综合图区亚洲网友自拍|亚洲黄色网络|成人无码网WWW在线观看,日本高清视频色视频kk266,激情综合五月天,欧美一区日韩一区中文字幕页

English | 中文版 | 手機版 企業(yè)登錄 | 個人登錄 | 郵件訂閱
當前位置 > 產品目錄 > 試劑 > 細胞生物學試劑 > HEPES緩沖鹽溶液(2×HeBS,pH6.7)
HEPES緩沖鹽溶液(2×HeBS,pH6.7)
英文名稱:HEPES(2×HeBS,pH6.7)總訪問:219
國產/進口:國產半年訪問:24
產地/品牌:Abiowell產品類別:細胞生物學試劑
規(guī)       格:100ml 最后更新:2022-10-25
貨       號:AWC0164a
CAS   號:
參考報價:¥130
立即詢價 電話咨詢
[發(fā)表評論] [本類其他產品] [本類其他供應商] [收藏]
銷售商: 長沙艾碧維生物科技有限公司 查看該公司所有產品 >>
  • 產品介紹
  • 公司簡介

HEPES緩沖鹽溶液(2×HeBS,pH6.7)

產品簡介:

外源基因導入真核細胞的方法有很多種,如磷酸鈣轉染法、DEAE-葡聚糖轉染法、脂質體法、電穿孔法、顯微注射法等。2×HEPES緩沖鹽溶液主要用于磷酸鈣轉染,其主要成分HEPES,HEPES是一種非離子兩性緩沖劑,能有效控制pH在6.8~8.2范圍,尤其在pH7.2~7.4具有較好的緩沖能力,終濃度一般為10~50mmol/L,培養(yǎng)液內含20mmol/L HEPES即可達到較好的緩沖能力。

HEPES緩沖鹽溶液(2×HeBS)是一種常用的細胞轉染溶液,主要由HEPES、氯化鈉、磷酸鹽等組成,其最適合pH值為6.7,經過濾除菌處理。影響磷酸鈣轉染效率的因素主要有沉淀中DNA含量、DNA在細胞上停留的時間、休克時間。2×HeBS要求DNA濃度在10~50μg為宜,Hela、BALB等細胞沉淀放置16h,CHO、DUKX、BⅡ等細胞可以通赤甘油、DMSO進行熱休克處理以提高轉染效率。

自備材料:

1、 胰蛋白酶消化液

2、 PBS

3、 無菌水

4、 CaCl2溶液

5、 甘油或DMSO

6、 篩選藥物

操作步驟(僅供參考):

1、 在轉染前24h用蛋白酶消化培養(yǎng)細胞,取適量數期細胞轉移至新的培養(yǎng)器皿中,使細胞在轉染時生長狀態(tài)良好。

2、 在加入DNA之前2~4h,按9ml/10cm培養(yǎng)皿的比例加入完全培養(yǎng)液,置于37℃5%CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)。

3、 取適量乙醇沉淀的DNA溶解于450μl無菌水中,加入50μl 2.5M CaCl2并充分混勻,使Ca2+終濃度達到0.25M。

4、 用移液器一邊吹打2×HeBS,一邊逐滴加入配制好的DNA/CaCl2溶液(操作應迅速,一般在30~60s),并劇烈振蕩5s,室溫下靜置20~30min以形成沉淀。

5、 取沉淀均勻加入到培養(yǎng)皿細胞中,輕輕晃動使沉淀于培養(yǎng)液充分混勻,置于37℃5%CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)4~16h。如果培養(yǎng)細胞為CHO、DUKX等,可以DMSO或甘油進行休克處理,轉染效率會大大增加。即培養(yǎng)4~6h后,用2ml含10%甘油或20%DMSO的完全培養(yǎng)液替換當前培養(yǎng)液,室溫下靜置3min,加5ml PBS搖動混勻。

6、 去除培養(yǎng)液,用PBS清洗細胞2次,加入5~10ml完全培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。

7、 對于瞬時轉染,在轉染的不同時間點內收集細胞并檢測,一般時間多控制在12~60h以內。

8、 對于穩(wěn)定轉染,轉染后在非選擇性培養(yǎng)液培養(yǎng)18~48h,一般時間多控制在24~36h,以便外源基因表達。

9、 用胰蛋白酶消化細胞并傳代,更換適當的選擇培養(yǎng)繼續(xù)培養(yǎng),沒2~4d更換一次選擇培養(yǎng)液,一般10~14d會出現目的細胞克隆。

注意事項:

1、 注意無菌操作,盡量避免污染。

2、 對于瞬時轉染,可以不用乙醇沉淀的DNA。

3、 休克處理某些細胞系會使轉染效率大大提高,但應注意甘油暴露過久易導致細胞死亡。

4、 轉染12~24h后,可以加入終濃度為10mmol/L的丁酸鈉溶液,可以提高病毒滴度。

5、 該試劑用于轉染時應檢測其轉染效率,好的轉染效率應介于30~60%之間。

6、 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。

產品組成
名稱 貨號 規(guī)格 storage
HEPES緩沖鹽溶液(2×HeBS,pH6.7) AWC0164a 100ml -20℃
bio-equip.com
售后服務
相關視頻
資料下載
快速詢價登錄注冊在線詢價 (請留下您的聯系方式,以便供應商聯系您)
* 姓  名:
* 地  區(qū):
* 單  位:
職  位:
* 手機/電話:
* E-mail:
請寄產品資料:
需要 不需要
請報價格:
需要報價 不需要報價
留  言:
驗證碼:
換一張
我希望獲得多家供應商報價
發(fā)表評論在線評論(0條)
手機版:HEPES緩沖鹽溶液(2×HeBS,pH6.7)
搜索本類產品

您最近瀏覽過的產品
Copyright(C) 1998-2025 生物器材網 電話:021-64166852;13621656896 E-mail:info@bio-equip.com
立即詢價