩慢等問題
需要注意以下4點(diǎn)
因其具有較強(qiáng)的吞噬能力
吞噬后釋放的趨化因子
可促使細(xì)胞分化出偽足
若細(xì)胞吞噬抗原過多
培養(yǎng)環(huán)境惡劣
會(huì)促使細(xì)胞形態(tài)改變
呈多角形且面積增大
有較長的黑色觸角
導(dǎo)致細(xì)胞消化困難
因此要盡量避免細(xì)胞發(fā)生形態(tài)改變
避免其向終末細(xì)胞分化
2在低密度下成片分布但不連接
密度過低時(shí)細(xì)胞生長緩慢
高密度下細(xì)胞連成大片
如果疊加成層,會(huì)導(dǎo)致部分細(xì)胞漂浮
無法貼壁
因此培養(yǎng)時(shí)要控制細(xì)胞密度
不可等到疊加成層才傳代
可采用直徑6厘米的培養(yǎng)皿復(fù)蘇細(xì)胞
培養(yǎng)時(shí)數(shù)量控制在1.0*10
的6次方到1.5*10的6次方
3貼壁時(shí)間短
細(xì)胞呈圓形
折光度好
生長一段時(shí)間后
部分細(xì)胞可能會(huì)發(fā)生分化
此時(shí)必須傳代
避免細(xì)胞形態(tài)進(jìn)一步發(fā)生改變
該細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)無法保證完全不分化
通過傳代可以更好的控制細(xì)胞分化率
4不能用胰酶消化
推薦吹打傳代。分化的細(xì)胞貼壁牢固
傳代的時(shí)候
千萬不要強(qiáng)制性吹下這些細(xì)胞
只接種容易吹下的那些未分化細(xì)胞
吹打的力度一定要輕
切勿暴力吹打
推薦使用巴士管吹打
亦可在液體環(huán)境下
用細(xì)胞刮刀將細(xì)胞刮下來
RAW 264.7細(xì)胞總結(jié)
1RAW 264.7呈不規(guī)則形(圓形、短梭形),推薦DMEM培養(yǎng)基
2細(xì)胞容易分化,需保持適中傳代密度,控制分化率
3細(xì)胞易連片生長,應(yīng)密切關(guān)注細(xì)胞匯合度,控制生長速度
4不能用胰酶消化,推薦吹打傳代
5復(fù)蘇細(xì)胞推薦6cm的培養(yǎng)皿,密度控制在1.0*10
的6次方到1.5*10的6次方
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