Annexin V-PE/7-AAD細胞凋亡檢測試劑盒Annexin V-PE/7-AAD細胞凋亡檢測試劑盒是用紅色熒光染料PE(Phycoerythrin)標記的Annexin V作為探針,來檢測細胞早期凋亡的發(fā)生,可用熒光顯微鏡、流式細胞儀或其他熒光檢測設備進行檢測。
其檢測原理為:在正常的活細胞中,磷脂酰絲氨酸(phosphotidylserine,PS)位于細胞膜的內(nèi)側(cè),但在早期凋亡的細胞中,PS 從細胞膜的內(nèi)側(cè)翻轉(zhuǎn)到細胞膜的表面,暴露在細胞外環(huán)境中。Annexin-Ⅴ(膜聯(lián)蛋白-V)是一種分子量為35-36KD的Ca2+ 依賴性磷脂結(jié)合蛋白,能與PS高親和力結(jié)合?赏ㄟ^細胞外側(cè)暴露的磷脂酰絲氨酸與凋亡早期細胞的胞膜結(jié)合。
另外,本試劑盒中提供的7-AAD可用來區(qū)分存活的早期細胞和壞死或晚期凋亡細胞。7-AAD是一種核酸染料,同PI有著相似的熒光特性,但其發(fā)射光譜較PI窄,對其他檢測通道的干擾更小,在多色熒光分析中是PI的最佳替代品,可與Annexin V聯(lián)合使用。該染料不能透過正常細胞或早期凋亡細胞的完整的細胞膜,但可穿透晚期凋亡細胞或者壞死細胞并與其內(nèi)的DNA結(jié)合。因此將Annexin V-PE與7-AAD聯(lián)合使用時,7-AAD則被排除在活細胞(Annexin V-/7-AAD-)和早期凋亡細胞(Annexin V+/7-AAD-)之外,而晚期凋亡細胞和壞死細胞同時被Annexin V-PE和7-AAD結(jié)合染色呈現(xiàn)雙陽性(Annexin V+/7-AAD+)。
試劑盒組份:
重組人Annexin V/PE(rh Annexin V/PE)—————00μl
7-AAD Viability Staining Solution(20μg/ml)——200μl
4×Binding Buffer————————————————4ml
儲存條件:4℃,有效期一年。
以下是細胞生物學試劑詳細說明:
注意事項
. 微量試劑取用前請離心集液。
2. Annexin V-PE/7-AAD 避光保存及使用。
3. 7-AAD 為潛在致癌物,操作時請采取防護措施,穿防護服、戴手套等。
4. 本試劑盒適用于檢測活細胞,流式細胞儀檢測時,細胞數(shù)量不以應低于×05,,不推薦用于檢測組織樣本。
5. 推薦使用懸浮培養(yǎng)細胞。如果是貼壁細胞,建議適用不含EDTA 的胰酶消化,如消化不當,可能引起假陽性,而用細胞刮子會造成細胞粘連成團,而影響檢測?蓪⒁让赶蠹毎谋4嬖诤2%BSA 的PBS 中,防止進一步的損傷。
6. 細胞固定后可能導致熒光的淬滅,請不要固定樣品。
7. 因檢測細胞的類型、凋亡誘導劑種類、使用的檢測儀器不同,因而流式檢測的熒光補償也不同,因此建議每次檢測均需使用未經(jīng)凋亡誘導處理的細胞作為對照,進行熒光補償?shù)恼{(diào)節(jié)。
產(chǎn)品特點:
.離心吸附柱內(nèi)硅基質(zhì)膜全部采用進口世界著名公司特制吸附膜,柱與柱之間吸附量差異極小,可重復性好?朔藝a(chǎn)試劑盒膜質(zhì)量不穩(wěn)定的弊端。
2.使用了優(yōu)質(zhì)溶膠液,不含傳統(tǒng)溶膠液的碘化鈉和高氯酸鹽,不抑制回收后酶切、連接克隆等下游反應。
3.獨特的溶膠液/結(jié)合液配方,將溶膠和結(jié)合兩種功能統(tǒng)一,因此一個試劑盒可以運用于瓊脂糖DNA回收、PCR產(chǎn)物清潔純化、酶切產(chǎn)物純化回收等多種情況,節(jié)省了需購買多種試劑盒的費用,
4.溶膠液/結(jié)合液調(diào)制成為了黃顏色,便于觀察溶膠效果和監(jiān)測pH值變化從而達到最佳結(jié)合效果,大大提高回收效率。
5.改進的溶膠液配方,大大提高了緩沖能力和穩(wěn)定性,即使樣品變化很大也能將PH緩沖在最佳結(jié)合范圍內(nèi)。
6.快速、方便,不需要使用有毒的苯酚、氯仿等試劑,也不需要乙醇沉淀。
操作步驟:
、貼壁細胞的消化
①吸除培養(yǎng)液,用無菌 PBS、Hanks 液或無血清培養(yǎng)液洗滌細胞一次,以去除殘余的血清。
②加入少量 源葉生物 Trypsin-EDTA solution,略蓋過細胞即可,室溫放置 0.5~2min, 不同的細胞消化時間有所不同。
③顯微鏡下觀察,細胞明顯收縮,并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變
化;或者用槍吹打細胞發(fā)現(xiàn)細胞剛好可以被吹打下來,吸除胰酶細胞消化液。加入含血清的 完全細胞培養(yǎng)液,吹打下細胞,即可直接用于后續(xù)實驗。
④如果發(fā)現(xiàn)消化不足,則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果發(fā)現(xiàn)細胞消化時間過長,未及吹打細胞,細胞已經(jīng)有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落, 直接用胰酶細胞培養(yǎng)液把細胞全部吹打下來。000~2000g 離心 min,沉淀細胞,盡量去除胰酶細胞消化液后,加入含血清的完全培養(yǎng)液重新懸浮細胞,即可用于后續(xù)實驗。
2、組織的消化不同的組織需要消化的時間相差很大,通常以消化后可以充分打散組織為宜。
Oleoyl Oxazolopyridine (5 mg) oxazolo[4,5b]pyridin2yloctadec9Zenone; CAY040Oleoyl Oxazolopyridine
酶抑制劑套裝II, EZBlock EZBlock Phosphatase Inhibitor Cocktail II
Adapalene (250 mg) 6(4methoxy3tricyclo[3。3。。,7]decylphenyl)2naphthalenecarboxylic acid; CD 2|Differin; Adapalene
UCF 0 (0 mg) dihydro5[[5(2nitrophenyl)2furanyl]methylene],3diphenyl2thioxo4,6(H,5H)pyrimidinedione
DLuciferin (potassium salt) ( g) 4,5dihydro2(6hydroxy2benzothiazolyl)4Sthiazolecarboxylic acid, monopotassium salt; DLuciferin (potassium salt)
Phenazepam (00 mg) Fenazepam|BD 98, Phenazepam, 7bromo5(2chlorophenyl),3dihydro2H,4benzodiazepin2one
NFmocN'三本甲基D半胱酸,英文名或英文縮寫:FmocDCys(Trt)OH,級別:特,98%,規(guī)格:25克
89高錄酸銨(*)(易)AMMONIUM PERCHLORATE
FLUORESCENTNEXTGEL.5%熒光 NEXT 膠, .5%蛋白組學級RTsigma
間羥基 3Hydroxy,≥99% 4 G 通用試劑
;麩醇;呋醇 Furfuryl clcohol;2xy7noxyMqthylfurcn;2Furcnccrbinol;Furfurcl clcohol;2FurcnMqthcno
L鳥酸L天冬酸鹽00克
92異乙酯 ≥98%etxyl isobutyrate
metxyl 3(2,5dioxo2,5dixy7noHpyrrolyl)thiopxene2carbo 55232
膦;宜崛阴 Triethyl phosphonoacetate,98% 80 25G 通用試劑
六(青氧基) Nc
小鼠游離甲狀腺素(FT4)ELISA試劑盒 ,英文名: FT4 ELISA Kit
小鼠(EPI)ELISA檢測試劑盒MouseEpinephrine/Adrenaline,EPIELISAKit 96T/48T
人解脲脲原體抗體(UU-Ab)免疫試劑盒 Human ureaplasma urealyticum(UU)aibody ELISA kit
Ratai-doublesandedDNA,dsDNAELISAKit大鼠抗雙鏈DNA抗體/天然DNA抗體(dsDNA)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
組蛋白H2B-K46乙;瘷z測試劑盒0/20次等
MouseAngiotensinconveingenzyme,ACEELISA試劑盒小鼠血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
小鼠白介素23(IL23)ELISA試劑盒 ,英文名: IL23 ELISA Kit
人促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH)ELISA檢測試劑盒humanadrencocoicoopichormone,ACTHELISAKit 96T/48T
Annexin V-PE/7-AAD細胞凋亡檢測試劑盒大鼠抗促甲狀腺素受體抗體(Ab)免疫試劑盒 Rat thyroid stimulating hormone receptor aidoby,Ab ELISA Kit
英文名稱RatPyruvateKinaseM2ELISAKit大鼠同酸激酶M2型同工酶(M2-PK)規(guī)格:96T/48T
酒類精氨酸(arginine)含量化學比色法定量檢測試劑盒20次
ELISAKitLF/LTF人乳鐵傳遞蛋白/乳鐵蛋白規(guī)格:48T/96T
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上海莼試生物技術有限公司Shanghai C-reagent Biotechnology Co. Ltd. 專業(yè)服務于生命科學領域,擁有分子生物學、醫(yī)學、藥學、化學等方面的科研技術團隊,經(jīng)營科研生化試劑、分析試劑、實驗耗材,推出技術先進、質(zhì)量穩(wěn)定的科研產(chǎn)品。為全國乃至于世界各地科研機構(gòu)、工業(yè)、電子、醫(yī)療、科技等領域的客戶,提供系統(tǒng)的產(chǎn)品資源及配套技術服務。推出十幾個種類產(chǎn)品線,部分產(chǎn)品接受定制服務!
公司著力立足于生命科學領域,全力打造品質(zhì)生物科技產(chǎn)品鏈和技術服務鏈!