Percoll 細胞分離液

產(chǎn)品簡介：

Percoll是一種包有乙烯吡咯烷酮的硅膠顆粒。滲透壓很低(<20mosm/kg H₂O)，粘度也很小,可形成高達1.3g/ml密度，采用預先形成的密度梯度時可在低離心力(200~1000g)于數(shù)分至數(shù)十分鐘內(nèi)達到滿意的細胞分離結(jié)果。由于Percoll擴散常數(shù)低，所形成的梯度十分穩(wěn)定。此外，Percoll不穿透生物膜，對細胞無毒害，因此廣泛用于分離細胞、亞細胞成分、細菌及病毒，還可將受損細胞及其碎片與完好的活細胞分離。

自備材料：

1、  小牛血清

2、 Percoll細胞分離液

3、 8.5％NaCl

4、 1.5MPBS

5、 高速冷凍離心機(3K-30)

6、 4℃、-20℃冰箱

7、 長針頭注射器

8、 1.5mL和10mL離心管

操作步驟（僅供參考）：

1、 不同濃度(密度)Percoll溶液的制備：先用9份Percoll與1份8.5%NaCl或1.5MPBS混合達到生理性滲透壓，然后用生理溶液(0.85%NaCl或0.15M PBS)稀釋到所需濃度。

2、 不連續(xù)密度梯度Percoll層的制備：先將試管壁用牛血清濕潤，除去多余血清,這種預處理可使逐層疊加的Percoll液平穩(wěn)沿管壁流下，使形成滿意的界面。在制備過程中一般用長針頭注射器從高密度向低密度逐層放置，有時相鄰兩層Percoll比重相差不大時，可將Percoll液放入注射器中，小針頭斜面緊貼管壁，任其自然慢慢流下。

3、 裝樣：樣品體積和細胞濃度根據(jù)不同細胞而異，一般加樣體積不宜過大，細胞濃度也不可過高，否則會影響細胞的分離和回收。

4、 離心：一般采用離心力為400g，時間20~25min。由于多層Percoll之間密度差別不大，因此離心機加速、降速時要慢，要平穩(wěn)。

5、 取樣：當所要分離的細胞絕大部分在兩層的界面時，可逐層去除Percoll液后收集界面部位的細胞；有時大部分細胞位于Percoll層中，則需要逐層收集。收獲含有Percoll液的細胞經(jīng)2次洗滌后可供培養(yǎng)或檢測用。

舉例：

1、 富含NK活性大顆粒淋巴細胞(LGL)的純化：按順序由下向上逐層加50％、47.5％、45％、42.5％和40％五種不同密度的Percoll，如用10mL試管(或塑料管)分離，每層Percoll約1.2～1.5mL，初步從外周血中分離的PBMC細胞1×108懸于1mL培基中，按要求裝樣、離心和取樣。一般富含NK殺傷活性的LGL細胞位于42.5％與45％Percoll界面以及上下二層的Percoll液中。

2、 純化淋巴母細胞和除去死細胞：分別疊加50％和30％Percoll液。收取經(jīng)PHA(或其它抗原、有絲分裂原)刺激PBMC，或含有較高比例異型的PBMC(如腎綜合征出血熱患者)，按要求裝樣、離心和取樣。位于管底的淋巴細胞為小淋巴細胞；兩層Percoll之間為淋巴母細胞，純度和回收率在80％以上，位于30％Percoll表面是死細胞。收獲淋巴母細胞可進行表型、結(jié)構(gòu)以及功能的研究。

注意事項：

1、 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。