Portelite 熒光 ssDNA 定量試劑盒用于快速檢測(cè)單鏈 DNA。該試劑盒包含所有基本試劑，包括 Helixyte Green ssDNA 試劑、稀釋緩沖液和預(yù)稀釋的 DNA 標(biāo)準(zhǔn)品。 Helixyte Green ssDNA 試劑是一種靈敏的熒光核酸探針，用于定量溶液中的寡核苷酸和單鏈 DNA (ssDNA)。只需使用提供的緩沖液稀釋試劑，添加樣品（可接受 1–20 μL 的任何體積），然后使用 CytoCite、Qubit® 或其他手持或臺(tái)式熒光計(jì)（Qubit® 是 ThermoFisher 的商標(biāo)）讀取濃度。該檢測(cè)對(duì)于 50 pg/µL 至 200 ng/µL 的初始樣品濃度是準(zhǔn)確的，提供了 1–200 ng 的測(cè)定范圍。該試劑檢測(cè)長寡核苷酸或 ssDNA。核苷酸和六個(gè)堿基或更少的短寡核苷酸不會(huì)干擾定量分析。檢測(cè)限不受核酸制劑中常見污染物的明顯干擾，包括鹽類、尿素、乙醇、氯仿、去污劑、蛋白質(zhì)、核苷酸和六堿基短寡核苷酸。然而，雙鏈 DNA (dsDNA) 和 RNA 確實(shí)會(huì)干擾檢測(cè)，因?yàn)?Helixyte Green ssDNA 試劑會(huì)與 dsDNA 和 RNA 結(jié)合以產(chǎn)生額外的熒光信號(hào)。 Portelite 熒光 ssDNA 定量試劑盒針對(duì) CytoCite 和 Qubit® 熒光計(jì)進(jìn)行了優(yōu)化。

適用儀器

實(shí)驗(yàn)方案

概述

1.準(zhǔn)備 Helixyte Green ssDNA 工作溶液
2.在每個(gè) 0.2 mL PCR 管中加入 190 µL 1X Helixyte Green ssDNA 工作溶液
3.在每個(gè)管中加入 10 µL ssDNA 標(biāo)準(zhǔn)品或測(cè)試樣品
4.在室溫下孵育2分鐘
5.使用 CytoCite 熒光計(jì)或 Qubit 熒光計(jì)檢測(cè)熒光強(qiáng)度

溶液制備

Helixyte Green ssDNA 工作溶液
使用檢測(cè)緩沖液（組分 B）將 Helixyte Green ssDNA 試劑（組分 A）稀釋 200 倍。 例如，要為 5 個(gè)樣品制備足夠的工作溶液，將 5 μL Helixyte Green ssDNA（組分 A）添加到 1 mL 檢測(cè)緩沖液（組分 B）中。
注意：通過用箔紙覆蓋或?qū)⑵渲糜诤诎抵衼肀Ｗo(hù)工作溶液免受光照。建議在塑料容器而不是玻璃容器中制備溶液，因?yàn)槿玖峡赡軙?huì)吸附到玻璃表面。 為獲得最佳效果，該溶液應(yīng)在稀釋后幾小時(shí)內(nèi)使用。

操作步驟 

樣品體積的可接受范圍是 1~20 μL，這具體取決于核酸樣品的估計(jì)濃度。
以下實(shí)驗(yàn)方案基于 10 µL 樣品體積生成，DNA 濃度范圍為 20~1000 ng /mL。
1.將 190 µL 1X Helixyte Green ssDNA 工作溶液添加到每個(gè) Cytocite 樣品管 (#CCT100) 或等效的 0.2 mL PCR 管中。
注意：使用薄壁、聚丙烯、透明的 0.2 mL PCR 管，例如 AAT Cat#CCT100。
2.在每管中加入 10 µL ssDNA 標(biāo)準(zhǔn)品或測(cè)試樣品，然后渦旋混合 2~3 秒。
3.在室溫下孵育所有管子 2 分鐘。
4.將樣品插入 CytoCite 或 Qubit 并使用綠色熒光通道檢測(cè)熒光。

標(biāo)準(zhǔn)校準(zhǔn)曲線的制作
1.執(zhí)行 1:2 連續(xù)稀釋：將 10 ng/μL ssDNA Standard #2（組分 D）添加到檢測(cè)緩沖液（組分 B）中，以獲得 10、5、2.5、1.25、0.62、0.31、0.15 ng/μL DNA 標(biāo)準(zhǔn)稀釋度。
2.在每個(gè)管中加入 190 µL Helixyte Green ssDNA 工作溶液。
3.將 10 µL 標(biāo)準(zhǔn)品加入 0.2 mL PCR 管中，然后渦旋混合 2~3 秒。
4.在室溫下孵育反應(yīng) 2 分鐘。
5.將樣品插入 CytoCite 并使用綠色熒光通道檢測(cè)熒光強(qiáng)度。

圖示

圖 1. 使用 Qubit 熒光計(jì)（藍(lán)色）或 CytoCite 熒光計(jì)（紅色）比較 ssDNA 劑量反應(yīng)。

西安百螢生物科技有限公司是一家專注從事生物、化學(xué)試劑及其試劑盒的高新技術(shù)企業(yè)；主要以熒光探針，分子探針，核酸/蛋白質(zhì)標(biāo)記、細(xì)胞檢測(cè)等技術(shù)和產(chǎn)品為研發(fā)核心，產(chǎn)品廣泛應(yīng)用于基因合成、細(xì)胞檢測(cè)、活體示蹤，抗體標(biāo)記、新藥篩選等領(lǐng)域。

美國AAT Bioquest公司是生物光譜領(lǐng)域全球領(lǐng)導(dǎo)者，產(chǎn)品暢銷全球。長年以來百螢生物與AAT Bioquest互補(bǔ)優(yōu)勢(shì)，為國內(nèi)外廣大用戶提供光譜檢測(cè)，底物顯色，熒光發(fā)光技術(shù)等全系列解決方案。近年來，百螢生物已與全球多家知名藥企、CRO公司、眾多高校及科研單位建立了長期穩(wěn)定的合作關(guān)系；我們的服務(wù)宗旨：不斷創(chuàng)新，為廣大科研用戶提供最優(yōu)質(zhì)的服務(wù)；主要分為以下幾個(gè)產(chǎn)品線：

a)開發(fā)和生產(chǎn)國際頂級(jí)熒光標(biāo)記探針和發(fā)光探針。這些熒光標(biāo)記探針和發(fā)光探針是用于標(biāo)記生物大分子例如，蛋白質(zhì)，核酸，碳水化合物的主要工具；
b)檢測(cè)蛋白質(zhì)，核酸和活細(xì)胞熒光和熒光探針；
c)新型各種酶活性熒光探針和發(fā)光探針(特別是用與研究蛋白酶，蛋白激酶和氧化還原酶熒光標(biāo)記探針和發(fā)光探針)；
d) 開發(fā)用于分子信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)研究試劑和試劑盒；
e)生物鈣膜電位探針和神經(jīng)生物學(xué)熒光標(biāo)記探針和發(fā)光探針；

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