側柏葉染料法PCR鑒定試劑盒PCR反應的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性;
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結合是關鍵。引物與模板的結合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應中模板與引物的結合(復性)可以在較高的溫度下進行,結合的特異性大大增加,被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產物的生成量是以指數方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位);在細菌學中zui小檢出率為3個細菌。
(3) 簡便、快速
PCR反應用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應液加好后,即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應,一般在2~4 小時完成擴增反應。擴增產物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。
(4) 對標本的純度要求低
不需要分離病毒或細菌及培養(yǎng)細胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板?芍苯佑门R床標本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細胞、活PCR技術概論。
以下是PCR鑒定試劑盒訂購信息:
產品名稱:
側柏葉染料法PCR鑒定試劑盒
英文名稱:Cacumen platycladi
產品規(guī)格:50次
運輸:低溫
保存:負20度
有效期:一年
貨期:現(xiàn)貨
儲存條件:
14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000 轉離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液:3000 轉離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉離心10 分鐘取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
產品及特點:
本產品是一管式超快植物種子和葉片基因組DNA 提取試劑,得到的產物可以直接用于PCR。整個過程簡單快速,尤其適合于大規(guī)模的轉基因植物篩選時樣品的制備。
1. 快速,整個過程只需要15分鐘左右,不需要液氮對植物組織進行冰凍、機械處理、純化或者DNA的沉淀。運輸及保存2. 一管式,在一個試管內完成所有操作,不容易交叉污染。常溫運輸及保存,有效期一年。
3. 裂解液可以直接用于PCR,剩余樣品可以在4℃保存一月以上。
4. 便于高通量和自動化,適合于海關和企業(yè)進行大規(guī)模的GMO PCR 篩選。
5. 適用于大多數植物葉片和種子。
使用及效果:將壓碎的一小片重量約在100 mg 左右的植物種子(約1/4 黃豆大。┗蛑睆郊s為0.5-0.7 cm(或面積相當的其他形狀)的植物葉片直接加到新鮮配制的0.1 mL溶液A 中,95℃保溫10-15 分鐘,加入0.1 mL 溶液B,混勻,直接取上清液(相當于PCR 體積的1/10)作為模板進行PCR。剩余樣品可以放4℃保存。
應用案例
樣品 DNA 的制備
1.用自選方法純化樣品的 DNA,本試劑盒跟市場上大多數病毒 DNA 提取試劑盒兼 容。。也可以選購本公司的一管式病毒 DNAout 或其升級版柱式病毒 DNAout。 本試劑盒免費贈送 15 次 DNA 病毒裂解液試用裝(一管式病毒 DNAout 的成分)。
稀釋陽性對照(以 10E2-10E7 這 6 個 10 倍稀釋度為例。由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原,本產品不提供活體樣品做陽性對照,只提供可以直接使用的長為 86bp 的 DNA 片段作為陽性對照。
2.標記 6 個離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。
3.用帶芯槍頭分別加入 45 μL 模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。
4.在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照,充分震蕩 1 分鐘,得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。5.換槍頭,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
6.換槍頭,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中,充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
7.換槍頭,在 4 號管中加 5 μL 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照到 4 號管中,得1×10E4 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
8.重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。設置 qPCR 反應(20 μL 體系,在樣品制備室進行)
9.在 PCR 管中加入下列成分.
骨橋素 Osteopontin 37.5 1200 pg/mL 1
骨特異性堿性磷酸酶 bone-specific alkaline phosphatase 0.75 24 ng/mL 0.1
骨特異性堿性磷酸酶B Bone-specific Alkphase B 1.5 48 U/L 0.1
過氧化氫酶 Catalase 2.5 80 U/mL 0.1
過氧化物還原酶2 peroxiredoxin 2 0.25 8 ng/mL 0.1
還原型谷胱甘肽 reduced glutathione 6.25 200 μg/mL 1
核因子κB Nuclear factor-kappa B 37.5 1200 pg/mL 1
環(huán)磷酸鳥苷 Cyclic guanosine monophosphate 1.5 48 nmol/L 0.1
環(huán)磷酸腺苷 cyclic adenosine monophosphate 0.375 12 nmol/L 0.1
環(huán)氧合酶2 cyclooxygenase-2 3.75 120 U/L 0.1
緩激肽 bradykinin 0.25 8 ng/mL 0.1
黃嘌呤氧化酶 Xanthine Oxidase 0.15 4.8 U/L 0.1
黃體生成素 Luteinizing Hormone 5 160 ng/mL 1
活性氧簇 reactive oxygen species 15 480 U/mL 1
肌鈣蛋白I TroponinⅠ 12.5 400 pg/mL 1
肌酐 Creatinine 6.25 200 μmol/L 1
肌酸激酶 Creatine Kinase 37.5 1200 U/L 1
Guanosine分子式:C10H13N5O5分子量:283.24
鳥苷,鳥嘌呤核甙, 9-beta-D-呋喃核苷鳥嘌呤
鳥嘌呤核苷 118-00-3
Guanosine分子式:C10H13N5O5分子量:283.24
鳥苷,鳥嘌呤核甙, 9-beta-D-呋喃核苷鳥嘌呤
鳥嘌呤核苷 118-00-3
Guanosine分子式:C10H13N5O5分子量:283.24
鳥苷,鳥嘌呤核甙, 9-beta-D-呋喃核苷鳥嘌呤
鳥嘌呤核苷 118-00-3
側柏葉染料法PCR鑒定試劑盒鳥苷,鳥嘌呤核甙, 9-beta-D-呋喃核苷鳥嘌呤
Guanosine分子式:C10H13N5O5分子量:283.24
鳥嘌呤核苷 118-00-3
Guanosine分子式:C10H13N5O5分子量:283.24
鳥苷,鳥嘌呤核甙, 9-beta-D-呋喃核苷鳥嘌呤
5-氟脫氧胞苷 10356-76-0
2'-DEOXY-5-FLUOROCYTIDINE分子式:C9H12FN3O4分子量:245.21
5-氟脫氧胞苷 5-氟胞啶 2,2'-脫氧-5-氟胞啶 5-氟-2'-脫氧-胞苷
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上海博湖生物科技有限公司(Shanghai Bohu Biological Technology Co., Ltd.,China) 是一家生物企業(yè),主要從事免疫學、分子生物學和常規(guī)生化試劑的銷售。主營產品:生化試劑、試劑盒、ELISA試劑盒、抗體、重組蛋白、生化檢測試劑盒、分光光度法檢測試劑盒、熒光定量PCR檢測試劑盒、細胞株、原代細胞、細胞培養(yǎng)基、標準溶液產品。代理并銷售進口SIGMA試劑、abcam抗體、R&D抗體、CST抗體、ATCC細胞、BD公司、GE公司、賽默飛世爾公司產品。
上海博湖生物科技有限公司(Shanghai Bohu Biological Technology Co., Ltd.,China) 先后與天津中醫(yī)學院、復旦大學、上海交通大學醫(yī)學院、上海交通大學、華東師范大學、第二軍醫(yī)大學、南京大學,暨南大學,南京工業(yè)大學,曙光醫(yī)院、華山醫(yī)院、瑞金醫(yī)院、上海有機研究所、中科院上海分院等多家單位建立了良好的合作關系。本公司可為您提供科研ELISA試劑盒,種屬標本齊全,有專門針對人血清、血漿、全血、分泌物、尿液、細胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿、組織液等標本的試劑盒;另有針對各種動物(鼠、兔、牛、馬、雞、豬、狗、山羊、猴、魚)的科研試劑。
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