MTT溶液(5mg/ml)

 

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

MTT是色法是一種檢測(cè)細(xì)胞存活和生長(zhǎng)的方法。MTT細(xì)胞增殖及細(xì)胞毒性檢測(cè)試劑盒（MTT Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay Kit）被廣泛應(yīng)用于細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性的檢測(cè)。MTT檢測(cè)原理在于活細(xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍(lán)紫色Formazan并沉積在細(xì)胞中，而死細(xì)胞無此功能。在特定溶劑(DMSO)存在的情況下，可以被完全溶解。然后通過酶標(biāo)儀可以測(cè)定570nm波長(zhǎng)附近的吸光度。細(xì)胞增殖越多越快，則吸光度越高；細(xì)胞毒性越大，則吸光度越低。

自備材料：

1、 細(xì)胞培養(yǎng)液

2、 胰蛋白酶消化液

3、 低速離心機(jī)

4、 96孔培養(yǎng)板

5、 細(xì)胞計(jì)數(shù)板或計(jì)數(shù)器

6、 DMSO或Formazan solvent

7、 搖床

8、 顯微鏡

9、 酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀

操作步驟（僅供參考）：

1、 細(xì)胞用含血清的培養(yǎng)液培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，常規(guī)胰蛋白酶消化液消化細(xì)胞（懸浮細(xì)胞無需消化）。

2、 低速離心，收集細(xì)胞沉淀。

3、 用培養(yǎng)液重懸細(xì)胞沉淀，制備成單細(xì)胞懸液，并計(jì)數(shù)。

4、 細(xì)胞接種于96孔培養(yǎng)板，一般接種密度為3000~10000/孔。通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加3000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入6000個(gè)細(xì)胞即可。具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定。

5、 37℃5%CO₂繼續(xù)培養(yǎng)或按照實(shí)驗(yàn)具體需要進(jìn)行培養(yǎng)，一般培養(yǎng)6~24h。

6、 按照實(shí)驗(yàn)具體要求，給予0~20μl干預(yù)藥物處理，37℃5%CO₂繼續(xù)培養(yǎng)至合適時(shí)間。

7、 棄培養(yǎng)液，每孔加入10μl MTT Solution和100μl新鮮培養(yǎng)液，在細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)繼續(xù)孵育4h。

8、 棄培養(yǎng)液，每孔加入110μl DMSO，置搖床上低速振蕩10min，使結(jié)晶物充分溶解。如果紫色結(jié)晶較小或較少，溶解的時(shí)間會(huì)短一些。如果紫色結(jié)晶較大或較多，溶解的時(shí)間會(huì)長(zhǎng)一些。

9、 在酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀570nm測(cè)定各孔吸光度。

 

注意事項(xiàng)：

1、 MTT Solution(5mg/ml)盡量減少反復(fù)凍融的次數(shù)，以免失效，當(dāng)顏色變?yōu)榛揖G色時(shí)，請(qǐng)勿使用。

2、 由于使用96孔板進(jìn)行檢測(cè)，如果細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)間較長(zhǎng)，應(yīng)注意蒸發(fā)問題。

3、 MTT Solution在低溫情況下會(huì)凝固，使用前請(qǐng)置于室溫或20~25℃水浴至全部融解后使用。

4、 觀察Formazan是否完全溶解，亦可以借助光學(xué)顯微鏡觀察。

5、 培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)盡量細(xì)菌避免污染。

6、 應(yīng)注意設(shè)立OD調(diào)零孔和對(duì)照。

7、 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

 HonorGene（奧諾基因，長(zhǎng)沙艾碧維生物旗下品牌）是一家研發(fā)、生產(chǎn)及銷售基因、載體、菌株、細(xì)胞、腺病毒、慢病毒、siRNA/shRNA等生物資源產(chǎn)品的高科技公司，致力于為廣大科研工作者提供優(yōu)秀的基因研究資源產(chǎn)品，共同推動(dòng)生物醫(yī)學(xué)的發(fā)展。
 
  公司總部位于長(zhǎng)沙市高新區(qū)，自成立以來，HonorGene憑借可靠的產(chǎn)品質(zhì)量和完善的售后服務(wù)贏得了眾多客戶的信賴，樹立了良好的品牌形象。公司擁有一批專業(yè)的研發(fā)人員，專注于基因研究資源產(chǎn)品的完善和持續(xù)創(chuàng)新。目前公司建設(shè)有【基因質(zhì)粒庫(kù)】、【載體菌株庫(kù)】、【細(xì)胞庫(kù)】、【啟動(dòng)子庫(kù)】、【腺病毒庫(kù)】、【慢病毒庫(kù)】、【siRNA/shRNA庫(kù)】七大資源庫(kù)，可為客戶提供5萬多個(gè)各種屬基因（包括cDNA克隆和ORF表達(dá)克�。�、1500多種載體及菌株、200多個(gè)啟動(dòng)子、400多株細(xì)胞、500多個(gè)現(xiàn)貨腺病毒（過表達(dá)或RNA干擾）等生物資源產(chǎn)品，且各個(gè)資源庫(kù)的產(chǎn)品數(shù)量還在不斷增加中。
 
  此外，HonorGene還建設(shè)有分子生物學(xué)平臺(tái)、細(xì)胞生物學(xué)平臺(tái)、病毒包裝平臺(tái)、蛋白及免疫學(xué)平臺(tái)、miRNA&LncRNA平臺(tái)、病理平臺(tái)、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)平臺(tái)等技術(shù)服務(wù)平臺(tái)，可為客戶提供從分子到細(xì)胞、從體外到體內(nèi)的各種單項(xiàng)及整體實(shí)驗(yàn)服務(wù)，亦可承擔(dān)各種醫(yī)學(xué)類碩博課題和各級(jí)基金課題，為客戶提供優(yōu)異的、高性價(jià)比的專業(yè)服務(wù)。
 
HonorGene---專業(yè)的基因研究資源提供商
地址：湖南省長(zhǎng)沙市岳麓區(qū)桐梓坡西路229號(hào)麓谷國(guó)際工業(yè)園C棟11樓
電話：    19892851913
Email：[email protected]
QQ：1011960948