以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑詳細(xì)說明：

中文名稱	PKH67/PI雙染細(xì)胞毒性檢測(cè)試劑盒
英文名稱
規(guī)格	500T

PKH67/PI雙染細(xì)胞毒性檢測(cè)試劑盒PKH67/PI 雙染細(xì)胞毒性檢測(cè)試劑盒是利用細(xì)胞熒光染料PKH67和PI對(duì)細(xì)胞進(jìn)行染色，利用PKH67標(biāo)記靶細(xì)胞，PI標(biāo)記死的靶細(xì)胞來區(qū)分不同的細(xì)胞，活的靶細(xì)胞成綠色，死的靶細(xì)胞成紅色和綠色，從而檢測(cè)細(xì)胞毒性作用。
根據(jù)不同的實(shí)驗(yàn)方案設(shè)計(jì)，可以用來檢測(cè)化合物的細(xì)胞毒性作用。也可以用來檢測(cè)殺傷性T 細(xì)胞或NK 細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用。
熒光染料PKH67是一種可對(duì)活細(xì)胞進(jìn)行熒光標(biāo)記的新型染料，可以標(biāo)記活體細(xì)胞，通過與膜結(jié)構(gòu)的脂質(zhì)分子結(jié)合而標(biāo)記細(xì)胞。對(duì)細(xì)胞毒性較小，熒光背景低，脂溶性高，能夠輕易穿透細(xì)胞膜，有著強(qiáng)而穩(wěn)定的綠色熒光。經(jīng)PKH67標(biāo)記的細(xì)胞可用于體外和體內(nèi)增殖研究，且具有不會(huì)使鄰近細(xì)胞染色的功能。
在細(xì)胞分裂增殖過程中，PKH67的熒光強(qiáng)度會(huì)隨著細(xì)胞的分裂而逐級(jí)遞減，標(biāo)記熒光可平均分配至兩個(gè)子代細(xì)胞中，因此其熒光強(qiáng)度是親代細(xì)胞的一半，根據(jù)這一特性，它可被用于檢測(cè)細(xì)胞增殖，細(xì)胞周期的估算及細(xì)胞分裂等方面。PKH67標(biāo)記細(xì)胞的熒光非常均一，并且分裂后的子代細(xì)胞的熒光分配也更均一。在細(xì)胞分裂增殖過程中，PKH67標(biāo)記熒光可平均分配至兩個(gè)子代細(xì)胞中，熒光強(qiáng)度變?yōu)橛H代細(xì)胞的一半，通過流式細(xì)胞儀根據(jù)熒光強(qiáng)度的不同，可檢測(cè)出未分裂細(xì)胞，分裂一次(/2的熒光強(qiáng)度)，二次(/4的熒光強(qiáng)度)，三次(/8的熒光強(qiáng)度)，以及更多分裂次數(shù)的細(xì)胞。PKH67可檢測(cè)分裂次數(shù)多達(dá)六次甚至更多。
除了用于細(xì)胞增殖檢測(cè)，PKH67 還可以用于細(xì)胞的體外盒體內(nèi)示蹤，標(biāo)記后熒光在胞內(nèi)表達(dá)穩(wěn)定，陽性標(biāo)記率達(dá)98%以上，標(biāo)記細(xì)胞形態(tài)良好，能有效地觀察細(xì)胞在體外的誘導(dǎo)分化情況；或?qū)��?biāo)記的細(xì)胞注入體內(nèi)，可以有效的顯示移植細(xì)胞在活體組織中的遷移及分化。
PKH67標(biāo)記的細(xì)胞用于體內(nèi)觀察可以長(zhǎng)達(dá)數(shù)周之久，它常被用來做活體細(xì)胞檢測(cè)實(shí)驗(yàn)和用熒光電鏡觀察細(xì)胞長(zhǎng)期活動(dòng)的實(shí)驗(yàn)。PKH67 毒性較小，不影響細(xì)胞的增殖能力。此方法操作簡(jiǎn)單，且不用放射性同位素，不存在安全隱患�？梢愿�快速，更準(zhǔn)確和更安全地得到想要的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。
PKH67/PI標(biāo)記細(xì)胞后通常用流式細(xì)胞儀進(jìn)行細(xì)胞毒性檢測(cè)。
PKH67標(biāo)記細(xì)胞呈綠色熒光，熒光波長(zhǎng)：λex=490 nm,λem=502 nm。流式檢測(cè)時(shí)的激發(fā)波長(zhǎng)可以選擇488nm，此時(shí)的發(fā)射波長(zhǎng)為502nm，使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)時(shí)可以采用FL detection channel。PI標(biāo)記細(xì)胞呈紅色熒光，流式檢測(cè)時(shí)的激發(fā)波長(zhǎng)可以選擇488nm，此時(shí)的發(fā)射波長(zhǎng)為647nm，使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)時(shí)可以采用FL2 detection channel。
PKH67標(biāo)記的細(xì)胞除了流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞毒性外，還可單染后用于細(xì)胞增殖檢測(cè)，或者用熒光酶標(biāo)板定量活細(xì)胞數(shù)目，或者用熒光顯微鏡進(jìn)行均一染色的細(xì)胞示蹤觀察。
儲(chǔ)存條件：-20℃避光保存。


注意事項(xiàng)
. 微量試劑取用前請(qǐng)離心集液。
2. Annexin V-PE/7-AAD 避光保存及使用。
3. 7-AAD 為潛在致癌物，操作時(shí)請(qǐng)采取防護(hù)措施，穿防護(hù)服、戴手套等。
4. 本試劑盒適用于檢測(cè)活細(xì)胞，流式細(xì)胞儀檢測(cè)時(shí)，細(xì)胞數(shù)量不以應(yīng)低于×05，，不推薦用于檢測(cè)組織樣本。
5. 推薦使用懸浮培養(yǎng)細(xì)胞。如果是貼壁細(xì)胞，建議適用不含EDTA 的胰酶消化，如消化不當(dāng)，可能引起假陽性，而用細(xì)胞刮子會(huì)造成細(xì)胞粘連成團(tuán)，而影響檢測(cè)�？蓪⒁让赶�化后細(xì)胞的保存在含2%BSA 的PBS 中，防止進(jìn)一步的損傷。
6. 細(xì)胞固定后可能導(dǎo)致熒光的淬滅，請(qǐng)不要固定樣品。
7. 因檢測(cè)細(xì)胞的類型、凋亡誘導(dǎo)劑種類、使用的檢測(cè)儀器不同，因而流式檢測(cè)的熒光補(bǔ)償也不同，因此建議每次檢測(cè)均需使用未經(jīng)凋亡誘導(dǎo)處理的細(xì)胞作為對(duì)照，進(jìn)行熒光補(bǔ)償?shù)恼{(diào)節(jié)。
產(chǎn)品特點(diǎn)：
.離心吸附柱內(nèi)硅基質(zhì)膜全部采用進(jìn)口世界著名公司特制吸附膜，柱與柱之間吸附量差異極小，可重復(fù)性好。克服了國產(chǎn)試劑盒膜質(zhì)量不穩(wěn)定的弊端。
2.使用了優(yōu)質(zhì)溶膠液，不含傳統(tǒng)溶膠液的碘化鈉和高氯酸鹽，不抑制回收后酶切、連接克隆等下游反應(yīng)。
3.獨(dú)特的溶膠液/結(jié)合液配方，將溶膠和結(jié)合兩種功能統(tǒng)一，因此一個(gè)試劑盒可以運(yùn)用于瓊脂糖DNA回收、PCR產(chǎn)物清潔純化、酶切產(chǎn)物純化回收等多種情況，節(jié)省了需購買多種試劑盒的費(fèi)用，
4.溶膠液/結(jié)合液調(diào)制成為了黃顏色，便于觀察溶膠效果和監(jiān)測(cè)pH值變化從而達(dá)到最佳結(jié)合效果，大大提高回收效率。
5.改進(jìn)的溶膠液配方,大大提高了緩沖能力和穩(wěn)定性，即使樣品變化很大也能將PH緩沖在最佳結(jié)合范圍內(nèi)。
6.快速、方便，不需要使用有毒的苯酚、氯仿等試劑，也不需要乙醇沉淀。 、貼壁細(xì)胞的消化
①吸除培養(yǎng)液，用無菌 PBS、Hanks 液或無血清培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞一次，以去除殘余的血清。
②加入少量 源葉生物 Trypsin-EDTA solution，略蓋過細(xì)胞即可，室溫放置 0.5～2min， 不同的細(xì)胞消化時(shí)間有所不同。
③顯微鏡下觀察，細(xì)胞明顯收縮，并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變
化；或者用槍吹打細(xì)胞發(fā)現(xiàn)細(xì)胞剛好可以被吹打下來，吸除胰酶細(xì)胞消化液。加入含血清的  完全細(xì)胞培養(yǎng)液，吹打下細(xì)胞，即可直接用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
④如果發(fā)現(xiàn)消化不足，則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞消化時(shí)間過長(zhǎng)，未及吹打細(xì)胞，細(xì)胞已經(jīng)有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落， 直接用胰酶細(xì)胞培養(yǎng)液把細(xì)胞全部吹打下來。000～2000g 離心 min，沉淀細(xì)胞，盡量去除胰酶細(xì)胞消化液后，加入含血清的完全培養(yǎng)液重新懸浮細(xì)胞，即可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
2、組織的消化不同的組織需要消化的時(shí)間相差很大，通常以消化后可以充分打散組織為宜。

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