無(wú)酶細(xì)胞消化液
產(chǎn)品簡(jiǎn)介：
胰蛋白酶(Trypsin)是由胰臟產(chǎn)生沒(méi)有活性的胰蛋白酶原分泌到小腸后，小腸內(nèi)的腸肽酶會(huì)活化該酶原，形成胰蛋白酶。胰蛋白酶經(jīng)常用于動(dòng)物組織的培養(yǎng)細(xì)胞消化或者一些組織的消化，但對(duì)細(xì)胞有的潛在損害，尤其是在37℃環(huán)境下危害較大。
無(wú)酶細(xì)胞消化液(Non-enzy Cell Detach Solution) 不含胰蛋白酶等蛋白消化酶類，但能有效地使貼壁細(xì)胞與培養(yǎng)瓶皿表面脫離而達(dá)到分離細(xì)胞目的。其特點(diǎn)是：1、作用溫和；2、對(duì)細(xì)胞的損傷和破壞極小，不影響細(xì)胞生物學(xué)特性，是腫瘤細(xì)胞的極好細(xì)胞脫壁方法；3、可以在血清存在的情況下進(jìn)行消化。消化后的細(xì)胞可進(jìn)行傳代培養(yǎng)，亦可用于提取蛋白和胞漿蛋白、Western Blot、免疫共沉淀等實(shí)驗(yàn)，通常室溫下10min左右就可以消化下大多數(shù)貼壁細(xì)胞，該消化液適用于消化腫瘤、腦、肝、腎、肺組織等，尤其適用于上皮組織。
自備材料：
1、 PBS、培養(yǎng)液
2、 顯微鏡
3、 離心機(jī)
操作步驟（僅供參考）：
1、 貼壁細(xì)胞的消化
①吸除培養(yǎng)液，用無(wú)菌PBS、培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞1次。
②加入少量Non-enzy Cell Detach Solution，略蓋過(guò)細(xì)胞即可（一般按細(xì)胞的有效體積的10倍添加）。
③室溫放置10min，如置于37℃脫壁反應(yīng)會(huì)加速，直到細(xì)胞完全脫壁，不同的細(xì)胞消化時(shí)間有所不同。亦可顯微鏡下觀察，細(xì)胞明顯收縮，并且肉眼觀察培養(yǎng)皿底部發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變化；或者用槍吹打細(xì)胞發(fā)現(xiàn)細(xì)胞剛好可以被吹打下來(lái)，吸除消化液。
④加入細(xì)胞培養(yǎng)液或5倍體積PBS緩沖液終止反應(yīng)。如果發(fā)現(xiàn)消化不足，則加入Non-enzy Cell Detach Solution重新消化。
⑤1000~2000g離心3~5min，沉淀細(xì)胞，棄上清，盡量去除Non-enzy Cell Detach Solution，加入含血清的完全培養(yǎng)液重新懸浮細(xì)胞，即可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
2、 組織的消化
①PBS、培養(yǎng)液清洗組織1次，用無(wú)菌的刮勺或茶匙將剪碎的組織碎片轉(zhuǎn)移至合適容器。
②按組織有效體積的5~10倍，加入Non-enzy Cell Detach Solution。
③置于37℃作用4~148h，無(wú)需振蕩，不同的細(xì)胞消化時(shí)間有所不同。對(duì)于較難分解的腫瘤細(xì)胞，可作用5天或更長(zhǎng)時(shí)間，但應(yīng)重新用消化液懸浮。
④吹打組織碎片數(shù)次，釋放松散的細(xì)胞，輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)或皿，倒置顯微鏡下檢查分離情況，當(dāng)細(xì)胞量少和/或在組織碎片中仍可見(jiàn)細(xì)胞時(shí)，需要繼續(xù)消化。
⑤1000~2000g離心3~5min，沉淀細(xì)胞，棄上清，盡量去除Non-enzy Cell Detach Solution，加入含血清的完全培養(yǎng)液重新懸浮細(xì)胞，即可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
注意事項(xiàng)：
1、 盡量減少反復(fù)凍融的次數(shù)，以免失效。
2、 在使用細(xì)胞消化液的過(guò)程中，要特別注意避免消化液被細(xì)菌污染。
3、 細(xì)胞消化液消化細(xì)胞時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)，否則細(xì)胞鋪板后生長(zhǎng)狀況會(huì)較差。
4、 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
