胰蛋白酶溶液(0.05%)

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

胰蛋白酶(Trypsin)是由胰臟產(chǎn)生沒(méi)有活性的胰蛋白酶原分泌到小腸后，小腸內(nèi)的腸肽酶會(huì)活化該酶原，形成胰蛋白酶。胰蛋白酶的特點(diǎn)在于已經(jīng)活化的胰蛋白酶，能夠繼續(xù)活化更多胰蛋白酶原，這種過(guò)程即自動(dòng)催化。胰蛋白酶在小腸工作，它會(huì)將蛋白質(zhì)水解為肽，進(jìn)而分解為氨基酸，其最適溫度約為37℃。

Trypsin Solution(0.05%)由0.05%胰酶組成、不含EDTA，經(jīng)過(guò)濾除菌。本試劑可以直接用于培養(yǎng)細(xì)胞的消化，或者一些組織的消化，通常室溫下1min左右就可以消化下大多數(shù)貼壁細(xì)胞。

自備材料：

1、 PBS、Hanks液或無(wú)血清培養(yǎng)液

2、 顯微鏡

3、 離心機(jī)

操作步驟（僅供參考）：

1、 貼壁細(xì)胞的消化

① 吸除培養(yǎng)液，用無(wú)菌PBS、Hanks液或無(wú)血清培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞1次，以去除殘余的血清。

② 加入少量Trypsin Solution,略蓋過(guò)細(xì)胞即可，室溫放置0.5~2min，不同的細(xì)胞消化時(shí)間有所不同。

③ 顯微鏡下觀察，細(xì)胞明顯收縮，并且肉眼觀察培養(yǎng)皿底部發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變化；或者用槍吹打細(xì)胞發(fā)現(xiàn)細(xì)胞剛好可以被吹打下來(lái)，此時(shí)吸除胰酶細(xì)胞消化液。加入含血清的完全細(xì)胞培養(yǎng)液，吹打下細(xì)胞，即可直接用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

④ 如果發(fā)現(xiàn)消化不足，則加入Trypsin Solution重新消化。

⑤ 如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞消化時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，未及吹打細(xì)胞，細(xì)胞已經(jīng)有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落，直接用胰酶細(xì)胞養(yǎng)液把細(xì)胞全部吹打下來(lái)。1000~2000g離心1min，沉淀細(xì)胞，盡量去除胰酶細(xì)胞消化液后，加入含血清的完全培養(yǎng)液重新懸浮細(xì)胞，即可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

2、 組織的消化

① 不同的組織需要消化的時(shí)間相差很大，通常以消化后可以充分打散組織為宜。

注意事項(xiàng)：

1、 盡量減少反復(fù)凍融的次數(shù)，以免失效。

2、 在Trypsin Solution過(guò)程中，要特別注意避免消化液被細(xì)菌污染。

3、 Trypsin Solution消化細(xì)胞時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)，否則細(xì)胞鋪板后生長(zhǎng)狀況會(huì)較差。

4、 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。