產(chǎn)品名稱：棒桿菌通用染料法熒光PCR試劑盒
產(chǎn)品規(guī)格：50T
產(chǎn)品運(yùn)輸，-20℃保存，避免反復(fù)凍融,有效期一年。
限于網(wǎng)頁篇幅此處僅做簡要說明，如需詳細(xì)PDF文檔說明書，可聯(lián)系我們客服免費(fèi)索取
使用本試劑盒提供的陽性對照時(shí)，由于其濃度較高，一定要注意不要污染其他試劑和成分。最好在專門的區(qū)域操作。
適用儀器:ABI 系列、Bio-Rad系列、Agilent Stratagene MX系列 、Roche LightCycler R480、Cepheid SmartCycler、Rotor-Gene系列、杭州博日系列等多通道實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀。
棒桿菌通用染料法熒光PCR試劑盒具有下列特點(diǎn)：
1.即開即用，用戶只需要提供樣品 DNA 模板。
2.根據(jù)指標(biāo)保守區(qū)域設(shè)計(jì)引物和探針，能專一性地檢測出樣品中的指標(biāo)成分，且不能檢測其他非成分。
3.提供陽性對照，便于區(qū)分假陰性樣品。
4.一管式閉管操作，降低了交叉污染。
本產(chǎn)品只能用于科研，足夠50次20uL 體系的熒光定量 PCR。
棒桿菌通用染料法熒光PCR試劑盒注意事項(xiàng)
1.整個(gè)檢測過程應(yīng)嚴(yán)格按照本說明書要求分別在試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本處理區(qū)和PCR擴(kuò)增區(qū)進(jìn)行操作，各區(qū)實(shí)驗(yàn)服、儀器、耗材應(yīng)獨(dú)立使用，不能混用；實(shí)驗(yàn)用吸頭采用帶濾芯吸頭；樣本處理區(qū)應(yīng)配有生物安全柜，樣本處理在生物安全柜中進(jìn)行操作；三個(gè)區(qū)應(yīng)該配有紫外線殺菌裝置。
2.為避免RNA降解，樣本處理過程應(yīng)在0-4℃條件下操作，且完成實(shí)驗(yàn)后立即上機(jī)檢測；樣本處理過程中使用的器具耗材應(yīng)經(jīng)過無核酶處理。
3.每次實(shí)驗(yàn)應(yīng)該設(shè)置陰、陽性對照。
4.試劑盒所有試劑在使用前應(yīng)該在常溫下充分融化混勻，并應(yīng)瞬時(shí)離心。
5.試劑盒內(nèi)所配陰性和陽性對照在第一次使用前應(yīng)全部轉(zhuǎn)移至標(biāo)本準(zhǔn)備區(qū)，并單獨(dú)存放。
6.為防止熒光干擾，應(yīng)避免裸手直接接觸PCR反應(yīng)管，并應(yīng)避免在PCR反應(yīng)管上進(jìn)行任何標(biāo)記。
7.儀器擴(kuò)增相關(guān)參數(shù)應(yīng)按照本說明書相關(guān)要求進(jìn)行設(shè)置；不同批號(hào)試劑不能混用。
8.ABI系列熒光定量PCR儀參數(shù)設(shè)置中不選ROX校正，淬滅基因選擇None。
9.實(shí)驗(yàn)過程中產(chǎn)品的廢棄物應(yīng)該進(jìn)行無害化處理后方可丟棄。
棒桿菌通用染料法熒光PCR試劑盒操作步驟：
一、稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品（以10E2-10E7拷貝/μL 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例）。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。
1.標(biāo)記6個(gè)離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。
2.用帶芯槍頭分別加入45μL 熒光 PCR 專用模板稀釋液，最好用帶芯槍頭，下同）。
3.在7號(hào)管中加入5μL陽性對照（濃度為 1×10E8 拷貝/μL，試劑盒提供)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E7 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
4.換槍頭，在6號(hào)管中加入5μL1×10E7 拷貝/μL  的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
5.換槍頭，在5號(hào)管中加入5μL1×10E6 拷貝/μL  的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
6.重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
二、樣品 DNA 的制備
7.用自選方法純化樣品的DNA，本產(chǎn)品跟市場上絕大多數(shù)核酸純化產(chǎn)品兼容。
8.如果有N個(gè)樣品，則需要進(jìn)行 N+2 個(gè)樣品提取，多出的一個(gè)用作樣品制備陽性對照管、另一個(gè)用作樣品制備陰性對照管。
三、設(shè)置qPCR 反應(yīng)（20μL體系，在樣品制備室進(jìn)行）
9.如果做定量分析并且只做 1 次重復(fù)，則標(biāo)記 N+9 個(gè)PCR 管，其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品，1 個(gè)用于 PCR 陰性對照（用水做模板），6 個(gè)用于標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果做定性分析，并且只做 1 次重復(fù)，則標(biāo)記 N+4 個(gè)PCR 管，其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品，1 個(gè)用于PCR 陰性對照（用水做模板），1 個(gè)用于PCR 陽性對照（用第一步稀釋得到的標(biāo)準(zhǔn)曲線系列稀釋液的第 4 號(hào)做模板）。下面只以定量分析為例描述操作步驟。
10.在標(biāo)記管中按下表加入各成分（本表只列出一次重復(fù)）：
四、數(shù)據(jù)處理
11.如果把本試劑盒用于定量檢測，則以陽性對照濃度的 log 值為橫軸，以 Ct 值為縱軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。再以待測樣品的 Ct 值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上推算出樣品 DNA 濃度的log 值，再推算出其濃度。
12.如果把本試劑盒用于定性檢測，只判斷陽性或陰性，則陰性對照 Ct 必須大于或等于 40。陽性對照必須有熒光對數(shù)增長，有典型擴(kuò)增曲線，Ct  值應(yīng)該小于或等于30。對待測樣品，如果其 Ct 大于或等于 40 則為陰性，如果小于或等于 35 則為陽性。如果在 35-40 之間，則重復(fù)一次。重復(fù)實(shí)驗(yàn)的 Ct 值如果大于或等于 40 則為陰性，如果小于 40，則為陽性。
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