中文名稱:
細(xì)胞凋亡檢測試劑盒IV(CY3)
英文名稱:
產(chǎn)品規(guī)格:20T/00T
發(fā)貨周期:~3天
細(xì)胞凋亡檢測試劑盒IV(CY3)保存條件:-20℃冰凍保存一年。
工作原理:
在機(jī)體內(nèi)部隨時(shí)都在發(fā)生著細(xì)胞的死亡。傳統(tǒng)上用顯微鏡來觀察細(xì)胞的死亡,其特征為核染色質(zhì)的濃縮及碎片的形成。但是這種現(xiàn)象出現(xiàn)的很晚,時(shí)間也很短暫。凋亡的特征是內(nèi) 源性核酸內(nèi)切酶被激活,細(xì)胞自身的染色質(zhì)或DNA 被切割,出現(xiàn)單鏈或雙鏈缺口,并產(chǎn)生 與 DNA 斷點(diǎn)數(shù)目相同的3’-OH 末端。末端脫氧核糖核酸轉(zhuǎn)移酶(Terminal deoxynucleotidyl Transferase)可以將地高辛標(biāo)記的dUTP(DIG-dUTP)標(biāo)記至 3’-OH 末端,DIG-dUTP 結(jié) 合在 DNA 斷點(diǎn)部位,可以通過生物標(biāo)記的抗地高辛抗體(Anti-DIG-Biotin)反應(yīng)后,再結(jié)合 鏈酶親和素-熒光素 CY3(SABC-CY3)。Cy3 在 554nm 激化,在 568-574nm 發(fā)射熒光,呈鮮紅色,從而可以在顯微鏡下觀察到著色的凋亡細(xì)胞。
試劑盒內(nèi)容:
.標(biāo)記緩沖液(Labeling Buffer)ml
2.末端脫氧核糖核酸轉(zhuǎn)移酶(TdT,×20)20μl
3.DIG-dUTP(×20)20μl
4.封閉液(Blocking Reagent)4ml
5.生物素化抗地高辛抗體(× 00)20μl
6.SABC-CY3(× 00)20μl
7.Proteinase K(×200)50μl
8 抗體稀釋液 4ml
注意事項(xiàng):
、懸浮細(xì)胞用此法時(shí)必須經(jīng)離心后才能吸出上清再加DMSO。
2、Formazan 的生成不僅與活細(xì)胞數(shù)成比例,也受作用時(shí)間的影響,因此當(dāng)樣品較多時(shí)測定的OD 值可能隨時(shí)間而變。
3、MTT 溶液為黃色,需避光保存,長時(shí)間光照會(huì)導(dǎo)致失效。當(dāng)顏色變?yōu)榛揖G色時(shí),請勿使用。MTT 溶液在4℃或較低溫度情況下會(huì)凝固,可以20-25℃水浴溫育片刻至全部融解后使用。
4、為了您的安全和健康,請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
NFAT Inhibitor (0 mg) LmethionylLalanylglycylLprolylLhistidylLprolylLvalylLisoleucylLvalylLisoleucylLthreonylglycylLprolylLhistidylLαLglutamic acid; NFAT Inhibitor
Voriconazole (5 mg) DRG 030|UK 0|VRC|Vfend; (αR)α(2,4difluorophenyl)5fluoroβSmethylα(H,2,4triazolylmethyl)4pyrimidineethanol
六水化鈷(25GM) Cobalt Chloride, 6H2O, CAS ; ≥98%
25(S)27hydroxy Cholesterol (0 mg) (25S)cholest5ene3β,26diol; (25S)26hydroxy cholesterol; 25(S)27hydroxy Cholesterol
NG,NGdimethylLArginine (hydrochloride) (0 mg) N5[(dimethylamino)iminomethyl]Lornithine, dihydrochloride; ADMA; NG,NGdimethylLArginine (hydrochloride)
Blasticidine S Blasticidin S Hydrochloride
利格寧,英文名或英文縮寫:Lignin alkalie,級(jí)別:BR,99%,規(guī)格:5克
aCyclodextran 250mg/500mg/5g 原裝 Sigma C
Calciumoxalate乙二酸鈣25毫克CP,98%
頭孢炳(E)異構(gòu)體 Cqfprozil (q)IsoMqr 3
Urokinase雅激酶5克BR,25u/ul,99%
,,3,3四基0.25毫升
34302基53甲基2Amino5bromo3metxylpyridine
山梨醇麥康凱瓊脂基礎(chǔ)shēng huà shì jì容量:5克
2,6二錄本酚 2,6Dichlorophqnol 820
重,英文名或英文縮寫:Ammonium bitartrate,級(jí)別:2.5N,㎜,規(guī)格:25克
小鼠胰高血糖素樣肽(GLP)ELISA試劑盒 ,英文名: GLP ELISA Kit
兔子Ⅰ型膠原(ColⅠ)ELISA檢測試劑盒rabbitCollageypeⅠ,ColⅠELISAKit 96T/48T
犬鉤端螺旋體IgG(Leptospira)免疫試劑盒 Canine Leptospira IgG ELISA Kit
英文名稱HumanCyclinD3ELISAKit人細(xì)胞周期素D3(CyclinD3)規(guī)格:96T/48T
大豆樣品處理試劑盒20次
RatIerleukin2,IL-2ELISA試劑盒大鼠白介素2(IL-2)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
小鼠α2-纖溶酶抑制因子(α2PI)ELISA試劑盒 ,英文名: α2PI ELISA Kit
人抗凝血酶Ⅲ抗體(AT-Ⅲ)ELISA檢測試劑盒HumanAi-ThrombinⅢ,AT-ⅢELISAKit 96T/48T
大鼠激肽原(KNG)免疫試劑盒 Rat kininogen,KNG ELISA Kit
英文名稱RatCINC-ELISAKit大鼠CINC-規(guī)格:96T/48T
可溶性真菌/酵母細(xì)胞膜蛋白(提)制備試劑盒20次
ELISAKitSPA人葡萄球菌蛋白A規(guī)格:48T/96T
細(xì)胞凋亡檢測試劑盒IV(CY3)操作規(guī)程
、在96孔板加入細(xì)胞00μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入00微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入00微升5000~0000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~0μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及00%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成× MTT 溶液。
5、每孔加50μL × MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加50μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(完全培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(完全培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD)×00
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 0%時(shí)的藥物濃度(IC90)
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