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MTT溶液(5mg/ml)
產(chǎn)品簡介：
MTT是色法是一種檢測細(xì)胞存活和生長的方法。MTT細(xì)胞增殖及細(xì)胞毒性檢測試劑盒（MTT Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay Kit）被廣泛應(yīng)用于細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性的檢測。MTT檢測原理在于活細(xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍(lán)紫色Formazan并沉積在細(xì)胞中，而死細(xì)胞無此功能。在特定溶劑(DMSO)存在的情況下，可以被完全溶解。然后通過酶標(biāo)儀可以測定570nm波長附近的吸光度。細(xì)胞增殖越多越快，則吸光度越高；細(xì)胞毒性越大，則吸光度越低。
自備材料：
1、 細(xì)胞培養(yǎng)液
2、 胰蛋白酶消化液
3、 低速離心機
4、 96孔培養(yǎng)板
5、 細(xì)胞計數(shù)板或計數(shù)器
6、 DMSO或Formazan solvent
7、 搖床
8、 顯微鏡
9、 酶聯(lián)免疫檢測儀
操作步驟（僅供參考）：
1、 細(xì)胞用含血清的培養(yǎng)液培養(yǎng)至對數(shù)生長期，常規(guī)胰蛋白酶消化液消化細(xì)胞（懸浮細(xì)胞無需消化）。
2、 低速離心，收集細(xì)胞沉淀。
3、 用培養(yǎng)液重懸細(xì)胞沉淀，制備成單細(xì)胞懸液，并計數(shù)。
4、 細(xì)胞接種于96孔培養(yǎng)板，一般接種密度為3000~10000/孔。通常細(xì)胞增殖實驗每孔加3000個細(xì)胞，細(xì)胞毒性實驗每孔加入6000個細(xì)胞即可。具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定。
5、 37℃5%CO2繼續(xù)培養(yǎng)或按照實驗具體需要進(jìn)行培養(yǎng)，一般培養(yǎng)6~24h。
6、 按照實驗具體要求，給予0~20μl干預(yù)藥物處理，37℃5%CO2繼續(xù)培養(yǎng)至合適時間。
7、 棄培養(yǎng)液，每孔加入10μl MTT Solution和100μl新鮮培養(yǎng)液，在細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)繼續(xù)孵育4h。
8、 棄培養(yǎng)液，每孔加入110μl DMSO，置搖床上低速振蕩10min，使結(jié)晶物充分溶解。如果紫色結(jié)晶較小或較少，溶解的時間會短一些。如果紫色結(jié)晶較大或較多，溶解的時間會長一些。
9、 在酶聯(lián)免疫檢測儀570nm測定各孔吸光度。
注意事項：
1、 MTT Solution(5mg/ml)盡量減少反復(fù)凍融的次數(shù)，以免失效，當(dāng)顏色變?yōu)榛揖G色時，請勿使用。
2、 由于使用96孔板進(jìn)行檢測，如果細(xì)胞培養(yǎng)時間較長，應(yīng)注意蒸發(fā)問題。
3、 MTT Solution在低溫情況下會凝固，使用前請置于室溫或20~25℃水浴至全部融解后使用。
4、 觀察Formazan是否完全溶解，亦可以借助光學(xué)顯微鏡觀察。
5、 培養(yǎng)細(xì)胞時盡量細(xì)菌避免污染。
6、 應(yīng)注意設(shè)立OD調(diào)零孔和對照。
7、 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
